高甲基化儿茶素乌龙茶品种的筛选初探

卢秋华 陈志雄 彭建肯 叶章松

引言

茶叶中含有一系列的功效成分已被证实对人体健康有益，特别是儿茶素中EGCG的研究结果，表明它具备很强的抗氧化性，对心血管及肿瘤有积极的作用。近年来，研究者在茶叶中发现另一种儿茶素，甲基化儿茶素 （EGCG3"Me和EGCG4"Me）存在于部分茶树品种中。甲基化 EGCGEGCG3"Me和EGCG4"Me不仅具有显著的抗过敏和消炎等功效，还具有显著的降血压效果，而且效果明显强于EGCG[1]。日本学者通过一系列的临床实验，发现含有高含量甲基化儿茶素的绿茶能够有效缓解花粉过敏症患者的症状，是替代临床药物的一种潜力食品[2][3]。

近年来，工业的快速发展带来了我国空气的严重污染，从而导致我国过敏患者与日俱增。具备抗过敏的茶叶制品受到了广大过敏患者的欢迎，预计市场容量将达到3亿人以上。国内杭州茶科所曾在2013~2014年对我国71个树种进行甲基化儿茶素的筛选，发现在华南区域（福建广州）存在三个大于10mg/g以上的树种[4]，然而并没有进行后续的制茶及产业化。厦门茶叶进出口有限公司针对两岸四地（闽南、闽北、潮汕、台湾）的甲基化儿茶素乌龙茶树品种进行筛选，开发具有抗过敏功效的高甲基化儿茶素乌龙茶产品。

材料与方法

1.仪器与试剂、材料

主要仪器 ：色谱分析条件仪器:Waters 2695高效液相色谱仪。

主要试剂：EGCG4"Me、EGCG3"Me 2种HPLC分析化学标准品，乙腈（色谱纯）等。

材料：潮州单枞-1（山上）、潮州单枞-2（山下）、潮汕宋种-1、潮汕宋种-2、诏安单枞、诏安八仙、漳平乌龙、平和奇兰、安溪观音、永春佛手、永春水仙、永春观音、台湾乌龙、台湾金萱、建瓯水仙、建阳水仙、武夷水仙、武夷肉桂。

2.实验方法

茶叶提取液的制备：称取茶样1.00g，加人40mL50%乙睛，在 30℃、120r/min振荡浸提40min，离心 l0min，上清液定容至 25mL，过0.45um微 孔滤膜过滤，即为HPLC分析液。进样量 10 ml。

色谱条件：X－Terra C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);流动相 a:10mmoL KH2PO4，pH2.5;流动相b:乙腈（色谱纯）;PDA检测器 柱温 40°C。

标准曲线的绘制：精确称取EGCG4"Me、EGCG3"Me标准品2.0mg,溶解于1.0ml水中，准确移取0.1ml稀释为1.0ml,即为0.2g/l供试液,再配成浓度为 0.2、0.1、0.05、0.01、0.005 和 0.0025g/l的系列标准液,进行HPLC检测,绘制标准曲线。

表1 梯度洗脱表

结果与分析

经实验分析发现，甲基化儿茶素含量高的茶树种质资源分布具有一定的区域性特征。通过图1、图 2、图 3 分析：潮州单枞-1（山上）、潮汕宋种-1、潮汕宋种-2、诏安单枞的甲基化儿茶素含量比较高，干重比%＞1%（即 10mg/g）。 潮州单枞-2（山下）虽然没有超过1%，但是也比其他品种高。就潮州单枞而言，同一地域，甲基化EGCG含量秋季＞春季＞夏季。山上种植的茶叶甲基化EGCG明显高于山下所种植的。同一品种，不同地域，甲基化EGCG含量也有所不同，就铁观音而言，在实验中发现，在大叶种的永春佛手，甲基化EGCG极少，甚至没有检出。

图1 春茶甲基化儿茶素含量

图2 夏茶的甲基化儿茶素含量

图3 秋茶的甲基化儿茶素含量

结论

甲基EGCG含量丰富的产品对花粉过敏症治疗效果良好,所以有着非常巨大的潜在消费群体。因此，我们选定了EGCG3"Me含量相对较高的潮州单枞和宋种进行了重复实验,结果与之前的检测结果基本一致,较好地达到了在两岸四地筛选高含量甲基化儿茶素茶树品种特异资源的目的，以便公司进一步开发具有抗过敏功效的高甲基化儿茶素乌龙茶产品。