甘草酸二钾护理液皮肤修复作用的研究

施米丽，金家瑞，郭美仙，田佳丽，刘晓波



甘草酸二钾护理液皮肤修复作用的研究

施米丽，金家瑞，郭美仙，田佳丽，*刘晓波

（大理大学药学与化学学院，云南，大理 671000）

研究甘草酸二钾护理液及含甘草酸二钾卫生巾对擦伤皮肤的修复作用。用SD大鼠，制造皮肤擦伤模型，将动物随机分为阳性对照组、阴性对照组、甘草酸二钾护理液高、中、低剂量组、甘草酸二钾卫生巾组，一定时间后，检测创面愈合率，通过HE染色观察损伤皮肤组织病理学变化。造模后第7 d和第14 d护理液高、中剂量组和卫生巾组大鼠的皮肤愈合率和组织学评分与阴性组比较具有统计学意义（< 0.05）。甘草酸二钾护理液及含甘草酸二钾卫生巾具有促进皮肤修复的作用。

皮肤修复；护理液；HE染色

女性月经期由于子宫内膜脱落而产生创面，生殖道处于损伤状态，抵抗力较差，由于行走摩擦等导致外阴道擦伤，如果卫生巾选择不当，很容易造成病菌感染而引起妇科炎症[1]。因此设计符合人体功能，并具有抗菌功能、无耐药性、无毒副作用的卫生巾，尤其是开发具有外阴道修复功能的卫生巾产品是非常有必要的。

豆科植物甘草是最常用的中草药之一，它是一种常用的中药药材，其主要活性成分是甘草酸和甘草次酸等。其中甘草酸具有一定的水溶性，其水溶液具有较好的光热稳定性，能修复皮肤炎症，因此被添加到一些修复护肤产品中[2]。研究发现低浓度的甘草酸能保护人皮肤成纤维细胞损伤。研究证明甘草酸还具有抗氧化、清除自由基的功效[3]。甘草酸已被广泛应用于防晒、美白、养护型等护肤产品中。目前，临床研究表明，甘草酸苷注射液具有治疗皮肤修复的作用，但有关甘草酸二钾治疗皮肤修复作用的报道并不多。甘草酸二钾为白色粉末，有高甜度、水溶性好、低热能，起泡性、溶血作用较低，安全无毒等特点。同时，甘草酸二钾具有消炎、抗溃疡、抗氧化、抑菌、治疗创伤、有效清超氧离子和羟基自由基的作用[4]。

根据甘草酸苷注射液皮肤修复的特性，甘草酸二钾在皮肤修复方面有较大的潜在应用价值[5]。本研究制造皮肤损伤模型，通过检测创面愈合率，HE染色观察损伤皮肤组织病理学变化，评价含有甘草酸二钾护理液及其含甘草酸二钾卫生巾对皮肤修复作用，为其在具有修复作用的卫生巾方面的应用提供理论依据。

1 材料

1.1 实验动物

SD 大鼠（200~250 g，150只雌雄各半），由昆明楚商科技有限公司提供。

1.2 主要仪器

CHK2-F-GS显微镜（日本 OLYMPUS公司）；BX41图像采集系统（日本OLYMPUS公司）；HK610脱毛器（利洁时家化（中国）有限公司）；HH-1508RIII石蜡切片机（杭州艾普仪器设备有限公司）。

1.3 药品和试剂

重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶（珠海亿胜制药有限公司，批号：S20040001）；甘草酸二钾护理液、含甘草酸二钾护理液卫生巾（云南白药清逸堂实业有限公司，批号：2015100801）；生理盐水（贵州天地药业有限责任公司，批号：A15031602）；苏木精（美国Sigma公司，批号：041M0014V）；伊红（美国Sigma公司，批号：MKBS2614V）；磷酸氢二钾(成都化学试剂产，批号：950608)；磷酸氢二钠（北京化工厂，批号：850619）；水合氯醛（青岛宇龙海藻有限公司，批号：20150412）；甲醛溶液（天津市福晨化学试剂厂，批号：20131007）。

2 方法

2.1 造模

用10 %的水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射麻醉，待大鼠麻醉后，用脱毛机背部脱毛4 cm×4 cm，常规消毒。在大鼠脱毛区造成皮肤损伤，各组大鼠均在背部相同位置处制造皮肤损伤模型，术后2 h正常饮食。

2.2 分组

动物随机分成6组，阴性对照组（NS组）；阳性对照组（表皮生长因子EGF）；护理液高、中、低剂量组；护理液卫生巾组，每组25只，雌性各半。

2.3 给药

分组后给大鼠涂药，阳性对照组（给予表皮生长因子，涂抹均匀为止）；阴性对照组（给予0.9 mL的生理盐水）；护理液卫生巾组（包扎4 cm×4 cm卫生巾）；护理液高剂量组（给予100%护理液1.8 mL）；护理液中剂量组（给予100%护理液0.9 mL）；护理液低剂量组（给予50%护理液0.9 mL）。给完药之后用纱布包扎，5 h以后取下纱布，每天换一次药。分别于1、5、7、14、35 d进行指标观察取材。

