重庆市甘蓝黑腐病苗期抗病性鉴定试验初报

胡燕 郑阳 周娜 陆景伟 陶伟林

摘   要   以抗性稳定的甘蓝品种为鉴定寄主，采用重庆地区甘蓝黑腐病菌株，研究了不同的接种条件、接种方法对甘蓝抗病性表现的影响。本研究筛选出一套适用于重庆市甘蓝黑腐病苗期抗病性鉴定方法，结果表明：在25 ℃，运用喷雾法或离体滴接法把1.0×108 cfu·mL-1的细菌悬浮液接种于甘蓝4～5片叶期，保湿24～48 h，7 d后调查统计病情指数。此方法可运用于甘蓝黑腐病抗性资源的筛选、品种鉴定、病原菌小种鉴定等方面。

关键词   甘蓝;黑腐病;抗性鉴定

中图分类号：S436.35    文献标志码：A    DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.34.007

甘蓝黑腐病由野油菜黄单胞杆菌（Xanthommonas Campestris PV. Campestris）引起，是一种毁灭性的甘蓝蔬菜重要病害[1-3]。尤其是近年来，甘蓝黑腐病在全国范围内影响甘蓝蔬菜生产，给甘蓝生产带来严重的损失[4-6]。防治甘蓝黑腐病运用化学药剂效果不明显，并且会严重污染生态环境。因此选育和运用抗黑腐病甘蓝品种，是最为安全、经济、环保和有效的方式。在选育抗病品种过程中的一个重要环节就是抗病鉴定工作。在大田期进行黑腐病抗性鉴定工作，往往由于气候、地理等条件而无法进行，而进行室内苗期抗性鉴定，具有发病条件易控制，节省财力、时间、人力、物力等优势。因此，本研究对重庆市甘蓝黑腐病苗期抗病性鉴定的发病条件及接种方法进行研究，以期建立一套适用重庆市甘蓝黑腐病苗期快速抗性鉴定的方法。

1 材料与方法

1.1 供试材料

甘蓝黑腐病为重庆菌株，由西南大学植物保护学院提供。供试甘蓝品种为抗性类型稳定品种京丰1号、京丰2号、京丰3号、京丰4号，重庆市农业科学院蔬菜花卉研究所提供抗病稳定杂交品种：HF-1、HF-2、HF-3、HF-4。

1.2 试验方法

1.2.1 不同的接种条件对抗病性表现的影响

将重庆地区的甘蓝黑腐病菌株28 ℃下培养48 h后，用无菌水配制成浓度为1.0×106 cfu·mL-1、1.0×108 cfu·mL-1、1.0×1010 cfu·mL-1的3个浓度菌液，用离体滴接接种4～5叶期的甘蓝幼苗，施无菌水为对照，筛选最佳接种浓度。用喷雾法将1.0×108 cfu·mL-1的黑腐病悬浮液，于25 ℃接种于2～3叶期、4～5叶期、6～8叶期、9～12叶期的甘蓝幼苗上，施无菌水为对照，于接种后的第7天调查各供试品种的发病程度。

1.2.2 不同的接种方法对抗病性表现的影响

接种方法参考李永镐[7]、黄德芬[8]、芦燕[9]的方法，本试验使用相同浓度的甘蓝黑腐病病原菌悬浮液，采用剪叶法、离体滴接法、离体针刺法、喷雾法四种方法进行甘蓝苗期黑腐病接种试验。

以接种叶片为统计单位，病情分级标准为[7]：0級，无病症;1级，水孔处有黑色枯死点，无扩展;3级，病斑从水孔向外扩展，占叶面积5%以下;5级，病斑从水孔向外扩展，占叶面积5%～25%;7级，病斑从水孔向外扩展，占叶面积25%～50%;9级，病斑从水孔向外扩展，占叶面积50%以上。病情鉴定分类[7]，免疫（I）：病情指数0.00;高抗（HR）：病情指数0.01～11.11;抗病（R）：病情指数11.12～33.33;耐病（T）：病情指数33.34～55.55;感病（S）：病情指数55. 56～77.77;高感（HS）：病情指数77.78～100.00。

病情指数（%）=[∑（病级数×该病级发病叶片数）/（最高发病级数×总调查叶片数）]×100

2 结果与分析

2.1 不同接种条件对抗病性表现的影响

不同接种浓度试验结果表明（表1），不同的接种浓度各品种的病情表现不同。低浓度时，各品种病情区分差异不显著，而高浓度时，各品种病情区分差异也不显著，各品种均发病严重，因此均不能对品种抗性进行正确的评价。而当接种浓度为1.0×108 cfu·mL-1时，各品种的抗感病情区分差异显著，各品种病症差异明显，为抗病评价的最适宜接种浓度。

