白术通利胶囊的质量标准优化研究

高媛 巩伟 吴洋

[摘要]目的 对白术通利胶囊的质量标准进行提高和优化。方法 鉴别项下，采用薄层色谱法分别对白术、川芎、补骨脂、泽泻和山楂进行鉴别；含量测定项下用高效液相色谱法（HPLC）测定白术中白术内酯Ⅰ的含量的含量，测定条件为色谱柱采用岛津ODS-VP3色谱柱，长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm；以甲醇-水（77∶23）为流动相；检测波长为276 nm，柱温35℃。结果 薄层色谱鉴别斑点显色清晰，分离度号，灵敏度高，能有效鉴别出所需要鉴别的成分；含量测定白术内酯Ⅰ在4.0～16.0 μg/ml的浓度范围内线性关系良好（r=0.9998，n=7），平均回收率为99.37%，RSD为0.84%（n=9）。结论 白术通利胶囊的质量标准经提高后可用于其质量控制。

[关键词]白术通利胶囊；质量标准提高；白术内酯Ⅰ；薄层色谱法；高效液相色谱法

[中图分类号] R283 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0021-05

[Abstract] Objective To improve and optimize the quality standard of Baizhu Tongli capsules. Mehtods In the identification， Thin layer chromatography （TLC） was used to identify the Atractylodes Macrocephala， Ligusticum Chuanxiong， Psoralen， Alisma Orientalis and Hawthorn respectively. Under the content determination， the content of Atractylenolide Ⅰ in Atractylodes Macrocephala was determined by high performance liquid chromatography （HPLC） method. The conditions were as follows： the chromatographic column used SHIMADZU ODS-VP3 column， 250 mm long， inner diameter of 4.6 mm， and the particle diameter is 5 μm， and the methanol water （77∶23） was used as the method. The mobile phase was detected at 276 nm and the column temperature was 35℃. Results The TLC identification spots had clear color， separation number， high sensitivity， and could effectively identify the components needed to identify. The content determination of Atractylodes Ⅰ in the concentration range of 4.0-16.0 μg/ml was good （r=0.9998， n=7）， the average recovery rate was 99.37% （RSD=0.84%， n=9）. Conclusion The improvement is easy-operated and accurate which has a good specificity for the quality control of Baizhu Tongli Capsules.

[Key words] Baizhu Tongli Capsules； Quality standard improvement； Atractylenolide Ⅰ； Thin layer chromatography； High performance liquid chromatography

白術通利胶囊是原济南军区批准的军队医疗机构非标准制剂，临床上主要用于治疗痛风性关节炎，并能缓解高尿酸血症症状。该制剂临床应用三十多年，疗效确切，应用效果良好。该制剂的处方由白术、川芎、补骨脂、泽泻、山楂、苏木、苍术、丹参等八味药材组成，白术具有健脾益气，燥湿利水之功效[1]，为君药，川芎、补骨脂、泽泻、山楂合为臣药，辅以苏木、苍术、丹参，共奏健脾利湿、通利关节之功。但该制剂的质量标准极为简单，仅有性状和鉴别项，且鉴别项均为化学反应，专属性不强，难以有效控制其生产质量，因此有必要对其质量标准进行提高和优化。本研究即对鉴别项和含量测定项进行标准提高，拟采用薄层色谱鉴别处方中的白术、川芎、补骨脂、泽泻和山楂，采用高效液相色谱法（HPLC）测定来源于白术的有效成分白术内酯Ⅰ（C15H18O2）的含量[2]。

1仪器与材料

高效液相色谱仪（LC-20AT）、电子分析天平（AUW 220D）均为日本岛津科技公司生产；薄层观察分析仪（TLA-1型）生产商为长沙克罗玛公司；上海跃进医疗器械厂生产的GZX-DH-300S电热恒温干燥箱。津奥特赛恩斯仪器有限公司生产的AS-3120A超声波清洗器；法国Millipore公司生产的Synergy-UV超纯水器。

批号为120925-201109的白术对照药材、批号为120918-201102的川芎对照药材、批号为121056-200503的补骨脂对照药材、批号为121081-201004的泻对照药材、批号为121138-200905的山楂对照药材、批号为111975-201501的白术内酯Ⅰ对照品（含测按99.1%计）等，以上对照药材或对照品由中检院标准物质处生产；TEDIA公司生产的色谱纯级甲醇，自制超纯水，青岛海洋化工分厂生产的GF254和硅胶G薄层板。白术通利胶囊（3批，济南军区总医院制剂室生产，规格：10 g/袋，批号分别为20170301，20170505， 20170716），阴性对照制剂委托济南军区总医院制剂室生产。

2方法与结果

2.1鉴别（薄层色谱法）

2.1.1白术[3-4]

