快速测试片在微生物中的应用

□ 李 静 许寿丹 通标标准技术服务有限公司南京分公司

微生物快速测试片具有良好的测试效果，测试技术在测量过程中有更多的优势，产品的使用检品相对较小，且易于储存，便于携带和使用，测试技术也不需要消耗大量资金，不需要浪费大量的资源，也不会在检测过程中产生大量的污染物，可以减少对环境的污染。微生物快速测试片还可接种多种细菌，进而缩短检测时间，抑制细菌繁殖。下面进行详细阐述。

1 以滤纸为载体的测试片

1.1 菌落总数测试片

一般来说，该类测试片是以滤纸为主要测试载体的测试片，在测试过程中，需要首先筛选出密度相对均匀、吸附能力较好且白色的滤纸，将其裁剪到统一规格标准（4.0×5.0 cm）。之后，检测人员需要将氯化三苯四氮唑加入无菌培养标本中，将裁剪好的滤纸浸泡在其中，保证测试环境的干燥性，并对浸泡的滤纸进行密封保存。氯化三苯四氮唑作为一种氧化还原剂，当其与氢接触后，就会产生红色点状物，即三苯甲酯。因此，只需要观察滤纸上出现的红色点状物，就可以确定细菌的数量。但是需要格外注意的是，要防止氯化三苯四氮唑在使用过程中用量过大，进而抑制细菌的生长，最终不利于微生物的准确检测。在检测过程中，要将其放到37 ℃的培养箱中，培养16～18 h，之后观察滤纸上出现红色点状物的数量，操作完成后对其进行焚烧处理[1]。

1.2 大肠菌群测试片

大肠杆菌测试片在中国疾病控制和预防中心得到了广泛应用,在食品微生物检测中应用，可以提高检测的准确性：通过粪大肠杆菌的研究试验，相关人员确定了科学的生产工艺，与传统的测试结果比较后证明了肠道菌群测试检测合格率为95%。用乳糖、蛋白胨、胆盐、氯化三苯四氮唑和琼脂在pH 6.8～7.0、115 ℃高温灭菌15 min，60 ℃条件下浸泡，55 ℃下干燥。待测液体加入之中，37 ℃下培养16～18 h即可观察检测结果。结果发现，纸上的红斑周围有一圈黄色的光晕，即为阳性。如果红斑周围有一个紫蓝色的晕，则认为是阴性。若红色斑点接触酸性样品后会变黄，培养后不会出现红色斑点，为阴性。在片剂法的试验中，应做好培养液的制备。为了保证试验的准确性，应考虑生物酶的作用，用灭菌过的滤纸吸收培养基中的溶液。在纤维的膨胀作用下，细菌大量生长繁殖。氯化三苯四氮唑还原为红色后，形成红色细菌。产生黄色光晕后，细粒会分解乳糖，产生酸性物质，使指示剂变黄。除此之外，使用氯化三苯四氮唑或琼脂粉时，应控制用量，太多或太少都会影响测试结果的准确性。

1.3 大肠菌群、大肠杆菌纸片荧光法

根据细菌会产生某些代谢健康物质或代谢物的特点，建立了一种大肠菌群、大肠杆菌纸片荧光法。将待测细菌所需的营养物质、酶底物和抑菌化合物放在纸上，检测大肠菌和大肠杆菌产生的相关酶的活性，以达到计数目的。现有的两种测试片分别可以检测人肠杆菌和大肠杆菌，在37 ℃下培养24 h后在365 nm荧光灯下观察结果，最小检出量可达0～4 CFU/mL[2]。

2 菌落总数测试片

2.1 霉菌、酵母菌测试片

试验片含霉菌和酵母生长所需营养素，并添加了抗生素抑制细菌生长，在接种后将其置于21～25 ℃的环境下培养3～5天，之后对其细菌总量进行计数。一般来说，酵母菌落特征为菌落小，边缘清晰，颜色均匀，灰绿色至蓝绿色，菌落向下。而霉菌菌落的特征为菌落大，边缘模糊，中间暗，颜色不均匀，苦艾平坦。

2.2 大肠菌群、大肠杆菌检测纸片

该试验片含有改进的VRB培养基和糖苷指示剂。大多数大肠杆菌可产生B糖苷酶，它与培养基中的指示剂发生反应，在大肠杆菌菌落周围产生蓝色沉淀。覆盖在表面的薄膜可以保留发酵乳糖产生的气体，形成蓝色和深蓝色菌落，并与气泡连接。大肠菌群在测试片上产生酸，指示灯变为中暗红色。大肠菌群是指红色菌落周围有气泡的菌落。因此，该测试片可以确定大肠杆菌和大肠菌群的数量：蓝色和红色有气泡的菌落是大肠菌群，蓝色有气泡的菌落是大肠杆菌。

3 结语

总而言之，快速测试片已广泛应用于微生物检测中。通过实践证明，使用快速测试片可以提高检测的质量和效率，且不会产生二次污染，操作简单，但该检测方法也有一些缺点，很容易受到外部因素的影响，测试人员必须有专业技术，确保测试条件符合要求，而且需要控制试剂的用量，为了保证滤纸的质量，如果滤纸上有孔，则很容易隐藏补救措施。