砂梨种质资源叶片总酚含量多样性分析

范净 陈启亮 杨晓平 张靖国 胡红菊

摘要：为比较不同砂梨种质资源叶片总酚含量的多样性，对117份不同砂梨品种叶片的总酚含量进行测定和分析。结果表明，不同砂梨品种鲜叶中总多酚含量为8.67～32.29 mg/g，平均总多酚含量20.44 mg/g，变异系数22.92%，遗传多样性指数2.09。不同种质类型的平均变异系数为地方品种（23.81%）大于国内选育品种（23.63%）大于国外引进品种（19.03%），平均遗传多样性指数为地方品种（2.10）大于国内选育品种（1.82）大于国外引进品种（1.80）。

关键词：砂梨叶片;总酚;遗传多样性

中图分类号：S661.2;Q946.84         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2019）23-0116-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.025           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Diversity analysis of total polyphenols in leaves of sand pear germplasms

FAN Jing1，2，CHEN Qi-liang1，YANG Xiao-ping1，2，ZHANG Jing-guo1，HU Hong-ju1

（1.Research Institute of Fruit and Tea，Hubei Academy of Agriculture Sciences，Wuhan 430064，China;

2.Laboratory of Integrated Pest Management on Crop in Central China，Ministry of Agriculture，Wuhan 430064，China）

Abstract： In order to compare the diversity of total phenolic content in leaves of different sand pear germplasm resources， the total phenolic content of 117 leaves of different sand pear varieties was examined and analyzed. The results showed that the total polyphenol content in fresh leaves of different sand pear varieties ranged from 8.67-32.29 mg/g， the average total polyphenol content was 20.44 mg/g， the coefficient of variation was 22.92%， and the genetic diversity index was 2.09. The average coefficient of variation of different germplasm types was local breed （23.81%） larger than domestic breeds （23.63%） than foreign introduced varieties （19.03%）， and the average genetic diversity index is that the domestic varieties（1.82） of local varieties （2.10） are larger than the imported varieties （1.80）.

Key words： sand pear leaves; total polyphenols; genetic diversity

多酚類化合物是一类广泛存在于植物体内的次生代谢产物，在植物的根、皮、叶、果各部位都有分布。多酚是一类具有苯环并结合多个羟基化学结构的物质总称，包括简单酚类、酚酸、类黄酮、香豆素、花青素、儿茶素和单宁类等[1]。酚类物质在医药行业可以应用于消炎、抗氧化、预防心血管疾病、预防和改善糖尿病及高血脂的脂质代谢紊乱等方面[2-4]，在食品上可以应用于抑菌保鲜[5]，参与植物的抗病反应[6，7]。

梨是中国南北均可栽培的主要果树，梨果具有润肺凉心、消痰降火等保健作用，梨的果实、果皮、叶片酚类物质种类多样、含量丰富[8-10]。砂梨种质资源丰富，适应性强，在全国各地均有栽培。为有效利用和开发砂梨叶片在医药保健品方面的应用潜力，对 117份不同砂梨种质资源成熟叶片的总多酚含量进行分析，明确不同砂梨品种间叶片多酚含量的差异性，筛选出多酚含量高的特异资源。

1  材料与方法

1.1  材料

叶片采于湖北省武汉市江夏区湖北省农业科学院果树茶叶研究所金水基地国家果树种质武昌砂梨圃（N 30.2931°，E 114.1486°），117份不同的砂梨种质资源为8年生健壮树，管理水平一致。梨树新稍停长后，随机采集一年生枝条中部的成熟叶片，每份资源采集30片叶片，低温冷藏送至实验室，液氮冷冻后置于-80 ℃保存。采集时间为2018年7月10日。

1.2  叶片多酚提取

样品液氮超低温冷冻研磨均匀后称取0.2 g置于50 mL离心管中，加入30 mL的70%乙醇，混合后超声波提取45 min，9 000 r/min离心10 min，收集10 mL上清液待测。每份样品3次重复。

1.3  总酚含量检测

在10 mL离心管中加入上层清液0.2 mL，空白对照加入0.2 mL 70%乙醇。再加入1 mL Folin Ciocalteu（Solarbio，Beijing）显色剂，3 mL 7.5%碳酸钠溶液，5.8 mL纯水，混合均匀，40 ℃水浴20 min后冷却，770 nm测定样品吸光值。以没食子酸为基准物质，计算梨叶多酚含量。回归方程为y=6.566 4x+0.131 1，R2=0.999 7。多酚含量（mg/g）=ρ×V×N/m，式中，ρ为上样液中多酚质量体积比（mg/mL），V为粗提液体积（mL），N为稀释倍数，m为梨叶片鲜重（g）。

