2种霉菌毒素吸附剂对牦牛体重及血清生化指标的影响

赵佳琦，文勇立*，安雅静，李子谦，齐沛森，李 强，扎 升，亡 头，侯定超

（1.西南民族大学青藏高原研究院，四川成都 610041；2.四川省畜牧总站，四川成都 610041；3.金川县畜牧兽医服务中心，四川金川 624100）

霉菌毒素是由霉菌产生的次级代谢产物，广泛存在于发霉饲料原料（如玉米及秸秆、白酒糟）中，常见有黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEA）等。霉菌毒素导致动物肝功能损伤、生产性能下降等，并在机体内积累、富集、放大，经食物链危及人类健康[1]。由于反刍动物对霉菌毒素的耐受性高于单胃动物，往往未引起人们重视，但若其摄入被霉菌毒素污染的饲料，会使瘤胃微生态紊乱，抑制瘤胃发酵性能，影响血清生化指标，进而危害消化、繁殖等功能[2-3]。防治霉菌毒素污染的常用方法是在饲料中添加吸附剂[4]，其中，酵母细胞壁提取物（YCW）和蒙脱石（MMT）应用广泛。YCW主要成分为β-葡聚糖和甘露寡糖，可吸附、降解霉菌毒素，改善瘤胃菌群结构[5]。MMT属水合铝硅酸盐类（HSCAS）吸附剂，能够与霉菌毒素结合形成稳定的复合物[6]。这2种吸附剂可减轻霉菌毒素对禽、猪生长及肝细胞的危害，降低血清转氨酶浓度，提高饲料转化率[7-8]。目前关于以上2种吸附剂的相关研究一般针对家禽或单胃动物，涉及牦牛等反刍动物的研究鲜见报道[9]，且忽略多种吸附剂混合使用。

牦牛是青藏高原地区重要的生产生活资料、经济发展支柱。为提高生产水平，部分地区将天然放牧转变为舍饲、半舍饲养殖，其饲料投入品不可避免受到霉菌毒素污染。因此，本试验旨在研究2种吸附剂对牦牛体重及血清生化指标的影响，为相关研究及生产提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 MMT（＞95%，赤峰和明生化工有限公司）、YCW（甘露寡糖≥20%，β-葡聚糖30%～40%，安琪酵母股份有限公司）。

1.2 试验设计 试验于2018年4月11日—5月21日在四川省阿坝藏族羌族自治州金川县庆宁牦牛养殖场进行，预试期、正试期各20 d，预试期测定牦牛的体重和日采食量（干物质基础，下同），选取体重和采食量差异较小（标准偏差在5%以内）、健康、发育良好的牦牛32头，雄性，年龄3.5岁。日粮精粗比为1:3.6（主要有玉米秸秆、玉米、白酒糟；主要营养成分为干物质83.94%、粗蛋白质12.55%、粗脂肪2.37%、粗纤维97.12%[10]），每天饲喂2次（06:00和18:00），自由采食和饮水，每次饲喂前先将吸附剂掺于部分饲料中混匀，待采食完全后再投喂剩余饲料。经测定，平均体重、采食量分别为（288.25±12.04）kg和（9.00±0.31）kg。采用两因素多水平随机试验设计，参考产品说明书及文献[11]，MMT 4水平（占日粮干物质比例，下同）分别为0（对照）、0.1%、0.2%、0.4%，YCW 4水平分别为0（对照）、0.2%、0.4%、0.6%，MMT各水平与YCW各水平交叉组合形成4×4共16个组合，设1组重复，共计牦牛32头。试验分组见表1。

表1 试验分组

1.3 样品采集 血样采集：于结束试验第2天，颈静脉采血10 mL，4 000 r/min离心15 min，取血清，冷冻保存。

饲料样品采集：采用《饲草产品抽样技术规程》（NY/T 2129-2012）采集3种饲料样品，于预试期前4 d，每天在06:00和18:00饲喂前每种饲料各采集2个样品（100 g/个），避免杂质和微生物污染，置塑料袋，冷藏。

1.4 测定指标与方法 牦牛增重量：分别在正试前1 d和结束试验第2天空腹称重，后者与前者之差为增重量。

日采食量：预试期连续3 d，逐日测定并记录每头牦牛每天的喂料量和剩料量，二者之差为采食量。依照《饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定》（GB/T 6435-2006）将风干饲料换算为干物质含量。

饲料AFB1含量：采用《饲料中AFB1的测定 酶联免疫吸附法》（GB/T 17480-2008）及微波消解仪（CEM MARS6，美国 Py NN Inc.）、酶联免疫检测仪（Bio-Tek ELX808，中国，宝特科技有限公司）、AFB1酶联免疫试剂盒（中国，百奥森科技有限公司；含AFB1标准品，以色列，FERMENTEK公司），测定玉米粉、白酒糟和玉米秸秆样品中AFB1含量。

血清生化指标：采用全自动生化分析仪（日立7600）测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷氨酰氨基转移酶（GGT）和总胆汁酸（TBA）。

