百华花楸果实抗炎作用的实验研究

李雪梅 孙延斌 周雪 张秀萍 侯甲福 刘世娟

[摘要]目的 觀察百华花楸果实水提取液的抗炎作用。方法 将实验用鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别设为空白对照组，百花花楸小、中、大剂量组（5、10、15 g/kg）、阳性对照组。空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液，阳性对照组灌胃给予药物5 g/kg。采用氨水喷雾致咳法，观察小鼠咳嗽次数；采用2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组织胺等量混合液致豚鼠哮喘法，观察6 min内引喘潜伏期；采用气管螺旋条实验制备豚鼠气管螺旋条法，观察气管松弛情况；采用小鼠足肿胀法观察抗炎作用。结果 百华花楸小、中、大各剂量组小鼠的咳嗽次数均少于空白对照组（P<0.05）。百华花楸小、中、大各剂量组的6 min内引喘潜伏期均长于空白对照组（P<0.05）。百华花楸小、中、大各剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率均高于空白对照组（P<0.05），百华花楸小剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率低于阳性对照组，百华花楸中、大剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率均高于阳性对照组（P<0.05）。百华花楸小、中、大剂量组对小鼠足肿胀的抑制程度均高于空白对照组（P<0.05）。结论 百华花楸果实水提取液具有抗炎作用。

[关键词]百华花楸果实；提取；抗炎作用

[中图分类号] R965.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0030-04

[Abstract] Objective To observe the anti-inflammatory effect of water extract of Srobus pohuashanensis fruit. Methods A total of 50 experimental mice were randomly divided into 5 groups， and there were 10 mice in each group， namely blank control group， low， medium and high dose of Srobus pohuashanensis group （5， 10， 15 g/kg respectively） and positive control group. In the blank control group， 0.9% sodium chloride solution was intragastrically administered. In the positive control group， 5 g/kg drug was intragastrically administered. The mouse cough was induced by ammonium hydroxide spraying in order to observe the cough times of mice. The guinea pig asthma was induced by the mixture of 2% acetylcholine chloride and 0.1% phosphoric acid histamine in equal and the latency of asthma was observed within 6 min. Spiral strips of trachea were used to prepare spiral strips in guinea pigs， and tracheal relaxation was observed. The tracheal relaxation was observed using guinea pig tracheal spiral strip. The anti-inflammatory effect was observed by swelling of the mouse foot. Results The cough times in the mice of low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis were lower than that of the blank control group （P<0.05）. The latency of asthma within 6 min in low， medium and high doses of srobus pohuashanensis was longer compared with the blank control group （P<0.05）. The relaxation rates of guinea pig tracheal smooth muscle were higher in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis than that in the blank control group （P<0.05）. Compared with the positive control group， the relaxation rate of guinea pig tracheal smooth muscle in the low dose of srobus pohuashanensis was lower， while in the medium and high doses， the relaxation rates were higher （P<0.05）. The inhibition degree of foot swelling in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis was greater than that of the blank control group respectively （P<0.05）. Conclusion The water extract of Srobus pohuashanensis fruit has an anti-inflammatory effect.

[Key words] Srobus pohuashanensis fruit； Extraction； Anti-inflammatory effect

百华花楸（Sorbus pohuashanensis）系蔷薇科，花楸属，落叶乔木，分布于我国东北和华北等地，其果实称“花楸果”[1]。花楸果含有多种维生素，味微苦略甜，生性平和，可以食用。含有多种具有生物活性的物质，包括黄酮类、氰苷类、三萜类、有机酸、氨基酸和蛋白质等八大类化合物[2]，及各种微量元素，丰富的抗坏血酸、胡萝卜素、山梨醇、有机酸、维生素C等，具有清热利肺、补脾生津之功效，是可进一步开发的珍贵资源[3-5]。目前临床常用的哮喘治疗药物，主要有糖皮质激素和支气管扩张剂等[6]，虽然这些药物都有一定的疗效，但也具有副作用较多且难以根治的缺点。传统医药与西药相比，具有调节整体功能、疗效稳定、副作用小的特点。因此，研制开发有效预防和治疗该病的天然药物极为迫切。百华花楸药材资源非常丰富，采集枝叶、果实不破坏生态，且总黄酮有效部位含量达 50%以上[7]，具有很好的应用前景。本研究对白华花楸的止咳、抗炎、平喘等作用进行了考察。

1材料与方法

1.1 药物与试剂

百华花楸果实（2016年9月份采于黑龙江牡丹江地区，经牡丹江医学院药学院鉴定为蔷薇科植物百华花楸的果实）；氨水（哈尔滨华利尔化工有限公司）；氯化乙酰胆碱[赫澎（上海）生物科技有限公司]；磷酸组织胺（上海远慕生物科技有限公司）；盐酸异丙肾上腺素（ISO，济南为民制药有限公司）；氨茶碱（杭州民生药业有限公司）；急支糖浆（太极集团浙江东方制药有限公司）；二甲苯（淄博德鲁克經贸有限公司）。

