鸡新城疫的检疫与防疫概述

邓梦玲

（宜宾学院，四川 宜宾 644000）

鸡新城疫是世界动物卫生组织（OIE）规定的必须报告的疾病，同时也是我国一类疫病。就引起禽类死亡的数量而言，新城疫是除高致病性禽流感、传染性支气管炎和低致病性禽流感外最严重的一种传染病。本文对新城疫的检疫和防疫进行综述，以期对该病的诊断和防治提供参考。

1 病原特征

从生物学分类上看，鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒亚科，禽副粘病毒属，只有一个血清型，即禽副粘病毒I型。根据毒力强弱，病毒分为强毒株和弱毒株两类。

2 流行特点

根据丁壮等[1]的研究，我国流行的优势基因型为Ⅶ型，偶见其他基因型，基因Ⅶ型所占的比重呈逐年上升的趋势。除家禽外，在鸽子和双冠鸬鹚中也常分离到强毒NDV，野生鸟类偶见分离。世界范围内鸡新城疫经过了4次大流行，之后NDV宿主范围明显扩大，已报道超过250种禽类可自然感染或实验感染NDV[2]。

3 鸡新城疫的检疫

3.1 临床诊断 鸡感染NDV后观察到的临床症状是非特异性的，可能会出现精神沉郁、羽毛杂乱、张口呼吸、体温过高、厌食、无精打采和体温降低等症状。如果存在淋巴组织的出血和坏死，尤其是肠、脾和胸腺，则具有内脏变性，应该高度怀疑NDV感染[3]。

鸡感染NDV后，大致表现为3种致病型：缓发型、中发型和速发型。缓发型仅表现轻微的呼吸道症状，中发型仅引起幼龄鸡的死亡，速发型能引起各种日龄的鸡发生致死性感染。其中，速发型包括速发嗜内脏型，简称嗜内脏型；速发嗜神经型，简称嗜神经型。由于蛋鸡在生产周期内接受多次NDV疫苗接种，因此具有持续免疫力，除了产蛋量下降外，可能不显示感染的迹象。感染嗜神经性NDV毒株的鸡，常出现神经症状，如斜颈、共济失调，翅膀或腿麻痹，内脏一般不表现明显的病变。

3.2 实验室诊断

3.2.1 病毒分离 采集活鸡的咽喉拭子或泄殖腔拭子或雏鸡的新鲜粪便，也可无菌采集死鸡的肺、肾、肠（包括内容物）、脾、脑、肝、心组织和骨髓，用含有抗生素的pH值为7.0～7.4的等渗磷酸盐缓冲液（PBS）灭菌，处理好后于4℃下3000r/min离心10min，取上清液经0.22μm滤膜过滤除菌。吸取除菌液经尿囊腔接种至少5枚9～11日龄的SPF鸡胚（0.2mL/枚），35～37℃下孵育4～7d，接种后每天检查鸡胚生长情况。收集死胚、濒死鸡胚和培养结束时存活的鸡胚，置4℃冰箱中冷却4～24h，无菌采集尿囊液。

3.2.2 血清学鉴定

3.2.2.1 血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验 新城疫病毒能吸附于鸡、火鸡、鸭、鹅及某些哺乳动物（人、豚鼠）的红细胞表面，引起红细胞凝集现象，且能够被特异性抗体抑制。鸡感染NDV后，其组织中的含毒量较低，不足以产生血凝现象，故需先进行鸡胚接种，再用含毒量较高的3.2.1中的尿囊液作血凝及血凝抑制试验。用HA法检测尿囊液的血凝活性，呈阴性反应的尿囊液需用另一批9～11日龄的SPF鸡胚至少再传代一次，若结果仍为阴性，则判定新城疫病毒阴性。HA检测结果呈阳性的尿囊液，需再用新城疫病毒标准阳性血清进行HI试验，以确认是否有新城疫病毒的存在。

HA和HI既可以在鸡发病后诊断，也可以对未发病鸡群进行诊断。如果检测到未免疫过新城疫疫苗的鸡群有血清抗体存在，则表明鸡群中有野毒感染；如果免疫过新城疫疫苗的鸡群有抗体存在，则应根据抗体滴度判定免疫是否成功，如鸡群整体抗体水平低，则需要重新免疫。

