浅析微生物检验技术在生活饮用水监测中的应用

罗永亮

[摘要] 目的 探究在生活饮用水监测中运用微生物检验技术的价值。方法 纳入2017年4月枯水期93份与2017年8月丰水期93份总共186份生活饮用水样本于2017年3月—2018年3月开展研究。所有生活饮用水样本均采用滤膜法检验（研究1组）与多管发酵法检验（研究2组），统计枯水期与丰水期两组微生物检出情况。结果 研究2组枯水期大肠埃希菌与耐热大肠菌群检出率分别为94.62%（88/93）、91.40%（85/93），相较于研究1组的79.57%（74/93）、58.06%（54/93）更好;丰水期两组耐热大肠菌群检出率分别为79.57%（74/93）、93.55%（87/93），大肠埃希菌检出率分别为80.65%（75/93）、96.77%（90/93），组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 该研究中两种微生物检验技术运用于生活饮用水中具有重要意义，多管发酵法相较于滤膜法更佳，更为值得推广。

[关键词] 生活饮用水;微生物检验;滤膜法;多管发酵法

[中图分类号] R123 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2019）12（b）-0148-03

Analysis on the Application of Microbiological Testing Technology in the Monitoring of Drinking Water

LUO Yong-liang

Yuanzhou District Health Supervision Institute， Guyuan， Ningxia， 756000 China

[Abstract] Objective To explore the value of using microbiological testing techniques in drinking water monitoring. Methods A total of 186 drinking water samples from 93 dry seasons in April 2017 and 93 wet seasons in August 2017 were included in the study from March 2017 to March 2018. All drinking water samples were tested by filter method（study group 1） and multi-tube fermentation method （study group 2）， and the microbial detection status of the two groups in the dry and wet seasons was counted. Results The detection rates of Escherichia coli and heat-resistant coliform bacteria in the two groups were 94.62%（88/93） and 91.40%（85/93）， respectively， compared with 79.57%（74/93），58.06%（54/93） in the study group was better; the detection rates of heat-resistant coliforms in the two groups during the wet season were 79.57%（74/93） and 93.55%（87/93）， respectively. The detection rate of Escherichia coli was respectively 80.65%（75/93）， 96.77%（90/93）， comparison between groups（P<0.05）. Conclusion In this study， two microbial testing techniques are of great significance in the application of water in living applications. The multi-tube fermentation method is better than the membrane method and is worthy of promotion.

[Key words] Drinking water; Microbiological testing; Membrane method; Multi-tube fermentation

水，是人體必不可缺的生命之源。然而随着工业化时代发展，大量工厂私自排放污水、各种化工产业产生的有毒气体导致水资源污染情况越来越严重，人们的生活环境也越来越差[1]。近些年，由于各种环境因素导致的疾病发生率逐年递增，生活饮用水的质量问题也引起人们的广泛关注。既往采取的常规过滤、消毒等处理，虽然能降低水中微生物含量，但相关部门对于饮水质量的监测能够有效减少有害微生物对人体产生的影响[2]，故及时采取科学有效的生活饮用水检验方案是保证饮水质量、维护国民健康的重要前提，该研究于2017年3月—2018年3月以186份样本为例展开研析，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

纳入186份生活饮用水样本作为检验对象开展研究。根据不同检验方式（滤膜法及多管发酵法）分为研究1、2组。所有样本均严格遵循《生活饮用水标准检验方法水样采集与保存》[3]流程进行采集与保存，样本及所使用的设备、仪器等基线资料差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2  方案

1.2.1 研究1组  选用滤膜法检验：①准备相关仪器及设备：如试管、微孔滤膜、显微镜、无齿镊子等。②灭菌：先将微孔滤膜置于烧杯内，注入蒸馏水后利用酒精灯煮沸。③饮用水样本过滤：利用无菌镊子将灭菌滤膜夹起，放至无菌滤床上方，注意保持滤膜粗糙面向上，随后将100 mL饮用水样本注入，打开阀门进行抽滤操作;④样本过滤完成后进行5 s抽气，再使用无菌镊子将滤膜夹起，置于红亚硫酸钠培养基上，注意残留细菌面朝上，最后送入恒温箱（温度调节至37°C左右）进行培养。

1.2.2 研究2组  采取多管发酵法检验：①沿用研究1组设备、仪器;②进行总大肠菌群培养;③取1 mL饮用水样本注入装有10 mL单料乳糖蛋白胨培养液（培养液制备方法：在1 000 mL蒸馏水中加入蛋白胨25 g，氯化钠、乳糖各15 g，取10g牛肉膏进行加热溶解，将pH值调整至7.1～7.5范围，再加入浓度为1.5%的溴甲酚紫乙醇溶液2 mL，完全混匀，分装于试管之中，再置于110～120°C高压蒸汽灭菌器内15～20 min，充分灭菌后取出放入冰箱内贮存备用）的试管中;取10 mL饮用水样本注入装有10 mL双料乳糖蛋白胨培养液的试管中，再取1 mL饮用水样本注入装有9 mL生理盐水的试管中摇匀后取出1 mL混合液注入单料乳糖蛋白胨培养液，对于饮用水样本污染较严重的情况，可适当加大稀释力度;④完成接种后，将所有样本送入恒温箱培养;时间为1 d左右。1 d后取出，若试管内不存在产酸产气情况，则说明大肠菌群为阴性;若试管内存在产酸产气情况，则考虑将试管置于伊红美蓝琼脂板（培养基制备方法：在500 mL蒸馏水中加入琼脂25 g，加热至完全溶解，再将1.5 g磷酸氢二钾、8 g蛋白胨，均匀混合并完全溶解，依据一定的剂量分装于烧瓶内，进行灭菌、冷却、凝固备用）上方转种后再次送入恒温箱培养，培养结束后，对菌落的形态进行观察，染色颜色较深的中心部位后，利用镜检进一步核实。