1.2仪器与动物

BL-410微机型生物机能实验系统；402型超声雾化器（上海合力医疗器械厂）；BT125型电子分析天平[托利多梅特勒（上海）有限公司]。健康小鼠，体重18～22 g，健康豚鼠，体重300～400 g。

1.3方法

1.3.1花楸果提取液的制备 将百华花楸进行系统分离，取天山花楸干燥果实研碎，依次用石油醚，95%乙醇溶液各回流提取3次，分别合并提取液，浓缩，回收溶剂，得石油醚部分（1.6 kg）和乙醇部分（2.7 kg）浸膏。取百华花楸浸膏，依次用乙酸乙酯，正丁醇萃取，各萃取液置于水浴减压浓缩收尽溶剂，分别得到萃取物浸膏，加入2.5%吐温-80配制成所需浓度溶液，得提取液组[8]。

1.3.2镇咳作用研究 小鼠50只，随机分成5组，每组10只，各组小鼠连续灌胃给药5 d，每天1次。空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液；阳性对照组灌胃给予急支糖浆5 g/kg。按照百华花楸使用量，将对照组分为小剂量组、中剂量组、大剂量组，使用量分别为5、10、15 g/kg；末次给药1 h后，将小鼠放入诱咳引喘仪中恒压喷入浓氨水气雾，观察小鼠3 min内的咳嗽次数。

1.3.3平喘作用研究

1.3.3.1整体引喘实验 采用浓氨水喷雾法[9-10]，将豚鼠放入气雾箱，用超声雾化器喷入引喘药液（2%氯化乙酰胆碱与0.1%磷酸组织胺的等量混合液）15 s，记录6 min豚鼠的哮喘反应（出现呼吸困难，前足抓挠面部，身体倾斜，跌倒等），豚鼠的哮喘潜伏期，与发生抽搐的动物数。阳性对照组灌胃给予氨茶碱5 g/kg，按照百华花楸使用量，将对照组分为小剂量组、中剂量组、大剂量组，使用量分别为5、10、15 g/kg；每天1次，连续7 d。末次给药1 h后记录豚鼠的哮喘潜伏期，观察百华花楸果实水提取液不同剂量的平喘作用。

1.3.3.2气管螺旋条实验 制备豚鼠气管螺旋条[11-12]，盛放于装于营养液的（37.0±0.5）℃恒温水浴培养皿中，将气管螺旋条一端连于通气管上，另一端连肌力换能器并与BL-410生物机能实验系统相连，通氧气，将基线调于固定水平。记录2 h正常活动曲线，待基线平稳后向浴槽中加入磷酸组织胺或氯化乙酰胆碱[13-15]，待气管收缩达高峰并稳定3～5 min后，加入百华花楸果实提取液，按照百华花楸使用量，将对照组分为小剂量组、中剂量组、大剂量组，使用量分别为5、10、15 g/kg，阳性对照组灌胃给予氨茶碱5 g/kg，观察气管松弛情况。

1.3.3.3蛋清足肿胀法 取小鼠50只，雌雄各半，体重，随机分为组，空白对照组灌胃给予0.9%氯化钠溶液，阳性对照组灌胃给予地塞米松5 g/kg（相当人7倍用量），按照百华花楸使用量，将对照组分为小剂量组、中剂量组、大剂量组，使用量分别为5、10、15 g/kg。所有药物均用蒸馏水混悬，按0.2 ml/kg体重灌胃，每天1次，连续7 d。末次给药前，以螺旋测微仪测量右后足跖厚度，作为致炎前右后足正常厚度。末次给药后1 h，在每只小鼠右后足跖皮注射蛋清0.1 mL/只，测量注入致炎后1、2、3 h后右足厚度，并减去致炎前小鼠右后足正常厚度，作为各鼠在不同时间的足肿胀度[16-20]。

2 结果

2.1各组咳嗽次数的比较（镇咳作用研究）

与空白对照组比较，百华花楸小、中、大各剂量组小鼠的咳嗽次数均少于空白对照组（P<0.05），阳性对照组小鼠的咳嗽次数少于空白对照组（P<0.05）（表1）。

2.2平喘作用研究

2.2.1各组给药前后6 min内引喘潜伏期的比较

与空白对照组比较，百华花楸小、中、大各剂量组豚鼠的6min内引喘潜伏期均长于空白对照组（P<0.05），阳性对照组豚鼠的6 min内引喘潜伏期长于空白对照组（P<0.05）。百华花楸小、中、大各剂量组，阳性对照组给药后的6 min内引喘潜伏期均长于给药前（P<0.05）（ 表2）。

2.2.2各组对豚鼠气管平滑肌松弛率的比较（气管螺旋条实验）

与空白对照组比较，百华花楸小、中、大各剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率均高于空白对照组（P<0.05），其中百华花楸大剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率较高，阳性对照组对豚鼠气管平滑肌松弛率高于空白对照组（P<0.05）。与阳性对照组比较，百华花楸小剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率低于阳性对照组，百华花楸中、大剂量组对豚鼠气管平滑肌的松弛率均高于阳性对照组（P<0.05）（表3）。

