不同保藏温度对黑牛肝菌菌种活性的影响

崔文浩 郑江程

（衢州市农业科学研究院，浙江衢州324000）

黑牛肝菌（Phlebopus portentosus）又名暗褐网柄牛肝菌，隶属于担子菌门、伞菌纲牛肝菌目、小牛肝菌科、脉柄牛肝菌属[1]。黑牛肝菌味道鲜美、营养价值高，是一种极具经济价值的食用菌品种。由于黑牛肝菌是一种高温型食用菌，其菌丝在不当低温条件下保藏容易死亡，从而影响菌种的保藏效果和继代繁殖[1]。笔者研究了不同保藏温度对黑牛肝菌菌丝生物学特性的影响[2]，筛选出适合黑牛肝菌菌种保藏的温度条件。现将试验结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 供试材料

菌株黑牛肝菌菌株是云南西双版纳地区引进，在衢州当地人工栽培的子实体分离得到。

1.2 培养基配方

菌种培养基配方：松树叶200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，谷物8 g，K2HPO41 g，MgSO40.5 g，水1 L，pH 6。

栽培料配方：发酵木屑69%，谷物20%，玉米粉10%，糖1%。

1.3 试验方法

将长满菌丝的斜面培养基分别放置于4℃、8℃条件下冷藏15 d，30 d，45 d（28℃常温保藏45 d菌株作为对照组，下同）。试管样品取出后在28℃下活化3 d，转接到7 cm平板培养基上，在28℃恒温培养箱中恢复培养。每个处理5个重复。观察、测量各处理间菌丝的萌发率、菌丝生长速度、菌丝形态等。

将培养料基质拌匀后分装到直径24 mm的试管中，灭菌2 h。将低温处理的黑牛肝菌试管活化后转接到7 cm平板培养基上，培养20 d后选取大小相同的牛肝菌菌丝块转接到试管中。每个处理接种5个重复。记录牛肝菌菌丝的发菌速度。

2 结果与分析

2.1 不同保藏温度对黑牛肝菌菌株成活率和菌丝形态的影响

表1结果表明，黑牛肝菌菌株在4℃保藏15 d后活力下降，接种萌发率只有40%。当保藏时间超过 30 d，菌株全部失去萌发能力。而在8℃条件下，菌株保藏超过45 d仍然有萌发能力。观察平板培养基上的菌丝形态，如图1。4℃保藏15 d和8℃保藏45 d的菌株气生菌丝发达，菌落边缘有一圈明显的白色绒毛，菌丝后期容易分泌出褐色水珠。8℃保藏15 d与对照菌丝形态相似，菌丝贴于培养基生长，会形成一层紧实的菌皮，且生长后期少量分泌或不分泌褐色水珠。8℃保藏30 d的菌落气生菌丝和匍匐菌丝相互混合，菌落形态较8℃保藏15 d浓密。

表1 不同保藏温度对黑牛肝菌菌种的保藏效果

图1 不同保藏温度牛肝菌在平板培养基上的生长情况

2.2 不同保藏温度对黑牛肝菌菌丝体生长速度的影响

对平板培养基内所有萌发的菌株进行十字交叉法测量菌丝生长速度，如表2。结果表明，菌株萌发生长的前期（10 d内），4℃保藏15 d的菌丝生长速度与8℃保藏15 d、8℃保藏30 d有显著差异。说明4℃保藏15 d的菌株活化、萌发速度最快，但菌丝生长10 d以后，菌丝生长速度下降，不同保藏温度的菌丝生长速度没有显著差异。

表2 不同处理黑牛肝菌菌丝在平板培养基上的生长速度

2.3 黑牛肝菌菌株在培养料基质上发菌情况

选取经活化、大小相同的黑牛肝菌菌块转接到装满木屑培养料的试管中，观察菌丝在基质中的发菌速度，如表3。结果表明，在萌发生长前期（30～40 d），4℃保藏15 d的菌株菌丝和8℃保藏45 d及对照的菌株生长速度快且与8℃保藏15 d差异显著。接种40 d后8℃保藏30 d的菌丝生长速度下降，4℃保藏15 d、4℃保藏45 d和对照三个处理的菌株发菌速度与8℃保藏15 d、8℃保藏30 d差异显著。

表3 不同处理黑牛肝菌转接在培养料基质上的菌丝长速

3 小结与讨论

试验研究了4℃和8℃两种低温对黑牛肝菌菌种活力的影响。结果表明，4℃低温条件保藏15 d后黑牛肝菌菌种萌发率只有40%，保藏30 d后黑牛肝菌菌种全部失活，说明黑牛肝菌菌种不适合在4℃条件下保藏。而在8℃保藏超过45 d，黑牛肝菌菌种依然具有较好的活力，说明8℃可以作为长期保藏黑牛肝菌的温度条件。

不同处理间菌落形态差别很大。在8℃保藏15 d和30 d的菌株在平板培养基上菌落以匍匐菌丝为主，且菌丝萌发速度较慢。这可能与黑牛肝菌菌丝在8℃下处于休眠状态，活化萌发需要一定时间有关。4℃保藏15 d的黑牛肝菌菌落气生菌丝发达，且容易分泌褐色水珠；同时转接菌丝在平板培养基和培养料基质上的发菌速度较快，与未冷藏的对照菌株没有显著差异。这可能与短时间4℃处理后黑牛肝菌菌丝表现出低温抗氧化应答，抗氧化酶活性提高有关[3]，需做进一步的研究。