不同布氏菌病活疫苗免疫抗体消长规律试验

赵丹彤，吴梅花，侯振宇，杨春，鲁燕，吴咏梅，范秀丽，魏学峰，刘国英

（金宇保灵生物药品有限公司，呼和浩特 010030）

0 引言

布鲁氏菌病（brucellosis 又称布氏菌病或布氏杆菌病，简称“布病”）是由布鲁氏菌（brucella）引起的人畜共患传染病，广泛分布于世界各地，多种动物和禽类对布鲁氏菌均有不同程度的易感性[1]。自然感染以羊、牛和猪常见，其特征为生殖器官、胎膜及多种器官组织发炎、坏死和肉芽肿的形成，在临床上主要表现为波浪热、流产、不孕、睾丸及关节炎等症状[2]。但近年羊布氏菌病感染率呈明显上升趋势，不但严重危害我国畜牧业（包括养羊业在内）的健康发展，还严重威胁国内部分地区人们的健康、食品安全以及全社会的公共卫生安全。

1 材料与方法

1.1 疫苗

实验室制备的布氏菌病活疫苗（Rev.1株），批号为53003，布氏菌病活疫苗（S2株），批号为5393032，均由金宇保灵生物药品有限公司提供。

1.2 检测试剂

布鲁氏菌病试管凝集试验抗原、阳性对照、阴性对照、布鲁氏菌病虎红凝集试验抗原，均购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心。

1.3 试验动物

试验动物来源于定点供应基地，经布鲁氏菌病虎红平板凝集试验检测为阴性的绵羊70只。

1.4 试验分组与免疫

第1组为布氏菌活病疫苗（Rev.1株）免疫组，共计30只绵羊。将疫苗用布氏菌活病疫苗（Rev.1株）专用稀释液溶解稀释至20头份/mL（按每头份为1滴，1滴约0.05 mL计算），用专用滴眼器进行眼结膜接种，每只羊滴眼1头份（0.05 mL），含1×109CFU/头份。

第2组为布氏菌病活疫苗（S2株）免疫组，共计30只绵羊。将疫苗用生理盐水溶解稀释至1头份/mL，进行口服免疫，每只羊口服1头份，含1×1010CFU/头份。

第3组为空白对照组，共计10只，不接种疫苗，相同条件下隔离饲养。

1.5 试验步骤

所有试验羊分别于免疫前、免疫后14、21、28、49、60、90、120、150 d采血，分离血清，采用虎红平板凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）试验进行抗体测定。

2 结果

2.1 虎红平板凝集试验（RBT）抗体检测

2.1.1 判定标准

虎红平板凝集试验是国内外常用的一种诊断技术。在一次性虎红平板凝集反应板上加0.03 mL被检血清，再加入RBPT抗原0.03 mL，充分混匀，在5 min内观察结果，出现凝集即为阳性。

2.1.2 检测结果

2组疫苗免疫后14 d，检测抗体阳性率均能达到70%以上，免疫后21～28 d达到抗体最高峰，120 d下降至20%以下。虎红平板凝集试验见图1，检测结果见表1，2种疫苗免疫后抗体消长情况见图2。

表1 虎红平板凝集试验（RBT）检测结果 单位：%

2.2 试管凝集试验（SAT）抗体检测

2.2.1 判定标准

将被检血清用生理盐水倍比稀释，从1∶25至1∶3 200依次稀释成不同的稀释度，然后加入等量适当稀释的布鲁氏菌凝集反应抗原，混匀，放37 ℃温箱中18～20 h，取出温室放2 h后观察结果，绵羊、山羊、猪和犬等家畜为1∶50，“++”以上为阳性。

图1 虎红平板凝集试验

图2 2种疫苗免疫后抗体的消长情况

2.2.2 检测结果

两组疫苗免疫后21～28 d，检测抗体达到抗体高峰，且Rev.1株疫苗组在21 d抗体滴度达到最高值1∶3 200，但S2株疫苗组一直未达到1∶3 200。试管凝集试验见图3，检测结果见表2，2种疫苗免疫后抗体消长情况见图4。

表2 试管凝集试验（SAT）检测结果 单位：%

图3 试管凝集试验

图4 2种疫苗免疫后抗体的消长情况

3 讨论与结论

免疫结果表明，2种疫苗接种羊只后均没有出现明显不良反应。布氏菌活病疫苗（Rev.1株）免疫14 d后，抗体阳性率达到93%，21～28 d抗体达到高峰，抗体阳性率平均为97%，49 d后抗体逐渐下降，开始转阴，90 d抗体平均阳性率下降至40%，转阴率约为50%，210 d抗体几乎全部转阴（抗体阳性率3%）。布氏菌病活疫苗（S2株）免疫14 d后，抗体阳性率达到70%，21～28 d抗体达到高峰，平均79%，49 d后抗体逐渐下降，开始转阴，90 d抗体平均阳性率下降至13%，210 d抗体几乎全部转阴（抗体阳性率7%）[3]。

结果表明，2种疫苗免疫羊只后均产生较好的免疫效果。免疫14～120 d抗体消长期间，布氏菌活病疫苗（Rev.1株）比布氏菌病活疫苗（S2株）抗体阳性率高20%，而且羊只接种布氏菌病活疫苗（Rev.1株）后，抗体转阳快，转阳率高，转阴快，便于鉴别疫苗的免疫和自然感染，有利于布病净化。