2.2.3各组对小鼠足肿胀抑制程度的比较（蛋清足肿胀法）

注射蛋清后，小鼠足跖在10 min后开始肿胀程度最明显。与空白对照组比较，百华花楸小、中、大各剂量在不同时间对小鼠足肿胀抑制程度均高于空白對照组（P<0.05），阳性对照组对小鼠足肿胀抑制程度高于空白对照组（P<0.05）（表4）。

3讨论

呼吸系统疾病的一个主要症状就是咳嗽，是一种保护性反射，而剧烈的咳嗽会使患者感到非常痛苦，引起并发症，甚至导致哮喘的发生。支气管哮喘是一种由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性细胞和淋巴细胞参与的慢性气道炎症。为防止疾病进一步严重，对于咳嗽应首先采用镇咳药进行治疗。镇咳药的镇咳作用能够减轻因咳嗽引起的不适，从而防止原发病及并发症的产生。镇咳药在支气管哮喘的治疗中，也会起到辅助治疗的作用，具有一定的意义。

实验使用浓氨水喷雾法对百华花楸的镇咳作用进行研究，浓氨水是一种强的刺激物，能刺激呼吸道黏膜上皮的感受器，反射性地引起咳嗽。实验表明百华花楸能明显减少小鼠咳嗽次数。组胺引喘实验是评价药物平喘作用的常用药理学方法，实验表明百华花楸可延长组胺引喘豚鼠的引喘潜伏期，具有抗哮喘作用。实验采用小鼠足肿胀模型来代表慢性增殖炎症模型，在小鼠注射蛋清后，小鼠足趾在10 min后开始肿胀程度最明显，提示百华花楸可抑制小鼠足肿胀程度，具有一定的抗炎作用。

综上所述，百华花楸果实小、中、大剂量组均可减少小鼠的咳嗽次数；延长由浓氨水所诱导的小鼠咳嗽的潜伏期；延长豚鼠哮喘的潜伏期；降低小鼠足肿胀程度，提示百华花楸有很好的镇咳、平喘、抗炎作用，也为进一步研究其药物作用给出可行性方向，为药物开发作出准备，有望将其研究成为一种新的治疗呼吸系统疾病的药物。

[参考文献]

[1]柴晓冬.百华花楸果实有效成分的研究[J].辽宁林业科技，2015，（4）：31-32

[2]尹永霞，赵岩，蔡恩博，等.百花花楸果研究现状及其发展前景[J].北方园艺，2017（17）：188-191.

[3]王幻，唐辉，王国军，等.HPLC测定天山花楸叶提取物中6种黄酮成分[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（15）：58-61.

[4]中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志：第36卷[M].北京：科技出版社，1974：2848.

[5]孟令锴，张朝立，高长久，等.高效液相色谱法同时测定百华花楸果实中金丝桃苷和芦丁的含量[J].中国医药导报，2016，13（4）：32-35

[6]刘飞，穆晶晶，张博，等.超声波辅助提取黑果腺肋花楸花色苷工艺优化及稳定性研究[J].天然产物研究与开发，2018， 30（3）：485-494

[7]姚莉莉，赵海泓，申立营，等.西伯利亚花楸组培快繁技术体系的研究[J].辽宁农业科学，2005，（6）：19-21

[8]阚毓铭.中药化学实验操作技术[M].北京：中国医药科技出版社，1988：8.

[9]郑燕敏，张兵.抗哮喘药物现状和研发动态[J].上海医药，2008，29（5）：216-217.

[10]胡桂英.支气管哮喘发病机制研究进展[J].河北医科大学学报，1994，20（4）：255-256.

[11]侯甲福，李雪梅，李文超，等.百华花球果实抗炎有效部位的研究[J].中国药物经济学，2013，8（5）：225-226.

[12]马俊鹏，常军民，卢冬梅.天山花楸水提取液镇咳平喘作用的实验研究[J].西北药学杂志，2008，23（3）：186

[13]王丹，向阳，常军民.天山花楸平喘胶囊镇咳、祛痰、平喘、抗炎及免疫作用的研究[J].中国实验方剂学，2013， 19（23）：262-265.

[14]杨本坤，王素军，曾洁，等.大鼠在体单向肠灌流模型研究肉桂酸肠道吸收特点[J].广东药学院学报，2013，29（1）：69-72.

[15]王婷婷，李伟，袁勇，等.大鼠单向灌流模型研究田蓟苷的在体肠吸收[J].中国中药杂志，2013，38（7）：1079-1082

[16]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].3版.上海：上海科学技术出版社，2002：1370

[17]周瑞玲，陈玉兴，崔景朝.川贝枇杷膏止咳、化痰、平喘、抗炎及免疫作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2004，10（5）：25.

[18]贾秀娟，魏晓瑶，赵艳敏，等.黑果花楸果实中花青素含量分布及抗氧化活性[J].食品研究与开发，2017，38（8）：33-37.

[19]张在其.小青龙汤对哮喘小鼠肺组织Th1/Th2作用的实验研究[J].中国中西医结合急救杂志，2004，11（6）：649-652.

[20]刘静，徐莉莉.黑果腺肋花楸黄酮提取工艺优化及体外抗氧化研究[J].食品研究与开发，2017，38（3）：60-65.