CMIA法测定血清DCP与AFP对肝细胞癌的诊断价值*

毛丽萍，王跃国，王 健，黄圣勇

(1.南通市第三人民医院检验科，江苏南通 226006；2.南通大学附属医院感染科，江苏南通 226001)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见的一种原发性肝癌[1，2]，是男性罹患的第四大癌症[3]。甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)是目前应用最广泛的血清标志物之一[4]。但其敏感度仅为39%～65%，特异度仅为76%～94%[5]，因此，需要寻找新的血液标志物。异常凝血酶原即脱-γ-羧基凝血酶原(Des-gamma-carboxyprothrombin，DCP)，是一种异常的、无活性的凝血酶原，又称为维生素K缺乏或拮抗剂-Ⅱ诱导产生的蛋白(protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ)，为肝脏合成凝血酶原过程中凝血酶原前体未完全羧化形成的异常产物[6]。临床研究资料表明，DCP对HCC具有较高的诊断意义[6，7]。本文回顾性分析自开展微粒子化学发光免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA)检测DCP与AFP以来的相关临床资料，旨在评价联合测定DCP与AFP在HCC中的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 统计2017年6月～2018年4月南通市第三人民医院住院的HBV感染相关的HCC患者110例，其中男性91例，女性19例，平均年龄57.87±9.53岁，HCC的诊断标准依据中华人民共和国卫生部颁发的2011年版《原发性肝癌诊疗规范》[8]的组织学或影像学典型表现。所有HCC患者均未接受肝癌相关治疗如化疗药物应用、肝胆外科切除术、射频消融等。根据中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会2015年联合修订的《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[9]中的诊断标准随机选取一个肝炎病区患者作为对照，肝硬化组(liver cirrhosis，LC)54例，其中男性43例，女性11例，平均年龄52.13±10.84岁。慢性乙型肝炎组(chronic hepatitis B，CHB)63例，其中男性50例，女性13例，平均年龄46±10.91岁。所有患者均有乙肝病毒感染史。

1.2 方法 所有患者标本均在治疗前空腹采集，当日尽快送检，AFP和DCP测定均采用美国雅培i2000微粒子化学发光免疫分析系统检测，试剂盒均由其配套提供。AFP的诊断临界值为20 μg/L，DCP的诊断临界值为32.01 AU/L。

1.3 统计学分析 采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，DCP，AFP采用中位数和四分位数[M(P25，P75)]表示，两两比较用Mann-WhitneyU检验，多组之间比较采用Kruskal-WallisH检验。根据受试者工作曲线下面积(the area under the receiver operating characteristic curve，ROC-AUC)评估诊断的敏感度和特异度，Z检验比较AUC的差异，率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman秩相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCC，LC和CHB三组DCP和AFP检测结果比较 见表1。DCP，AFP多组比较，差异均有统计学意义(χ2=120.69，P<0.001；χ2=39.31，P<0.001)。HCC组DCP和AFP水平均显著高于LC组和CHB组，差异有统计学意义(Z=-8.75，-4.89，P=0.000；Z=-9.24，-5.37，P=0.000)。DCP与AFP水平在LC组与CHB组间差异均无统计学意义(Z=-0.558，P=0.577；Z=-0.077，P=0.939，均P>0.05)。

表1 各组DCP和AFP检测结果的比较[中位数(M25，M75]

注：*vs LC，**vs CHB，***vs HCC。

2.2 DCP和AFP水平对HCC诊断价值的ROC曲线分析 当对照组设为LC+CHB组共117例时，DCP诊断HCC的ROC曲线下面积为0.922(95%CI 0.879～0.965)，SE=0.022。AFP的曲线下面积为0.741(95%CI 0.677～0.805)，SE=0.033，见图1A。DCP诊断HCC的ROC-AUC值显著大于AFP(Z=4.56，P=0.000)。根据ROC曲线DCP诊断HCC最佳cutoff值为32.49 AU/L，与试剂盒提供的诊断临界值32.01 AU/L非常接近。所以我们采用DCP诊断HCC的临界值为32.01 AU/L，AFP的诊断临界值为20 μg/L。当对照组设为LC组54例时，DCP诊断HCC的ROC曲线下面积为0.921(95%CI 0.878～0.964)，SE=0.022。AFP的曲线下面积为0.735(95%CI 0.659～0.811)，SE=0.039，见图1B。DCP诊断HCC的ROC-AUC值亦显著大于AFP(Z=4.15，P=0.000)。

A：对照组=LC+CHB；B：对照组=LC

2.3 分析DCP与AFP两指标及联合检测对HCC的诊断效能 当对照组设为LC+CHB共117例时，参照文献[10]的多项目检测方案按并联试验即DCP与AFP两指标中有1项阳性即诊断为阳性，或串联试验即DCP与AFP两指标均阳性即诊断为阳性的方案进行诊断效能评价。结果见表2。DCP诊断HCC的敏感度显著高于AFP(χ2=25.22，P<0.001)。DCP与AFP的并联方案与DCP单独检测相比不能提高诊断HCC的敏感度(χ2=1.98，P=0.159)。DCP诊断HCC的特异度显著高于AFP(χ2=12.57，P<0.001)。DCP与AFP的串联方案与DCP单独检测相比诊断HCC的特异度有所提高(P=0.019)。以54例LC组为对照组时，DCP诊断HCC的敏感度和特异度分别为88.18%和94.17%，AFP诊断HCC的敏感度和特异度分别为58.18%和72.22%。DCP诊断HCC的敏感度和特异度均高于AFP(χ2=25.22，4.79，均P<0.05)。