取白术通利胶囊内容物2 g，加正己烷5 ml，超声处理（功率280 W，频率40 kHz）20 min，静置并吸取上方清晰溶液，再水浴上加热，浓缩成供试品溶液。另取白术对照药材0.5 g，按照上述步骤浓缩成对照药材溶液。另取缺白术的阴性对照制剂2 g，按照上述步骤浓缩成阴性对照溶液。又取适量的白术内酯Ⅰ对照品，加甲醇溶解制成浓度为1 mg/ml的对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部通则0502之薄层色谱法试验，吸取上述每一种溶液各10 μl，分别点于预制好的同一块G板上，展开剂选择为石油醚（60～90℃）-苯-乙酸乙酯（15∶2∶1），按程序薄层展开，显色剂选择10%硫酸乙醇溶液，电热箱设定90℃后加热30 min，检视条件为365 nm紫外灯。检视结果：供试品溶液产生的薄层色谱与对照药材及对照品溶液产生的薄层色谱相比较，在相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性对照色谱无相应的斑点（图1）。

2.1.2川芎[3，5]

取白术通利胶囊内容物1 g置烧瓶中，烧瓶中加入20 ml的乙醚，用回流装置加入回流1 h，将烧瓶溶液过滤，取滤液于通风橱内挥干，残渣滴入0.2 ml的乙酸乙酯溶解后为供试品溶液。另取川芎对照药材2 g，按照上述步骤制作对照药材溶液。再取缺川芎阴性对照制剂2 g，按照上述步骤制作阴性对照溶液。照《中国药典》2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述每一溶液各5 μl，分别点于预制好的同一块G板上，展开剂选择为正己烷-乙酸乙酯（9∶1），按程序薄层展开，检视条件为365 nm紫外灯。检视结果：供试品溶液产生的薄层色谱与对照药材溶液产生的薄层色谱相比较，在相应的位置显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无相应的斑点（图2）。

2.1.3补骨脂[3，6]

取白术通利胶囊内容物1 g置锥形瓶中，锥形瓶中倒入20 ml的乙酸乙酯，用（功率280 W，频率40 kHz）的超声处理15 min，将溶液过滤，滤液置通风橱内在通过水浴锅蒸干，蒸干后的残渣滴入1 ml的乙酸乙酯，此为供试品溶液。再取缺补骨脂的阴性对照溶液1 g，按照上述步骤制作阴性对照溶液。另取适量的补骨脂素对照品，滴加乙酸乙酯制作2 mg/ml的对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部通则0502之薄层色谱法试验，吸取上述每一溶液各5 μl，分别点于预制好的同一块G板上，展开剂选择为正己烷-乙酸乙酯（4∶1），按程序薄层展开，显色剂选择以10%氢氧化钾甲醇溶液，检视条件为365 nm紫外灯。检视结果：供试品溶液产生的薄层色谱与对照品溶液产生的薄层色谱相比较，在相应的位置显相同的黄白色荧光斑点，阴性对照色谱无相应的斑点（图3）。

2.1.4泽泻[3，7]

取白术通利胶囊内容物2 g，加50%乙醇50 ml，回流提取1 h，滤过，滤液浓缩至约6 ml，加等量水稀释，用乙酸乙酯20 ml，分次提取，合并提取液后将乙酸乙酯层在通风橱内加热浓缩到2 ml左右，制作试品溶液。另取泽泻对照药材2 g，按照上述相同步骤制作对照药材溶液。再取缺泽泻的阴性对照制剂2 g，按照上述相同步骤制作对阴性对照溶液。照《中国药典》2015年版四部通则0502之薄层色谱法试验，吸取上述每一溶液各10 μl，分别点于预制好的同一塊G板上，展开剂选择为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14∶7∶2），按照程序展开，在恒温箱内105℃的条件下加热。检视结果：供试品溶液产生的薄层色谱与对照药材溶液产生的薄层色谱相比较，在相应的位置显相同颜色的斑点，阴性对照色谱无相应的斑点（图4）。

2.1.5山楂[3，8]

取白术通利胶囊内容物1 g，加乙酸乙酯20 ml，用设定条件为功率280 W、频率40 kHz的超声处理15 min，超声后的乙酸乙酯溶液过滤，将滤液在通风橱内挥干，残渣滴加0.5 ml的甲醇制作供试品溶液。另取山楂对照药材2 g，按照上述步骤制作对照药材溶液。再取缺山楂的阴性对照制剂2 g，按照上述步骤制作阴性对照溶液。照《中国药典》2015年版四部通则0502之薄层色谱法试验吸取上述每一溶液各10 μl，分别点于预制好的同一块G板上，展开剂选择为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5），按照程序展开，显色剂为硫酸乙醇溶液（3∶10），恒温箱内80℃加热。检视结果：供试品溶液产生的薄层色谱与对照药材溶液产生的薄层色谱相比较，在相应的位置显相同的紫红色斑点，阴性对照色谱无相应的斑点（图5）。

2.2白术中白术内酯Ⅰ的含量测定[9-10]

