壮药白花九里明干预心肌损伤和保护心肌细胞作用的研究

陈天 王彩冰 陈柏桦 欧庾婷 韦显林 赵碧旺

【摘 要】 目的：探讨白花九里明在心肌缺血损伤的干预保护作用及作用机制。方法：60只小鼠分为：正常对照组和模型对照组（给予0.9%氯化钠注射液灌胃），硝酸甘油组（给予13 mg/mL灌胃），白花九里明提取液低、中、高浓度组（分别给予150、300、600 mg/mL灌胃）;同时正常对照组给予0.9%氯化钠注射液，其余各组给予垂体后叶素注射液0.26 U/mL腹腔注射;连续用药 15 d，检测小鼠心电图、心肌总蛋白（TP）、谷草转氨酶（AST）、过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及心肌组织形态。结果：模型对照组的P波时限明显小于其余各组（P<0.01）、J点上移明显高于其余各组（P<0.01）。正常对照组的心率明显低于其余各组（P<0.01，0.05）。白花九里明中浓度组的TP浓度明显高于正常对照组、硝酸甘油组、白花九里明低浓度组，SOD活性明显低于这些组（P<0.01，0.05）;白花九里明高浓度组的TP浓度明显高于其余组、SOD活性明显低于其余组（P<0.01）;白花九里明中濃度组与高浓度组的AST浓度无统计学差异，而均明显低于其余各组（P<0.01）。白花九里明高浓度组和正常对照组的MDA比较无统计学差异，而又明显低于其余组（P<0.01，0.05）;白花九里明中浓度组的MDA明显低于白花九里明低浓度组（P<0.05）。模型对照组心肌细胞数量明显减少，心肌细胞间毛细血管明显扩张，细胞变性坏死区域明显;硝酸甘油组、白花九里明低浓度组和中浓度组的心肌细胞结构优与模型对照组，心肌细胞间毛细血管扩张和变性坏死区域等均有较大的改善;白花九里明高浓度组的心肌细胞结构清晰，没有明显变性坏死和毛细血管扩张现象，与正常对照组心肌细胞结构表达相接近并明显优于白花九里明低浓度组和中浓度组。结论：白花九里明有改善心肌细胞缺血缺氧、干预氧自由基对心肌细胞损伤、促进心肌细胞修复作用，这些作用存在量效正相关。

【关键词】 白花九里明;垂体后叶素;心肌损伤;干预;保护

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2019）22-0017-05

Zhuang Medicine Blumea Megacephala on Research by Intervention of

Myocardial Injury and Protects of Heart Cells

CHEN Tian WANG Caibing* CHEN Bohua OU Yuting WEI Xianlin ZHAO Biwang

Youjiang Medical College For Nationalities，Baise  533000，China

Abstract：Objective Explore the protective effect intervention and mechanism of Blumea megacephala on myocardial injury in mice. Methods Sixty mice divided： Normal control group and Model control group （give 0.9% NaCl injection）， Nitroglycerine group （give 13mg/mL Nitroglycerine），Blumea megacephala low， medium and high concentration groups （respectively give 150， 300， 600mg/ml Blumea megacephala extract）; Intraperitoneal injection： Normal control group give 0.9% NaCl injection， Other groups give 0.26U/mL pituitrin injection. Continuous use of 15d， detection ECG of mice， detection TP、AST、SOD、MDA and tissue section in the heart. Results Model control group the P wave duration obviously shorter than other groups （P<0.01），the J point move up obviously higher than other groups （P<0.01）. Normal control group the heart rate obviously below than other groups （P<0.01，0.05）. Blumea megacephala medium concentration group the TP obviously higher than Normal control group， Nitroglycerine group， Blumea megacephala low concentration group， and SOD activity obviously below than these groups （P<0.01，0.05）. Blumea megacephala high concentration group the TP obviously higher than other groups， and SOD activity obviously below than other groups （P<0.01）. Blumea megacephala medium concentration group and high concentration group the AST are no significant difference， but obviously below than other groups （P<0.01）. Blumea megacephala high concentration group and Normal control group the MDA are no significant difference， but obviously below than other groups （P<0.01，0.05）. Blumea megacephala medium concentration group the MDA obviously below than low concentration group （P<0.05）. Model control group myocardial cell the number is significantly reduced，the capillary expansion between myocardial cells is obvious， and the area of cell degeneration necrosis is obvious. Nitroglycerine group， Blumea megacephala low and medium concentration groups the cardiomyocyte structure was better than that of the Model control group， the intercellular capillary dilation and denaturation necrosis of cardiac myocytes were all greatly improved. Blumea megacephala high concentration group yocardial cell structure is clear， there is no obvious degenerative necrosis and capillary dilation， it is close to the normal control group myocardial cell structure expression， and obviously excellent than Blumea megacephala low and high concentration groups.Conclusions Blumea megacephala have improve myocardial ischemia and hypoxia， intervention oxygen free radicals on myocardial cell injury， promotion of cardiomyocyte repair; These effects have positively correlated in the dosage and effectof.