在4个苗龄试验中（表2），在 2～3叶期接种时，因苗龄小，各品种发病率严重，病情区分无差异。当接种6～8叶期、9～12叶期时，抗性分级差异明显，与田间抗性分级相同，但是苗龄过大，植株自身抗性增加，增加了接种难度，且植株生长速度差异大，不适用于室内接种观察与操作。因此4～5叶期为室内接种的最佳苗龄。

2.2 不同接种方法对抗病性表现的影响

用离体滴接法、离体针刺法、喷雾法、剪叶法4种接种方法进行室内接种。表3表明，离体针刺法和剪叶法在小苗龄时，甘蓝就可发病，但是各品种均发病严重，病情指数均较高，抗病类型表现几乎一致，各品种间的病情区分不显著，不能够对各品种的抗性进行真实的评价。而运用离体滴接法和喷雾法进行室内接种时，甘蓝各品种的病情表现差异明显，各品种的抗病类型区分度大，能够真实地反映各品种间的抗性，并且抗性结果与品种田间鉴定结果相一致。所以，离体滴接法和喷雾法均适用于甘蓝黑腐病室内苗期的快速鉴定。

3 小结与讨论

作为室内接种试验最适的接种浓度，既要达到鉴定植株发病的接种体量，又要使各鉴定植株的病情差异显著，从而达到真实反映鉴定植株抗病性的作用。本研究在25～30 ℃的温度范围内，不同的接种浓度各品种的病情表现不同。低浓度时，各品种病情区分差异不显著，而高浓度时，各品种均发病严重，均不能对品种抗性进行正确的评价。因此选用1.0×108 cfu·mL-1的细菌悬浮液为抗病评价的最适宜接种浓度。而在接种叶龄的选择中，当接种苗龄小于3叶期时，各品种发病率严重，病情区分无差异;而当苗龄超过5叶期时接种，植株自身抗性增加，增加了接种难度，且植株生长速度差异大，不适用于室内接种观察与操作。因此4～5叶期为室内接种的最佳苗龄。

在室内接种方法的选择中，应通过植株在田间的侵入方式来选择，甘蓝黑腐病菌在田间通过水孔和伤口侵入植株[10]。离体针刺法和剪叶法接种各鉴定植株时，其抗病指数均较高，抗病类型表现几乎一致，各品种间的病情区分不显著，不能够对各品种的抗性进行真实地评价。有文献显示甘蓝黑腐病的发病位点在水孔附近[11]，离体滴接法和喷雾法接种时，甘蓝黑腐病病原菌依水孔侵入鉴定植株，与田间侵入环境相似，能够真实地反映鉴定植株的抗病能力。离体滴接法和喷雾法均适用于甘蓝黑腐病室内苗期的快速鉴定，且均操作简单;同时，离体滴接法可以不受苗龄和时间的限制，占用空间、时间较少，而喷雾法对于大规模大面积的室内鉴定，具有快速方便的优势。

本研究筛选出一套适用于重庆甘蓝室内苗期甘蓝黑腐病的鉴定方法：25 ℃，运用喷雾法或离体滴接法把1.0×108 cfu·mL-1的细菌悬浮液接种于甘蓝4～5叶期，保湿24～48 h，7 d后调查统计病情指数。此套方法对甘蓝黑腐病抗性资源的筛选提供重要的理论依据。

参考文献：

[1] Slusarenko J. Mechanisms Resistance to Plant Diseases [M]. Kluwer Academic Publishers， 2000.

[2] Williams PH， Staub T， Sutton JC. Inheritance of  Resistance in Cabbage to Black Rot[J]. Phytopathology，1072（62）： 247-252.

[3] Williams PH. Black rot： A Continuing threat to World crucifers[J]. Plant Disease， 1980， 64（8）： 736-742.

[4] 彭锐，雷建军.甘蓝抗黑腐病研究现状[J].西南园艺，1998（3）：29-32.

[5] 李径略.十字花科蔬菜黑腐病的调查研究[M].西安：陕西科学技术出版社，1992.

[6] 李明远.我国北方大白菜病害现状及发展的浅见[[J].中国蔬菜，1993（4）：38-40.

[7] 李永镐，徐丽波.甘蓝黑腐病苗期抗病性鉴定方法的研究[J].东北农学院学报，1990，21（2）：125-129.

[8] 黃德芬，李成琼，司军，等.甘蓝抗黑腐病离体鉴定方法的研究[J].西南大学学报（自然科学版），2011，33（8）：5-9.

[9] 芦燕.大白菜黑腐病病原菌鉴定和抗病性鉴定方法[D].杨凌：西北农林科技大学，2008.

[10] Staub T， Williams PH. Factors in fluencing black rot lesion development in resistant and susceptible cabbage[J]. Phytopathology， 1972， 62（7）： 722-728.

[11] Bandyopsdhyay S， Chattopadhyay SB. Incidence of black rot of cabbage and cauliflower under different conditions of infection[J]. Indian Journal Agricultural Science， 1985， 55（5）： 350-354.

（责任编辑：敬廷桃）