2.2.1色谱条件

色谱柱采用岛津ODS-VP3色谱柱，长250 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm；以甲醇-水（77∶23）为流动相；检测波长设定为276 nm，柱温设定为35℃。理论板数的要求：按白术内酯Ⅰ色谱峰计算应不低于3000（图6）。

2.2.2溶液的制备

2.2.2.1白术内酯Ⅰ对照品溶液的制备 用适当工具取适量的白术内酯Ⅰ对照品，用电子分析天平精密称定，记录数据，然后将之放置100 ml的容量瓶中，在容量瓶中加入甲醇，制成白术内酯Ⅰ对照品贮备液，其浓度为50 μg/ml。

2.2.2.2供试品溶液的制备 用适当工具取适量的白术通利胶囊内容物，用研钵研细之后再混合均匀，取混匀物10 g左右，用电子分析天平精密称定，记录数据，再放置到100 ml的锥形瓶中，锥形瓶中加入10 ml的甲醇，回流1 h，放冷，滤过，滤液全部转移至10 ml量瓶中，加适量甲醇定容至容量瓶上的刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.3阴性对照溶液的制备 用适当工具取适量的不含白术的阴性对照制剂适量，用研钵研细之后再混合均匀，取混匀物10 g左右，按照“2.2.2.2”的步骤，制备阴性对照溶液。

2.2.3线性关系考察

分别精密吸取2.2.2.1项目下对照品贮备液适量，加甲醇配制成质量浓度分别为4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0 μg/ml的一系列对照品溶液，分别编号为1～7号溶液，按上述色谱条件，分别进样10 μl，以白术内酯Ⅰ的实际浓度（X）作为横坐标，其相应的峰面积（Y）作为纵坐标，画出标准曲线，从标准曲线上得出线性方程为Y=11778X-2634（R2=0.9997）。结果显示，白术内酯Ⅰ在4.0～16 μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.4精密度试验

取标号为4的对照品溶液，精密吸取10μl的进样量，连续6次进样，读取6个峰面积。结果显示，白术内酯Ⅰ色谱峰的峰面积的RSD为0.65%，提示仪器的精密度良好。

2.2.5重复性试验

取适量的白术通利胶囊（批号：20170301）内容物，按照“2.2.2.2”项下的方法同样制备6分供试品溶液，测定白术内酯Ⅰ的含量。结果显示，白术内酯Ⅰ的平均含量为8.0 μg/g，RSD=1.23%（n=6），提示方法的重复性良好。

2.2.6稳定性试验

取“2.2.5”项下供试品溶液一份，置于液相色谱仪中，进样量为10 μl，每2小时测定1次，测定至第12小时。结果，白术内酯Ⅰ的峰面积RSD为0.88 %，提示供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.7加样回收率试验

精密称取已知含量的白术通利胶囊内容物9份（批号：20170301），每份约5 g，分别精密加入80%、100%、120%的白术内酯Ⅰ对照品，按“2.2.2.2”项下的方法同样制备供试品容易，测定峰面积，按照准确度公式计算加样回收率，计算结果显示白术内酯Ⅰ的平均加样回收率为99.37%，RSD为0.84%，符合要求（表1）。

2.2.8样品含量测定

取3批白术通利胶囊适量，按“2.2.2”方法制备供试品溶液，测定并计算含量。3批白术通利胶囊的平均含量为8.0 μg/g，结果见表2。

3讨论

薄层色谱法作为一种成熟有效的鉴别方法，已经被广泛应用于中成药的质量控制当中[11]。一般来讲，中成药的化学成分复杂多变，因此如果要对中成药进行有效的质量监控，会有众多的干扰因素，是故在薄层色谱鉴别过程中，需要采取合理有效的前处理步骤，才能得到科学、准确的薄层色谱图。通过多次探索和研究，本试验中供试品溶液、对照品溶液或对照药材溶液所产生的薄层色谱图中的薄层特征明显，分离度较好，上述方法比化学反应灵敏，专属性较强，体现出了薄层色谱法鉴别处方中的有关药物的优越性。

白术通利胶囊处方中，君药是白术。白术内酯Ⅰ为白术的有效药理成分[12]，结合中国药典[3]和文献报道[13-15]相关内容，含量测定决定采用HPLC法测定白术通利胶囊中白术内酯Ⅰ的含量。方法学考察显示，用HPLC对该制剂中的白术内酯Ⅰ进行含量测定是合理、有效和可行的。白术内酯Ⅰ的含量限（幅）度的制定，则需要依照《中国药典》药品质量标准分析方法验证指导原则的要求[16]来制定，应至少测定3批及以上的含量数据，按其平均值的±20%作为限度的制定幅度。本次测定的白术内酯Ⅰ的含量平均值为8.0 μg/g，将其调低20%，为6.4 μg/g，因此拟定白术内酯Ⅰ的含量限度为6.4 μg/g。以上为白术通利胶囊中白术内酯Ⅰ含量限度的确定提供了参考。

综上所述，经提高后的质量标准操作简便、精密度好、结果准确，可用于白术通利胶囊的质量控制。

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