1.4  数据分析

数据用Microsoft Office Excel 2010和SPSS 21.0处理，计算117份多酚含量的平均值、最大值、最小值、变异系数、遗传多样性Shannon's信息指数（H'），作分布直方图，采用组内欧式平方距离法对不同砂梨叶片多酚含量进行聚类分析。

2  结果与分析

2.1  不同砂梨资源叶片多酚含量的分布情况

117份砂梨鲜叶中总多酚含量为8.67～32.29 mg/g，平均值为20.44 mg/g，变异系数为22.92%，遗传多样性指数为2.09。分布直方图显示117份砂梨种质资源的总酚含量呈正态分布（图1）。叶片中多酚含量较高的有柳城凤山梨（32.29 mg/g）、金吊子（31.18 mg/g）。

2.2  不同種质类型砂梨叶片总酚含量的遗传多样性

按照地方品种、国外引进品种和国内选育品种（品系）的不同种质类型分析117份砂梨种质资源叶片多酚含量变化的多样性（表1）。结果显示地方品种叶片中平均总酚含量高，变异系数大，多样性指数高。国内选育品种（品系）的叶片平均总酚含量低;国外引进品种变异系数小，多样性指数低。

2.3  砂梨种质资源叶片多酚含量的聚类分析

组内欧式平方距离的聚类分析表明，在遗传距离为5的水平可将117份砂梨种质资源份为5个类群（图2），各类群对比数据见表2。其中聚类1中9份种质资源为叶片总酚含量偏低的种质资源，聚类5中为叶片总酚含量偏高的种质资源。聚类5中叶片为高酚含量的种质资源中有13份为地方品种，1份国内选育品种，1份国外引进品种。

3  小结与讨论

多酚物质在不同的植物中含量和成分不同，在同一作物的不同组织部位亦有差异。本研究分析117份砂梨种质资源成熟叶片中的总酚，表现出丰富的遗传多样性。地方品种表现出平均总酚含量高、选择潜力大、遗传丰富的特点，说明地方品种遗传多样性丰富可能更容易挖掘高多酚含量的特异资源。不同砂梨品种叶片多酚含量多样性分析为梨叶片保健功能的开发利用提供依据，为梨属植物抗逆抗病研究积累数据。

参考文献：

[1] 董  科，冷  云，何方婷，等.植物多酚及其提取方法的研究进展[J].食品工业科技，2019，40（2）：326-330.

[2] 王  佳，王  菊，李亚欣，等.植物多酚的皮肤保护作用机制研究进展[J].中药材，2017，40（3）：733-737.

[3] WILLIAMSON G. The role of polyphenols in modern nutrition[J].Nutrition bulletin，2017，42（3）：226-235.

[4] 代燕丽，邹宇晓，刘  凡，等.植物多酚干预脂质代谢紊乱作用机制研究进展[J].中国中药杂志，2015，40（21）：4136-4141.

[5] 符莎露，吴甜甜，吴春华，等.植物多酚的抗氧化和抗菌机理及其在食品中的应用[J].食品工业，2016，37（6）：242-246.

[6] 王  欣，靳丽梅，徐鹏飞，等.野生大豆接种大豆疫霉根腐病菌后总多酚含量的变化[J].作物杂志，2012（4）：78-82.

[7] ANDREOTTI C，COSTA G，TREUTTER D. Composition of phenolic compounds in pear leaves as affected by genetics，ontogenesis and the environment[J].Scientia horticulturae，2006，109（2）：130-137.

[8] 曾少敏，杨  健，王  龙，等.梨果实酚类物质含量及抗氧化能力[J].果树学报，2014，31（1）：39-44.

[9] KOLNIAK-OSTEK J. Identification and quantification of polyphenolic compounds in ten pear cultivars by UPLC-PDA-Q/TOF-MS[J].Journal of food composition and analysis，2016，49：65-77.

[10] LIN L Z，HARNLY J M. Phenolic compounds and chromatographic profiles of pear skins （Pyrus spp.）[J].Journal of agricultural and food chemistry，2008，56（19）：9094-9101.