1.5 统计分析 根据文献[12]介绍的方法，采用SPSS 22.0进行多变量方差分析，并估计单因子效应及交互效应，采用LSD法进行水平间多重比较，结果用平均值±标准误表示。

2 结果与分析

2.1 饲粮中AFB1含量 由表2可知，与《饲料卫生标准》（GB 13078-2017）中霉菌毒素限量比较，玉米粉的AFB1含量平均值在安全范围内，但玉米秸秆和白酒糟AFB1含量存在部分超标现象。

表 2 饲粮中 AFB1 含量 μg/kg

2.2 2种吸附剂对牦牛增重及血清生化指标的影响 由表3可知，3种处理中MMT组和混合组（MMT+YCW）对增重及谷丙转氨酶（ALT）等7个血清生化指标的总体影响达到极显著水平（P＜0.01），而YCW组对各变量总体影响不显著（P＞0.05）。以上说明，饲料中添加MMT或混合添加2种吸附剂对牦牛增重及血清生化指标具有影响。

方差分析显示，MMT组对增重及ALT的影响极显著（P＜0.01）；YCW仅对ALT作用显著（P＜0.05）；混合组对增重及ALT的影响显著（P＜0.05），说明饲料中单独添加MMT或YCW或同时添加2种吸附剂均对牦牛增重量及ALT具有影响。

2.3 MMT对牦牛增重及血清生化指标的影响 由表3可知，M0.1%组增重量显著高于M0组和M0.2%组（P＜0.05），M0.2% 组 低 于 对 照 组（P＞0.05） 和M0.4%组（P＜0.05），M0.4%组高于M0组（P＞0.05），表明，MMT添加量为0.1%时，具有提高增重的作用。M0.1%组ALT浓度显著低于M0组、M0.2%组、M0.4%组（P＜0.01），M0.2%组高于M0组（P＞0.05），M0.4%组 高 于 M0组、M0.2%组（P＞0.05）， 提 示MMT添加量大于0.1%时，对牦牛肝功能可能存在不利影响。AST浓度大小顺序为M0.2%组＜M0.4%组＜M0.1%组＜M0组（P＞0.05），LDH和TBA浓度大小顺序为M0.2%组＜M0.1%组＜M0.4%组＜M0组（P＞0.05）， 以 及 ALB浓 度 M0.2% 组 ＜M0.4% 组＜M0组 ＜M0.1%组（P＞0.05）。表明，当 MMT添加量达到0.2%时AST、LDH和TBA浓度最低，之后升高；而ALB浓度变化相反，添加量0.2%时最高，之后降低，但由于差异不显著，结果有待于进一步验证。此外，M0.1%组、M0.2%组、M0.4%组中ALP和GGT浓度随着MMT添加量的升高而逐渐下降（P＞0.05）。

2.4 YCW对增重及血清生化指标的影响 由表3可知，各组中增重量大小顺序为Y0.2%组＞Y0.6%组＞Y0.4%组＞Y0（P＞0.05），表明，YCW添加量为0.2%时，促进牦牛生长。Y0.4%组中ALT浓度显著低于其他3组（P＜0.05），其他3组差异不显著（P＞0.05），表明日粮中添加YCW能有效降低ALT浓度，且当添加量为0.4%时ALT浓度最低，添加量达到0.6%时ALT浓度升高。各组中ALB浓度大小顺序为Y0.2%组＞Y0组 ＞Y0.6% 组 ＞Y0.4% 组（P＞0.05），LDH和 TBA浓度大小顺序均为Y0.4%组＜Y0.6%组＜Y0.2%组＜Y0组（P＞0.05）。可见，在YCW添加量为0.2%时ALB浓度最高，添加量为0.4%时LDH和TBA浓度最低（P＞0.05），但由于结果差异不显著，尚有待进一步验证。与Y0组相比，3个YCW组ALP浓度均有所升高（P＞0.05）。Y0.2%组、Y0.4%组、Y0.6%组AST和GGT浓度随YCW添加量的升高呈下降趋势（P＞0.05），与MMT对GGT影响的变化规律一致。

2.5 混合组对牦牛增重及血清生化指标的交互效应分析鉴于前述混合组（MMT+YCW）对增重量及ALT浓度的影响差异显著（P＜0.05），而对其余指标影响差异均不显著（P＞0.05）。因此，仅对增重量及ALT进行分析，由表3可知，各混合组比较，Y0.2%+M0.1%组的增重量均值最大（71.50 kg），其次为Y0.4%+M0.1%（61.00 kg）。这表明以MMT为0.1%、YCW为0.2%混合使用时牦牛体重增长较大；各混合组中，Y0.4%+M0.1%组ALT浓度最低（9.0 IU/L），其次为Y0.6%+M0.1%组（15.50 IU/L）。这表明以MMT为0.1%、YCW为0.4%混合使用时血清ALT浓度较低。