1.3  观察指标

以《生活饮用水标准检验方法》与《生活饮用水卫生标准》为参考依据[4]，于丰水期及枯水期分别对比两组的微生物检出情况。

1.4  统计方法

应用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  枯水期微生物检出情况

两组杂菌及大肠菌群检出率差异无统计学意义（P>0.05），研究2组耐热大肠菌群与大肠埃希菌的微生物检出率均优于研究1组（P<0.05），见表1。

2.2  丰水期微生物检出情况

两组样本杂菌及大肠菌群检出率差异无统计学意义（P>0.05），研究2组耐热大肠菌群与大肠埃希菌的微生物检出率明显高于研究1组（P<0.05），见表2。

3  讨论

水作为人们日常生活中不可或缺的重要资源，在人类发展史中占据重要地位，生活饮用水的质量问题与人类身体健康及生命安全存在密切联系。根据WHO（世界卫生组织）调查显示，由于水污染问题，易导致全世界大约有12亿人出现肠道传染性疾病，其中有400万儿童死于水污染疾病，因此生活饮用水的质量把控尤为重要[5]。尽管近年来我国加强对生活饮用水质量的监控，使得饮用水经过卫生机构及水厂检测后，出厂时微生物含量已符合国家对饮用水的相关规定（一般为每1 mL饮用水中细菌总数不超过100个）[6]，但由于运输过程中存在各种问题（如水管爆裂、他人原因等）造成水源二次污染，导致水中微生物含量超标。

微生物检验作为衡量生活饮用水质量的重要评价指标之一，其能够保证水质在流行病学方面的安全性及可靠性[7]。目前疾病預防控制中心的微生物检验方法主要包括以下几种：滤膜法、多管发酵法及酶底物法。滤膜法由于操作便利，步骤简单，一般适用于杂质含量较多的水样检验，但是该方法存在准确性较低的弊端，故临床运用并不广泛。而多管发酵法作为检验水样中总大肠菌落的常用方法之一，其具有可重复操作、具体估算大肠杆菌密度、经济实惠等优势，运用该方法计算饮用水样本中细菌含量时，能够将阴性菌及阳性菌同时显现出来，可能与稀释程度有关。由于总大肠菌群属于无芽孢杆菌，因此将试管置于恒温箱中培养，使其充分发酵并产生乳糖，这表示，总大肠菌群不仅存在需氧性，还存在厌氧性[8-9]。尽管多管发酵法步骤较为繁琐、耗时较长，但从专业角度出发，再加上人们对于饮用水水质的要求提高，推荐以多管发酵法检验为主。

根据周秀丽[10]报告显示，其于2016年4月枯水期、8月丰水期各抽取30例微生物检测指标超标的水样作为检验对象，分别采用多管发酵法及滤膜法对所有水样进行检验，结果发现采用多管发酵法对水样样本进行检验，其检验准确率明显高于采用滤膜法进行检验的准确率，有利于疾病预防控制中心对周围水质进行综合评价，与该文结果相似。该次研究结果中显示，研究2组枯水期与丰水期耐热大肠菌群与大肠埃希菌的微生物检出率均优于研究1组（P<0.05），充分说明多管发酵法对于适应温度的总肠道菌群的检出效果更佳。

综上所述，使用滤膜法及多管发酵法对水中微生物进行检验，均具有一定成效，验证多管发酵法效果更佳，值得临床推广与采纳。不过，该次研究由于选取样本数量较少、研究时间较短，存在一定不足，因此，多管发酵法具体的检出率是否优于滤膜法仍有待进一步研究，临床可适当增加样本数量，延长研究。

[参考文献]

[1]  李天蓉，张明洪，张艳，等.生活饮用水微生物检验质量控制[J].中国卫生产业，2017，14（11）：17-18.

[2]  张康.生活饮用水与水源水微生物检验结果探讨[J].中国卫生标准管理，2017，8（2）：6-7.

[3]  吕秋月，张洪轩，张晶，等.2009-2013年大连市生活饮用水水质卫生状况监测结果分析[J].中国校医，2016，30（9）：654，656.

[4]  刘亚玲.新民市生活饮用水水质微生物检验分析[J].中国卫生产业，2016，13（3）：107-109.

[5]  尹红.浅析生活饮用水总大肠菌群两种不同检验方法的比较[J].疾病监测与控制，2016，10（7）：568-570.

[6]  邵云金.生活饮用水微生物检验方法和评价标准分析[J].继续医学教育，2016，30（5）：128-129.

[7]  张云波.生活饮用水中微生物检验的质量控制策略分析[J].中国医药指南，2016，14（34）：297-298.

[8]  高月霞.生活饮用水与水源水微生物检验结果的探讨[J].中国医药指南，2019，17（6）：296-297.

[9]  王凤红.生活饮用水与水源水微生物检验结果探讨[J].中国卫生产业，2018，15（29）：159-161.

[10]  周秀丽.分析生活饮用水微生物检验方法及其评价标准[J].世界最新医学信息文摘，2017，17（96）：141.

（收稿日期：2019-09-18）