非洲猪瘟的诊断及防控措施

王宏栋 王玉赛 李冬刚 韩 冰 谢 婕 陈芳芳

（1 德州市农业科学研究院， 山东德州 253015； 2 德州市农业农村事业发展中心， 山东德州 253015）

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）引起的一种烈性传染病，具有高发病率和高致死率，且该病毒在环境中存活时间长，难以扑灭。ASFV 不感染人，不会对公共卫生造成直接危害，但是会对猪及猪产品的交易，尤其以猪肉作为主要蛋白来源的国家造成严重的社会和经济影响。2018 年8 月至2019 年7 月31 日我国有31 个省份发生非洲猪瘟疫情累计150 余起，扑杀生猪超百万头，造成国民经济巨大损失。目前全球还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗，因此提高养猪场对非洲猪瘟病毒的快速诊断以及综合防控能力显得尤为重要。

1 非洲猪瘟病毒简介

非洲猪瘟病毒是一种特殊的病毒，是非洲猪瘟相关病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，同时也是迄今发现的唯一虫媒病毒。ASFV 为有囊膜的双链DNA 病毒，基因组大小为170～194 kb，我国流行毒株的大小为189 kb左右，属于强毒株，基因组含可变区和稳定区，中间是稳定区，两端是可变区，并有发夹环，易于变异。ASFV在环境中具有很强的生存能力。在不同的介质中，特别是在富含有机物的环境中存活能力很强，在pH 值3.9～11.5 的条件下活性不受影响，在4℃保存的带骨肉中至少存活5 个月，冷冻猪肉中能存活15 周，半熟肉及泔水中也可长时间存活；- 70℃冷藏条件下，血液中的病毒能存活18 个月，脾脏组织中ASFV 感染力2 年不受影响[1]。

ASFV 易感宿主是家猪、野猪和钝缘蜱，其传播途径复杂。可通过直接接触感染动物或经感染病毒的钝缘蜱叮咬传播，也可直接或间接接触感染猪的排泄物或分泌物以及饲料、设备、衣物、运输工具等病毒污染物传播。目前有研究表明ASFV 能通过2 m 范围内的短距离气溶胶传播[2]，猪舍内的螯蝇作为机械的传播媒介也能将ASFV 传播给猪，但病毒在其体外存活不超过2 天[3]。

2 非洲猪瘟的诊断

2.1 临床诊断

ASFV 自然感染的潜伏期为4～19 d，ASF 临床表现取决于感染毒株的毒力、接触时间以及感染途径。高毒力毒株导致超急性和急性发病，中等毒力毒株感染表现多种临床症状，分别有急性、亚急性和慢性或不明显症状，低毒力毒株造成亚急性、慢性或不明显的发病[4]。在我国目前主要表现为急性型，死亡率高达90%～100%，临床症状与猪瘟、猪丹毒以及高致病性蓝耳病类似，猪群发病时多是出现厌食、高热，耳朵发绀、全身性的广泛出血，怀孕母猪出现流产，在发病高峰期剖检可见肠道弥漫性出血，脾脏异常肿大、发脆，呈现黑红色，在发病最后阶段可见猪的急促呼吸，以及肺水肿引起的鼻腔分泌大量黏液[5]。

2.2 实验室诊断

非洲猪瘟的临床症状及病变只能作为疾病诊断的参考，真正确诊必须依靠实验室诊断。现行ASFV 检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）、等温扩增技术（CPE/RPA/LAMP）、夹心ELISA 以及胶体金试纸条等。其中荧光定量PCR 为世界卫生组织（OIE）推荐的ASFV 检测方法，其灵敏度高、污染率低[6]，对于特急性、急性或亚急性ASF 感染病例，qPCR 为首选的检测技术，而夹心ELISA 和胶体金试纸条只有在出现症状时才能够检测出。Tignon 等[7]针对P72 基因建立的TapMan 荧光定量PCR 灵敏度达5.7～57 拷贝；哈登楚日亚等[8]基于B646L（P72）基因设计实时荧光RPA 引物和探针最低可检测10 个拷贝的DNA分子；崔贝贝等[9]基于E184L 基因建立的TapMan 实时荧光定量PCR 的检测下限为1.51 拷贝/μL 的重组质粒，具有较强的特异性和较高的灵敏度。

微滴数字PCR（Droplet digital PCR, ddPCR）是近年来兴起的一种新的绝对定量技术，通过极度稀释实现理论上的单分子扩增，然后用终点法PCR 和泊松分布计算出样品的原始浓度[10-11]。与qPCR 相比，数字PCR 具有更高的灵敏度，且无需标准品，采用终点信号扫描计数，不依赖Ct 值，能有效克服PCR 抑制剂的影响，能灵敏地验出ASFV 病毒。邬旭龙等[12]针对K205R 基因设计特异性引物和TaqMan 探针，建立的ASFV qPCR 和ddPCR 检测方法线性关系较好（R2≥0.998），ddPCR的最低检测限度可达到0.36 拷贝，检测灵敏度是qPCR的10 倍，且具有很高的特异性和重复性。

