探讨影响金银花组织再生率的因素

许兰杰，余永亮，谭政委，杨红旗，董薇，梁慧珍*，芦海灵，李春明

（河南省农业科学院芝麻研究中心，河南郑州 450002）

金银花（Lonicera japonica Thund.）又名忍冬，是忍冬科忍冬属多年生常绿藤本植物，是一种珍贵的观赏树种和绿化材料，也是临床常用中草药，具有清热解毒、凉散风热之功效。宋代以前只用茎和叶，明代则茎、叶、花同等入药，但是不同部位其化学成分不同，功效不同。

1 外植体

1.1 外植体

金银花不同组织部位均可以作为外植体用于组织培养，主要有带芽茎段、顶芽、叶片。李利改等[1]以金银花叶片作为外植体诱导愈伤组织，基础诱导培养基为B5+IAA 1.0mg/L+6-BA 2.2mg/L+KT 2.0mg/L+LH 2000。刘伟等[2]和任敏[3]以金银花带芽茎段为外植体成功诱导出腋芽，二者区别培养基中激素不同（MS+BA 0.1 and 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L）。赵贤慧[4]和陈明霞等[5]以金银花的顶芽为外植体，最适培养基均为：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1～0.2 mg/L。王文静等[6]以红金银花顶芽、当年生幼茎和叶片为外植体，发现外植体类型对红金银花组织培养的污染率及愈伤组织的诱导率均有影响；顶芽启动愈伤组织时间短、生长速度快、成活率最高，为最佳外植体。

1.2 灭菌方法

针对金银花种苗的特殊性，不同研究者总结了一套金银花外植体灭菌的最佳方法。赵贤慧等对红金银花外植体采用75%的乙醇30s+0.2%升汞5min 处理，可以达到理想的灭菌效果[7]。任敏采用75%的乙醇45 s+0.15%升汞灭菌8min 可以对带腋芽茎段灭菌[3]。文明玲等采用75%乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外灯照射30min+75%乙醇30s+0.1%升汞8min、75%碱化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外灯照射30min+75%碱化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外灯照射60min+75%碱化乙醇30s+0.1%升汞8min 等5 种方法处理金银花外植体，结果表明紫外灯照射30min+75%碱化乙醇30s+0.1%升汞8min 方法可以显著降低外植体污染率，并提高萌发率[8]。总之，研究者采用的基本药品均为75%乙醇和升汞，区别在于优化了75%乙醇处理时间和升汞浓度。

2 基因型

大量研究表明，基因型对组织培养和植株再生影响较大。目前已经在水稻、玉米、小麦和番茄等作物上开展了相关研究，而金银花组织培养针对于一种金银花品种的快繁，未研究同一组培条件下不同基因型金银花的组织再生率差异。于惠敏等[9]研究了11 个番茄基因型品种的组织培养和植株再生能力，发现不同基因型的植株再生能力存在着明显差异。孙建昌等[10]研究了4 个水稻品种的组织培养特性，表明不同外植体的组织培养特性差异较大。赵贤慧[4]以红金银花的顶芽为外植体，经过初代培养、继代培养和生根培养获得了理想的生根苗。任敏[3]以河南封丘金银花品种带腋芽茎段为外植体，可以获得无菌苗。

3 培养基种类

金银花用于外植体诱导愈伤组织的基础培养基有MS 和B5，以MS 应用较多，差异主要在于激素的浓度。赵贤慧[4]发现培养基类型对愈伤组织诱导率有一定的影响，但是小于不同浓度NAA 对愈伤组织诱导率的影响。过低或过高浓度的生长调节剂都不利于愈伤组织的生长。植物组织培养常用的生长调节剂有NAA、6-BA、KT。王文静等[6]发现对红金银花顶芽诱导率最高的植物生长调节剂组合为 KT 1.5mg/L+6-BA 1.5mg/L+a-NAA 0.5mg/L。王慧俐和江小红[11]对灰毡毛忍冬茎段诱导培养，最佳激素为6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L，萌发率为100%。覃拥灵[12]以宜州当地主要金银花品种皱叶忍冬的茎段为外植体，诱导培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L。单广福等[13]发现花蕾下部为外植体，诱导培养基为MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.01mg/L+2,4-D 0.5mg/L 时诱导率可达100%。

4 展望

金银花外植体主要有叶、茎尖、茎等，依据不同的诱导培养基配方，不同外植体的诱导率均达到100%；对金银花愈伤组织诱导率影响较大的因素主要是激素配比。目前，尚未有进行不同金银花基因型对愈伤组织诱导率的比较试验。本文为金银花组织培养工作提供一定的参考。