3.2.2.2 琼脂扩散试验 采集被新城疫病毒强毒攻击致死的鸡的组织或器官样品，进行琼脂扩散试验。该法操作简单，特异性好，检出率高，目前被广泛应用于临床。

3.2.2.3 免疫组化技术 免疫组化是利用抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体显色来确定组织细胞内存在抗原，一般用异硫氰盐荧光素或辣根过氧化物酶及碱性磷酸来标记高免血清的IgG抗体，进行抗原诊断。张爽[4]证实该方法具有较高的特异性和稳定性，且重复性较好。

3.2.2.4 免疫荧光（IFA）试验 彭明义等[5]将NDV抗体标记后，检测免疫接种机体和强毒感染毒株的抗原，得出该法具有特异性强、敏感性高的特点，可用于鸡新城疫病毒的检测。

3.2.2.5 酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验是利用物理方法将抗原或抗体吸附在固相载体上进行免疫酶的测定，需要利用酶标仪或经显色剂显色后再肉眼观察。Kumanan等[6]使用Dot-ELISA对ND疑似病例进行检测，显示出良好的敏感性。

3.2.3 分子学方法

3.2.3.1 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） RTPCR法具有快速、灵敏、特异、直观等特点，避免了常规血清学诊断方法中非特异性因素的干扰及敏感性低等问题，可以直观地从分子水平检测到病毒核酸，目前已成为临床上检测和诊断疾病的一个重要发展方向。我国多位学者均根据F基因设计引物，建立了RT-PCR方法，这种方法不仅能够检测尿囊液中的病毒，也能对病鸡组织中的NDV进行检测。

3.2.3.2 实时荧光反转录-聚合酶链式反应（荧光RT-PCR） 实时荧光定量检测技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，收集荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。屈素洁等[7]研究表明，该方法对新城疫病毒的检出量比普通RT-PCR高出100倍，且准确性高，重复性好。Farkas等[8]根据F基因设计一对通用引物，再分别根据强弱毒株设计一条探针，建立了多重荧光定量PCR方法，结果表明该法能够区分NDV的强弱毒株。

4 新城疫的防疫

4.1 监测鸡流行病学 对鸡群的带毒情况进行监测，特别是对强毒株的流行情况进行调查，分析我国新城疫流行规律和特点，制定出针对性的防控措施。

4.2 加强饲养管理 鸡新城疫危害范围广，传染性高，必须采取综合性的生物安全防控措施。加强圈舍内外环境的消毒，将生活区和养殖区隔离，避免引入外界病毒；加强引种检疫，避免外来感染鸡只引起场内感染；养殖场周围搭建围栏，防止野禽进入，与鸭、鹅分群饲养，因为野禽、水禽和鸡之间的病毒株存在双向传播的风险；保持饲料营养均衡，增强鸡群对病毒的抵抗力；减少鸡群的应激反应，防范气温骤变、高氨环境等对鸡呼吸道的损伤。

4.3 疫苗免疫 疫苗免疫是目前预防鸡新城疫的最有效方法。临床常用的疫苗主要有传统的弱毒疫苗、灭活疫苗以及DNA疫苗、基因缺失疫苗、亚单位疫苗、转基因植物疫苗和基因工程苗等。

传统的新城疫疫苗是养鸡场最常用的疫苗种类，具有产生免疫力快的优点，可通过点眼、滴鼻、气雾等方式免疫，取得较好的免疫效果。试验证明，鸡ND基因工程亚单位疫苗具有良好的免疫效果。丁壮等[1]用HN基因工程亚单位疫苗免疫试验鸡，结果产生了高于65%的强毒保护率。孟凡臣[9]将F基因介导转化入马铃薯，获得了12株转基因植物疫苗。转基因疫苗可能是未来疫苗发展的方向之一。

尽管供选择的疫苗种类繁多，但临床上应注意选择使用与流行株基因型匹配的疫苗株，以保证较高的免疫保护力。另外，必须加强鸡群抗体水平的监测，确保免疫鸡群抗体水平维持在有效范围内，以免引起大范围暴发。

5 小结

新城疫的广泛流行给我国养鸡业带来了极大的损失，虽然免疫防控取得了一定的成效，但该病又出现了新的流行特点，如多种病原的混合或继发感染，鸡群的免疫抑制、毒株的变异和进化等。因此，我们应当始终保持警惕，加强ND检疫，特别要重点关注新毒株和野毒感染，同时树立“防重于治”的正确观念，重视和做好生物安全措施。