表2 DCP与AFP单项及联合检测对HCC的诊断效能

注：DCP+AFP即DCP与AFP均阳性诊断为阳性，DCP/AFP即DCP与AFP有1项阳性诊断为阳性。

2.4 DCP和AFP两指标间的相关性分析 Spearman秩相关分析110例HCC患者DCP与AFP水平，发现两指标间具有弱相关性(r=0.367)。39例HCC患者DCP大于诊断临界值32.01 AU/L而AFP小于20 μg/L。6例HCC患者AFP大于诊断临界值20 μg/L而DCP小于32.01 AU/L。提示两指标在提高诊断HCC患者阳性率时可以互相补充。

2.5 DCP，AFP与肿瘤大小的相关性分析 31例HCC患者在本院进行了手术切除治疗，其最后诊断及肿瘤大小依据病理检查结果，超过一枚的按总体积计算肿瘤大小，多枚中以最大直径者定为肿瘤直径。DCP与肿瘤大小具有正相关性(r=0.633)。在16例肿瘤直径≤3 cm的HCC患者中有12例DCP阳性，其中仅5例AFP大于诊断临界值，即双阳性5例，有3例AFP阳性但DCP阴性，仅1例双阴性。结果表明DCP在诊断肿瘤直径≤3 cm的HCC患者中比AFP有较高的阳性率。两指标在提高诊断肿瘤直径≤3 cm的HCC患者阳性率时可以互相补充。

3 讨论

随着蛋白质组学、分子生物学等技术的不断发展，对肝癌诊断的实验室标志物研究取得了很大进展。如DKK1，TEMs，circRNAs，microRNA等[11～14]，但是，大多数肝癌标志物的研究还只处于实验室阶段。有些需要组织样本，有些有较高的操作技术要求，有些局限于检测方法的敏感度和特异度，限制了他们的临床实际应用价值。

DCP是一个已经进入临床应用阶段的肝癌血清标志物，目前已有商品化的自动化学发光酶联免疫检测试剂盒(LUMIPULSE G1200，FUJIREBIO)、微粒子化学发光免疫分析试剂盒(ARCHITECT i2000，Abbott)。本研究回顾性分析自科室开展本项目以来DCP与AFP在HCC中的临床诊断价值，研究结果显示，HCC组DCP和AFP水平均显著高于LC组和CHB组(P<0.001)。当对照组设为LC+CHB组时，DCP诊断HCC的ROC曲线下面积均显著大于AFP(0.922 vs 0.741，P<0.001)。表明，DCP的检测效能优于AFP，与周淑燕等[15]以肝硬化、慢性乙型肝炎和健康体检者为对照组的DCP诊断原发性肝癌(PHC)的ROC值(0.776)显著高于AFP的ROC值(0.649)的研究结果相似。

本研究中AFP诊断HCC的敏感度和特异度仅为58.18%和75.21%。临床需要增加其它血液标志物以补充AFP诊断HCC的不足。以LC+CHB组为对照组时，DCP诊断HCC的敏感度和特异度均显著高于AFP(均P<0.001)。DCP与AFP的并联方案与DCP单独检测相比不能提高诊断HCC的敏感度(P=0.159)。DCP与AFP的串联方案与DCP单独检测相比诊断HCC的特异度有所提高(P=0.019)。与其它文献[15]报道的两者联合检测时较各自单独检测的敏感度和特异度均升高的结果不一致。以LC为对照组时，DCP诊断HCC的敏感度和特异度亦均显著高于AFP(均P<0.05)。敏感度高于文献报道的以LC为对照组DCP诊断HCC的敏感度(51%)，特异度与之报道的91.2%相似[16]。可能与测定DCP的方法学差异有关，该文献是以ELISA方法测定，而本研究是以微粒子化学发光免疫分析系统测定的。其次可能与人群及样本量不同导致的统计偏差相关。

本研究通过Spearman秩相关分析发现DCP与肿瘤大小呈正相关(r=0.633)。与秦亚楠等[17]的研究结果(r=0.63)非常接近。DCP在诊断肿瘤直径≤3 cm的HCC患者中比AFP有较高的阳性率。同时，相关性分析发现，DCP与AFP两指标间具有弱相关性(r=0.367)。提示两指标在提高诊断HCC患者阳性率时可以互相补充。

目前，DCP适用于HCC监测已经写入国家《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》[18]。血清DCP作为一种新的诊断HCC的实验室诊断标志物，与AFP相比有较高的敏感度和特异度，两者联合检测能够提高HCC患者的检出率，值得临床应用和推广。