泰国在有猪呼吸道疾病综合征农场中检出猪圆环病毒3型

张爱琼 ，梁海英，曾智勇 （编译）

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

主持国家自然科学基金项目1项，省厅级项目3项；参研贵州省农业科技攻关项目5项，其他各类省厅(局)级项目13项；获“贵州省科学技术进步奖三等奖”3项。先后发表各类学术论文180余篇，其中SCI论文3篇，一级学报论文12篇，核心期刊90余篇；参编养殖技术丛书3册，参编专业类著作2册，参编《畜牧兽医行政管理学》（国家规划教材）。

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）是圆环病毒科圆环病毒属的单链无囊膜DNA环状病毒。PCV含有两个主要的开放阅读框ORF1和ORF2，分别编码Rep复制蛋白和Cap衣壳蛋白。目前已知其有三种基因型：PCV1、PCV2和最近发现的PCV3。2016年，Phan等在美国各地区的哺乳仔猪、9～10周龄患有心肌炎或呼吸系统疾病的育肥猪中首次检测出PCV3；几乎同一时间，Palinski等也从患有猪皮炎肾炎综合征、繁殖障碍的母猪组织样品中检测出了PCV3，证实了PCV3的存在以及在美国的流行。随后，Shen、Ku、Zheng等先后报道在中国华南、山东等地猪场也检出PCV3；Kwon等对韩国6个道的73个不同养殖规模猪场进行PCV3检测，检出率较高；此外，Stadejek、Faccini、Tochetto等分别报道在波兰、意大利、巴西的猪场中检测出PCV3。这些报道表明：PCV3在许多国家和地区存在，已经遍及美洲、亚洲及欧洲。猪呼吸道疾病综合征（PRDC）是影响全球猪业的主要呼吸道疾病，该疾病的特征是猪只生长和饲料效率降低，临床症状包括咳嗽、呼吸困难、发热和厌食，多种病原体（PRRSV、PCV2和SIV）共同感染是导致PRDC的主要原因。介于PCV3在世界范围内的广泛流行且导致的临床症状与PRDC有相似之处，Kedkovid 等对泰国患有PRDC的农场进行PCV3鉴定，确定PRDC感染猪群中是否有PCV3的存在。

Kedkovid等研究的样本来自朱拉隆功大学兽医诊断实验室（CU-VDL）的组织收集库，所有样本均在2017年7月和9月从泰国巴真府的3000头母猪群收集，包括新鲜冷冻组织、福尔马林固定的石蜡包埋（FFPE）组织样品、临床上健康和显示PRDC相关迹象的猪血清样品以及20头母猪1～4胎次的血清样品。使用Palinski先前公开的引物进行PCV3的PCR检测及全基因的扩增；通过将FFPE组织样品进行苏木精-伊红（HE）染色以及用LK003的肺组织样品进行原位杂交（ISH）来进行组织学检测，其中ISH是将PCR DIG标记混合物靶向PCV3 ORF1的引物制备地高辛配基（DIG）探针，引物序列 F1：5′-ATACTGCAGGCATCTTCTCCG-3′，F2 ：5′-TATTGTGGAGTGTGGAGGCAGT-3′（ 预 扩 增片段大小336 bp），并以PCV3阴性猪（通过PCR鉴定）的肺组织切片和没有DIG探针的LK003肺组织切片的ISH用作对照。最后对检测结果使用GraphPad Prism 5进行统计分析。

研究结果表明：从8头显示PRDC相关临床体征的猪组织（肺和淋巴结）样品中检测出有5头PCV3呈阳性（LK000-LK004）。PCV3阳性动物的常见肉眼病变包括红肺、硬肺、气管支气管和腹股沟淋巴结肿大；显微镜检查病变为支气管间质性肺炎、淋巴结坏死和淋巴结组织细胞增生，其中LK003显示出最严重的病变，肺泡腔中的细胞碎片严重积聚并且单核细胞呈弥漫性的肺泡间隔增厚，类似于增殖性和坏死性肺炎（PNP），其他猪只没有观察到PNP相关病变。Kedkovid等通过PCR技术对PCV3基因组进行扩增与测序，从PRDC感染的农场猪群中鉴定出泰国PCV3株（PCV3/Thailand/PB01/17），GenBank登记号为MG310152，并且对其全基因进行分析，结果显示泰国PCV3株与韩国PCV3/KU-1602菌株核苷酸同源性最高为99.60%。在该农场PRDC感染的猪中检测出PCV3呈阳性的情况下，收集5～18周期临床健康猪和PRDC相关临床体征的猪血清样品用于PCV3的PCV3检测，检测结果显示受PRDC影响的猪PCV3感染率和PCV3病毒滴度与临床健康猪相比更高。通过对血液样品进行检测，发现PRDC 感染猪（60%，15/25）中PCV3 病毒血症的发生率显着高于临床健康猪（28%，7/25）。

总的讲，在受PRDC影响的泰国农场猪群中鉴定出PCV3，与临床健康猪相比，受PRDC影响的猪表现出更高的PCV3感染率和更高的PCV3病毒滴度，这些结果证实了泰国受PRDC感染的农场中存在PCV3。这是泰国第一份关于PCV3的报告，也是首个在农场受PRDC感染的猪群中对PCV3感染的研究。在感染PRDC后PCV3的发病机制还需要进一步的研究阐明，对于PCV3的致病性和可能带来的危害还应开展更大规模的研究。