在ASF 防控中要根据实际情况采用不同的监测方案：如预防阶段，实施监测系统感染病毒测试，以血液和口腔组织为样品，对猪群进行随机抽样；发病阶段，需要先分离，在采样过程中要避免血液和组织样品导致病毒蔓延；复养阶段，用PCR 和ELISA 对哨兵猪及补栏猪进行全面监测。

3 非洲猪瘟防控的难点及重点

我国的非洲猪瘟防控取得了阶段性胜利，但在这个过程中也发现了防控的难点：如中小养殖场（户）的猪群养殖密度过大、空气污浊、营养不合理等，其生物安全性较差；地方缺乏必要的检测条件，出现疑似病例不能及时发现、做出早期诊断；地方猪产品需求与生猪及生猪产品加工、运输调运之间的矛盾；餐厨废弃物等高风险饲料喂养监管难等[13]。

在防控非洲猪瘟过程中要牢固守住核心种猪场、地方猪保种场、规模化养猪场以及生猪主产区，因为这些关系着我国养猪业未来的发展和猪肉稳定供应的保障[13]。

4 防控措施

4.1 养殖场（户） 做好自救

目前世界范围内尚没有针对ASFV 的有效疫苗和特效药，而且由于ASFV 自身的特殊性，开发特异性疫苗有一定难度，因此，当前养殖场（户）除了提高自身生物安全水平保护易感猪群别无他法。养殖场（户）建场可遵循“堡垒化”建设，外部设置有形或无形的隔离带，遵循单向流动，内部实行适度规模养殖，严格实施封闭管理，减少外来车辆及人员进入，进出车辆严格执行清洗消毒[14]，常用的消毒剂有1%苛性钠、过硫酸氢钾类、3%邻苯基苯酚和碘化合物等[15]；规模化养殖场坚持“自繁自养”原则，如必须引种，需严格检测，确认为ASF阴性方可引入；严禁使用泔水喂猪，新进饲料尽量放置4 周以上再行使用，必要时可以参照国家规定在饲料中添加清热解毒、益气凉血类中药（如肉桂酸等）进行预防。

4.2 屠宰厂严把生猪进出

屠宰厂需明确屠宰经营者作为防控非洲猪瘟的主体负责人，不断提高自身的依法经营意识和对疫病判断的能力[16]。屠宰厂遵循就近就地收购生猪原则，严禁从疫区或隔离区调入生猪，加强进场生猪的查证与检测，做好屠宰与检疫工作同步，落实自检制度，生猪产品凭“两章两证”出厂。做好严格消毒，严格管理好猪血，做好生猪来源和产品、猪血等副产品去向相关记录。必要时可设置临时快速检测点，对疑似病猪进行快速检验，避免发生疾病蔓延。

4.3 饲料厂做好风险评估

非洲猪瘟靠接触传播，若饲料被活病毒污染，入口或鼻后，可以感染猪群。饲料厂要做好原料控制，采购原料必须经过检验排除原料污染，必要时采取高温制粒（实验表明85℃3 min 就可），或者选购的原料在储藏室放置月余降低污染概率，必要时可添加一些中药添加剂以提高猪群的免疫力。

4.4 政府部门严格防控非洲猪瘟

各省市的政府应该严守生猪及生猪产品调运关卡，加强区域化和进出境管理，加强产地检疫和运输检疫，支持开展无疫区建设。调用官方兽医，通过临床观察并借助实验室快速检测技术对调运前、调运中和调运后的生猪及猪产品进行检测，进出关卡必须证件齐全，防止疫情扩散；鼓励企业从调运生猪向调运猪肉制品等转变，降低运输过程猪只感染非洲猪瘟病毒的风险，激励企业借鉴欧美等先进的技术研发新型运猪设备，研发全封闭实时定位设备，做到猪只运输过程中的全程监督[13]。

4.5 谨慎恢复养殖

发生非洲猪瘟疫情的养猪场，在完成扑杀、清洁、彻底消毒后，至少空圈40 d 以上；同时，在复养前要仔细规划养殖方式，在正式复养前需在整个猪舍中先引进检验呈阴性的哨兵猪，对哨兵猪饲养45 d 后全部进行采样检测，在没有出现阳性的条件下才能正式恢复养殖。

5 小结

非洲猪瘟给我国养猪业带来重大损失，且我国已出现野猪感染非洲猪瘟的案例，这就意味着我国可能成为非洲猪瘟的自然疫源地，野猪感染呈现分布相对分散、活动范围难以控制的特点，导致疫情扩散风险高、防控难度大，根据我国国情和国外的经验，非洲猪瘟的根除将是一场持久战。养猪企业要在防控过程中不断总结经验，吸收国外先进防控技术，提升猪场生物安全水平，合理选择猪场消毒方案，加大生猪及生猪产品监管力度，设计安全的生猪调运车辆，妥善处理猪的尸体与污染物等，全面遏制疫情进一步扩散。在防控过程中也要发挥我国特有优势，即可以借助我国特有的中兽医平台进行进一步研究，开发抑制ASFV 的中兽药添加剂。