2.4 取材

于造模后的1、5、7、14、35 d各组均处死5只大鼠，剪取4 cm×4 cm皮肤，投入到预先备好的10%福尔马林中固定，供组织石蜡切片用。

3 指标检测

3.1 创面愈合率

于造模后的（1、5、7、14、35 d）测量各组大鼠缺损处创面面积。根据公式计算：创面愈合率(%) = (最初创面面积－未愈创面面积) /最初创面面积 ×100%。

3.2 组织病理学观察

常规 HE 染色切片在放大 200 倍光镜下通过观察：表皮再生、成纤维细胞、新生毛细血管、粒细胞浸润数量。

3.3 组织病理学评分

标本常规石蜡包埋切片，切片厚度4 µm，行常规苏木精-伊红染色，光镜下观察HE 染色切片组织病理学变化（HP × 200），并参照 Eldad 等[6-7]所采用的方法，制定皮肤创面愈合的组织病理学评价标准，结果见表1。

表1 组织病理学评价标准

3.4 统计学方法

4 结果

4.1 创面愈合率

由表2可知，造模给药后第1 d，大鼠阳性对照组的创面愈合率与阴性对照组相比较，具有明显提高（＜0.05），其他各组较阴性对照组提高不明显（＞0.05）。造模后第5 d，阳性对照组的创面愈合率与阴性对照组比较显著提高（＜0.01），其他各组的愈合率比阴性对照组高但提高不明显（＞0.05）。造模后第7 d，阳性对照组的创面愈合率与阴性对照组比较显著提高(＜0.01)，卫生巾组和护理液高剂量组的创面愈合率与阴性对照组比较明显增加(＜0.05)，护理液中、低剂量组的创面愈合率比阴性对照组低。造模后第14 d，阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组与阴性对照组的创面愈合率比较显著增加(＜0.01)，护理液低剂量组与阴性对照组的创面愈合率比较明显增加(＜0.05)，护理液中剂量组愈合率比阴性对照组高但增高不明显（＞0.05）。造模后第35 d，阳性对照组愈合率达到100%，各组创面愈合率差不多，没有明显差异。以上结果显示，护理液高剂量组和卫生巾组在给药第7 d和第14 d后，具有很好的修复效果。

表2 造模后1、5、7、14、35 d各组创面愈合率( ± s，n = 5)

注：与阴性对照进行比较，*＜0.05**＜0.01。

4.2 组织病理学观察

由表3和图1可知，大鼠造模后第1 d，表皮几乎没有修复，无肉芽组织增生，各组病理学评分没有差异性（＞0.05）；造模后第5 d，各组表皮薄，少量修复，成纤维细胞很少，有少许的新生毛细血管，有少许的中性粒细胞侵润，各组病理学评分没有差异性（＞0.05）；造模后第7 d，各组表皮部分修复，有较多的肉芽组织增生，有新生毛细血管和成纤维细胞，有中性粒细胞侵润。阳性对照组，护理液高剂量组和中剂量组的组织病理学评分与阴性对照组比较明显的增高且有显著性差异（＜0.05＜0.01）。造模后第14 d，各组表皮大部分修复，有许多的新生毛细血管和成纤维细胞，中性粒细胞侵润较少。阳性对照组，护理液高剂量组的组织病理学评分与阴性对照组比较明显的增高且有显著性差异（＜0.05）。造模后第35 d，各组表皮已经全部修复，只有少许的肉芽组织，各组病理学评分没有差异性（＞0.05）。结果提示：造模1 d后，看不到皮肤修复征兆，药物没有效果。第5 d后，阳性药、护理液卫生巾、护理液中剂量组和低剂量都有修复效果，但修复效果一般。第7 d后，各组皮肤修复得较好，阳性药、护理液高剂量和低剂量都有修复效果，且修复效果很好。第14 d后，各组皮肤修复得较好，阳性药、护理液高剂量都有很好的修复效果。第35 d后，各组皮肤基本已经全部修复。实验结果显示，护理液高剂量组和卫生巾组在给药7 d和14 d后，有很好的修复效果。护理液低剂量组在给药7 d，有很好的修复效果。

表3 造模后1、5、7、14、35 d各组组织学评分 (±s，n=5)

注：与阴性对照进行比较，*＜0.05**＜0.01

注：①—⑥为造模后第1 d的阴性对照组、阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组、护理液中剂量组、护理液低剂量组；⑦—⑫为造模后第5 d的阴性对照组、阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组、护理液中剂量组、护理液低剂量组；⑬—⑱为造模后第7 d的阴性对照组、阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组、护理液中剂量组、护理液低剂量组；⑲—为造模后第14 d的阴性对照组、阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组、护理液中剂量组、护理液低剂量组；—为造模后第35 d的阴性对照组、阳性对照组、卫生巾组、护理液高剂量组、护理液中剂量组、护理液低剂量组。