Keywords：Blumea megacephala; Pituitrin; Myocardial Injury; Intervention; Protects

白花九里明[Blumea megacephala （Randeria）]属菊科植物，为广西壮族民间常用药，外敷用于治疗跌打肿痛，内服用于治疗风湿骨痛、月经不调、产后流血[1-2]。近年研究文献报道，白花九里明具有镇痛消炎、护肝止血、降压升糖等作用[3-7]。而白花九里明对心肌缺血缺氧损伤方面影响未发现有文献报道，本实验采用垂体后叶素制备小鼠急性心肌缺血缺氧损伤模型，以白花九里明民间用量[1-2]换算成小鼠用量[8]给小鼠灌胃，研究白花九里明对心肌损伤的干预保护作用及作用机制，并与临床抗心绞痛药物硝酸甘油[9]的保心作用相比较，为白花九里明的利用与开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SPF级KM小鼠60只，雌雄各半，体质重25～35 g，由广西右江民族医学院动物实验中心提供（实验动物使用许可证号：SYXK桂2017-0004，实验动物生产许可证号：SCXK桂2017-0003）。小鼠饲养环境为室温18～22 ℃、湿度 50 %～60 %、日光照 12 h。实验前适应性喂养1周。

1.2 药材、药品、试剂和仪器 白花九里明采于广西百色市郊（经右江民族医学院民族教研室覃道光教授鉴定为白花九里明植物），晒干备用。硝酸甘油（北京益民药业有限公司，批号：20150314）;垂体后叶素注射液（安微宏业药业有限公司，批号：110311）;0.9%氯化钠注射液（广西裕源药业有限公司，批号：L16062904）;氨基甲酸乙酯（成都市科龙化工试剂厂，批号：20161101）;甲醛（烟台市双双化工有限公司，批号：20170701）;TP定量测试盒、AST测试盒、SOD测试盒、MDA测试盒 （南京建成生物工程研究所，规格：96T，批号分别为20171130、20171202、20171204、20171201）。多功能酶标仪（上海壹侨国际贸易有限公司，型号TriStar LB941）;心电图机（广州市艾迪科逊医疗器械有限公司，型号：ECG-6511），数码显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司，型号：BA2100igital）;离心机（上海安亭科学仪器厂，型号;TGL-16G）;手持台式两用均质器（PRO Scientific Inc Oxford CT USA，型号：PR0200）;三用恒温水箱（江苏金坛宏凯仪器厂，型号：HH-W600）。

1.3 白花九里明提取液的制备 将60g白花九里明干草加入30℃左右的温水2000mL浸泡1h，文火煮沸1h，16层纱布过滤，保留滤液;滤渣再加入30℃左右的温水2000mL文火煮沸1h，16层纱布过滤，两次滤液合起用文火隔水浓缩至100mL（相当于生药600mg/mL），冷却后放入4℃冰箱保存，用时以双蒸水配制成低浓度和中浓度（150mg/mL、300mg/mL）的白花九里提取液。每5天提取1次。

1.4 动物分组与给药方法 取60只健康SPF级KM小鼠随机均分为6组。正常对照组和模型对照组（给予0.9%氯化钠注射液灌胃），硝酸甘油组（给予13mg/mL灌胃），白花九里明提取液低、中、高浓度组（分别给予150、300、600mg/mL灌胃）;正常对照组给予0.9%氯化钠注射液腹腔注射，其余各组给予垂体后叶素注射液0.26U/mL腹腔注射;灌胃和腹腔注射的量均按小鼠 10mL/kg体质重计算，每天1次，连续15d。

1.5 心电图检测 小鼠于末次用药前禁食12h、禁水2h，末次用药后用20%氨基甲酸乙酯腹腔注射麻醉，通过心电图机描记药后10min的心电图肢体Ⅱ导联波型。由同一人检测心电图各波段的情况。

1.6 小鼠心肌匀浆制备及心肌组织病检 于心电图检测后迅速将小鼠剖胸取心脏，取右心组织放入冰冻0.9%NaCl溶液试管中用匀浆机匀浆，制成10%的心肌匀浆离心分离出上清液;取左心浸泡于10%甲醛溶液固定 30 min，再脱水、石腊包埋、HE染色制备组织切片，用数码显微镜检查心肌组织结构并摄像。

1.7 小鼠心肌总蛋白（TP）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的测定 取小鼠心肌匀浆上清液，分别用TP定量测试盒、AST测试盒、SOD测试盒、MDA测试盒按说明书操作，用酶标仪检测出心肌中TP、AST、SOD、MDA的浓度。

1.8 数据处理 应用SPSS 16.0统计软件将数据统计分析，计量资料以均数加减标准差（x±s）表示，多组间均数比较采用方差分析，组间两两比较通过q检验，检验水准：α=0.05，进行双侧检验。

2 结果

2.1 各组小鼠心电图检测结果比较 P波时限：白花九里明中浓度组和高浓度组明显大于正常对照组（P<0.01，0.05），模型对照组明显小于其余各組（P<0.01），硝酸甘油组、白花九里明低浓度组和正常对照组的两两比较无统计学差异（P>0.05）。QRS波时限和P-R段时限各组间两两比较无统计学差异（P>0.05）。模型对照组的J点上移明显高于其余各组（P<0.01），其余各组J点上移的两两比较无统计学差异（P>0.05）。正常对照组的心率明显低于其余各组（P<0.01，0.05），而其余各组间的心率两两比较无统计学差异（P>0.05）。见表1。