3 讨 论

3.1 MMT和YCW对牦牛增重及血液生化指标的影响本试验在日粮中添加MMT，牦牛增重量显著提高，这与Norouzian等[13]在羔羊日粮中添加HSCAS类吸附剂的结果一致。且本试验所用的饲料中，玉米秸秆和白酒糟均存在霉菌毒素污染的现象，表明牦牛增重显著提高是MMT对霉菌毒素吸附作用的结果[14]。当MMT添加量为0.1%时，增重量最大，之后显著下降，这一变化与王黎文等[11]、Grabherr等[15]研究奶牛饲粮中MMT添加量对日均采食量影响的规律一致。可见，过高剂量MMT不利于牦牛增重，究其原因，目前认为可能有3点：其一，MMT具有较大的膨胀性[14]，吸水膨胀形成触变凝胶体，阻碍食糜在瘤胃中的消化作用，产生“饱感”；其二，MMT可能影响饲料适口性，从而影响采食[16]；其三，MMT可能对饲料中氨基酸、维生素等营养物质有非选择性吸附的特点，从而影响动物对营养成分的吸收[17]。本试验中，当MMT添加量达0.4%时，出现牦牛增重量上升的现象，有待进一步研究。本试验中添加YCW牦牛增重量有升高趋势，与Young等[18]、Tao等[19]对肉牛及荷斯坦犊牛日增重的相关研究结果一致，但由于结果差异不显著，尚需进一步验证。

ALT和AST是反映肝功能是否正常的重要指标。霉菌毒素可损害肝脏功能，使血清中ALT、AST、LDH等浓度升高[20]，而HSCAS类物质可减轻霉菌毒素对畜禽肝脏、肾脏等的损伤。本试验中ALT浓度在MMT添加量为0.1%时最低，之后随着MMT添加量的增加而升高，且该处理组的ALT浓度显著低于对照组，AST浓度也有所降低，该趋势与张建刚等[21]研究结果吻合，因此，本试验推荐MMT添加剂量不超过0.1%，但该推荐剂量低于上述研究对奶牛日粮中添加0.5%MMT的推荐剂量[21]，可能与牦牛体重小、采食量小以及基础日粮、霉菌毒素感染等不同情况有关。

YCW能提高动物的非特异性免疫功能，降低血清中ALT和AST水平[3,22]。Swamy等[23]将葡甘露聚糖添加到被霉菌毒素污染的饲料发现，可改善肉鸡血清酶的异常情况。王兆钧[24]也发现β-葡聚糖可缓解霉菌毒素对动物机体的不良影响。但上述文献均未指出吸附剂的有效添加量。本试验中在YCW添加量为0.4%时，ALT浓度显著低于对照组，因此，将该剂量作为推荐剂量。

表3 MMT和YCW对牦牛增重及血清生化指标的影响

LDH、GGT、TBA也能反映肝脏的健康状况。本试验添加2种吸附剂后，上述3个指标的浓度均有下降趋势。ALB能反映动物营养状况和免疫水平[25]。本试验单独添加2种吸附剂均使ALB浓度有所上升，这与Devegowda等[26]的研究结果一致。以上说明2种吸附剂能够维持ALB浓度，从而促进机体对营养物质的代谢。

3.2 2种吸附剂混合使用的效果 本试验2种吸附剂混合使用显著提高牦牛增重量，降低血清ALT浓度，这一结果与吕明斌等[16]、陈光明等[27]对肉鸡的相关研究吻合。但就检索文献看，未见二者配合使用时的推荐剂量，本试验Y0.2%+M0.1%组的牦牛增重量最大，且其ALT浓度低于对照组，由此说明该剂量吸附剂不仅可显著提高增重量，还有效保护肝脏的正常生理功能，可作为推荐使用剂量。此外，混合使用吸附剂时增重量的最大值大于2种吸附剂单独使用时的最大值，混合使用吸附剂时ALT浓度最小值也小于2种吸附剂单独使用时的最小值，可见，两者混合使用较单独使用任意一种吸附剂的作用效果更好，这也与陈光明等[25]的试验结果一致。张彩霞等[28]针对体外吸附试验也指出MMT与YCW配合使用较单一吸附剂的作用效果显著。这是由于MMT仅适于吸附带有极性基团的霉菌霉素，而不易吸附极性不强的霉菌毒素[29]，但YCW中β-葡聚糖恰好弥补了MMT的这一缺陷。β-葡聚糖呈非常稳定的螺旋结构，可通过氢键和范德华力与多种霉菌毒素相互作用[5]。而YCW中甘露寡糖（MOS）成分还起到免疫增强剂的作用，MOS不但能促进有益菌增殖，还能吸附病原菌，改善肠道微生态，增强动物非特异性免疫，提高动物抵抗力[30]。因此，2种吸附剂功能互补，使作用效果更显著。

4 结 论

适量添加MMT或YCW或混合使用2种吸附剂能促进牦牛体重增长，保护肝功能，且混合使用较单独使用，效果更优。牦牛日粮中MMT适宜添加量为0.1%，YCW为0.4%。推荐以MMT为0.1%、YCW为0.2%联合使用，可显著增加牦牛增重量，并具有保护肝功能的作用。