5 讨论

皮肤修复是一个复杂的过程，主要是细胞的增殖与分化过程，包括各种组织的再生、肉芽组织增生和瘢痕形成等复杂的组合，表现出各种修复过程的协同作用[8-9]，其愈合的速度、质量与多种因素有关[10-11]。皮肤修复通常包括表皮细胞的再生、成纤维细胞增殖、新生血管的形成、粒细胞浸润等综合作用的结果[12-13]。

生物从受伤开始，即发生一系列的血管和细胞的变化，中性粒细胞是主要的炎性细胞，在创面愈合中最早出现，是机体防御作用的主要成分之一，它具有强大的吞噬能力，能吞噬细菌及细小的异物颗粒。中性粒细胞和巨噬细胞可相互活化，中性粒细胞颗粒分子能够增强巨噬细胞的吞噬作用和抗菌能力，巨噬细胞分泌的细胞因子和趋化因子可活化中性粒细胞使其获得炎症表型[14]。所以通过皮肤组织病理学观察粒细胞数量可以初步评价皮肤的愈合程度。实验结果显示，各组病理组织随着时间的推移，粒细胞数量逐渐降低，这说明皮肤一直处于修复的过程，其中阳性对照组和护理液高、中剂量组的粒细胞数量降低得比较快。

毛细血管的变化是组织创伤修复中重要评价指标之一。组织在损伤后，毛细血管开始形成，内皮细胞通过分裂增生、向无血管或者少血管区迁移，逐渐形成毛细血管芽，新形成的血管均为毛细血管。随着愈合时间的推移，伤口逐渐成熟，毛细血管的密度下降。创伤发生后，缺损的创面需要消耗大量的氧气和营养物质，必须由新生的毛细血管来供应。因此在皮肤创伤修复过程中，血管新生的作用是必不可少的[15]，所以通过皮肤组织病理学观察新生毛细血管，可以初步评价皮肤的愈合程度。实验结果显示，各组病理切片组织随着时间的推移，毛细血管数量逐渐增加，这说明皮肤一直处于修复的过程，其中阳性对照组和护理液高、中剂量组的毛细血管数量增加得比较快。

在血管新生的同时，临近的成纤维细胞增生并移行至创面，新生的肉芽组织将创缘连接起来，同时创缘表皮细胞增生，逐渐覆盖伤口。成纤维细胞是创伤愈合过程中主要的修复细胞，是肉芽组织的主要成分之一，且可通过自分泌和旁分泌机制产生多种细胞因子，作用于自身和其它细胞，调控修复过程，所以通过皮肤组织病理学观察成纤维细胞可以初步评价皮肤的愈合程度[16]。实验结果显示，各组病理切片组织随着时间的推移，成纤维细胞数量逐渐增加，这说明皮肤一直处于修复的过程，其中阳性对照组和护理液高剂量组的成纤维细胞数量增加得比较快。

综上所述，可以认为甘草酸二钾的促愈作用主要是通过减少粒细胞的数量来减轻创面炎症反应、促进肉芽组织形成、成纤维细胞的快速增殖、使上皮爬行速度增快、新生的毛细血管增多，从而加速组织创面愈合的过程。

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SKIN REPAIRING EFFECT OF NURSING LIQUID OF DIPOTASSIUM GLYCYRRHIZATE

SHI Mi-li, JIN Jia-rui, GUO Mei-xian, TIAN Jia-li,*LIU Xiao-bo

(College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)

Tostudy the repairing effect of dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin on damaged skin.The model of skin injury was made of SD rats. The animals were randomly divided into positive control group, negative control group, high, medium and low dose group of dipotassium glycyrrhizinate care liquid, dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin group. After a certain time, the wound healing rate was detected, and the histopathological changes of damaged skin were observed by HE staining.The skin healing rate and histological score of the high, middle dose group and sanitary napkin group were statistically significant higher than those of the negative group (< 0.05) after the model 7 and 14 days.The dipotassium glycyrrhizinate care liquid and dipotassium glycyrrhizinate sanitary napkin can promote skin repair.

skin repairing; nursing liquid; HE staining

1674-8085(2018)05-0081-06

R965.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2018.05.016

2018-07-06；

2018-08-26

施米丽(1993-)，女，云南曲靖人，硕士生，主要从事中药药理研究(E-mail:1437759468@qq.com);

金家瑞(1991-)，女，云南曲靖人，硕士生，主要从事中药药理研究(E-mail:562640385@qq.com);

郭美仙(1980-)，女，云南临沧人，讲师，硕士，主要从事中药药理学研究(E-mail:Yndllyo@126.com);

田佳丽(1993-)，女，云南保山人，硕士生，主要从事中药药理研究(E-mail:471062815@qq.com);

*刘晓波(1972-)，男，贵州思南人，副教授，硕士生导师，硕士，主要从事中药药理学研究(E-mail:yndlxb@126.com).