草苁蓉药酒质量控制方法研究

1.大兴安岭地区食品药品检验检测所，黑龙江 加格达奇 165000；2.大兴安岭职业学院，黑龙江 加格达奇 165000

草苁蓉(BoschniakiarossicaFedtsch et Flerov)又名不老草[1]，为列当科多年生寄生肉质草本，常寄生于桦木科桤木(东北桤木，又称东北赤扬)的须根上，草苁蓉被列入《中国珍稀濒危保护植物名录》[2]，为国家二级保护植物。主要分布在我国的长白山和大小兴安岭地区，在日本的富士山区、俄罗斯的西伯利亚地区和朝鲜的北部山区亦有分布[3]。草苁蓉主要成分是地上部分含草苁蓉碱和草苁蓉内酯、C9、C10和C11萜内酯以及猕猴桃碱；根含有草苁蓉酸、草苁蓉碱、2-羟基甲基-3-甲基环戌基乙酸内酯及甘露醇等[4]。草苁蓉具有补肾壮阳、润肠止血、滋补强身、延年益寿的功效，主要应用于保护肝脏[5]，可诱导肝脏清除自由基、增强机体免疫力[6]、抑制脂质过氧化作用，抗衰老和抗癌作用等。草苁蓉在大兴安岭地区各林业局均有分布，为民间习用药材，应用较为广泛，老百姓经常用之泡酒后饮用，以达到强身健体、治疗疾病的目的。但目前对草苁蓉及草苁蓉药酒的质量控制方法研究还很少。本研究首次提出草苁蓉药酒的质量控制分析方法，通过对10批次大兴安岭地区产的草苁蓉样品用白酒浸泡后，用高效液相色谱法测定其色谱图，标示出共有峰，为今后草苁蓉药酒浸泡时间、贮存时间的考察及质量控制提供参考。

1 仪器与试药

岛津2010A液相色谱仪；电子天平(赛多利斯AE200)。液相用甲醇、磷酸为色谱纯。溶剂为北大荒集团生产的54度白酒。10批次草苁蓉药材分别购买于大兴安岭地区的松岭、新林、呼玛、塔河、十八站和加格达奇，经大兴安岭地区农林科学院北药专家刘光鉴定为列当科草苁蓉属植物草苁蓉。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Thermo C18-2 HYPERSIL柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.4%的磷酸溶液；检测波长：260 nm；柱温：30℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；分析时间为95 min。梯度洗脱条件见下表1。

表1 梯度洗脱条件

2.2 样品溶液制备 取草苁蓉药材干品5支(完整的)，称定重量，按重量比1∶15的比例加入54度白酒，密封，浸泡15天，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 稳定性试验 取S1供试品溶液，在同样条件下分别间隔0、4、8、12、16、24 h六个不同时间点吸取10μL注入液相色谱仪，考察各共有峰保留时间和峰面积的RSD范围为 0.01%～0.11%和 0.17%～2.38% ，均小于3%。

2.4 精密度试 验取S2供试品溶液，连续进样六针，考察各共有峰保留时间和峰面积的RSD范围为0.01%～0.07%和 0.17%～1.93% ，均小于3%。

2.5 重复性试 验取S3样品，在同样条件下分别称取五份，按建立的方法测定，考察各共有峰保留时间和峰面积的RSD范围为0.01%～0.05%和 0.41%～2.82%，均小于3%。

2.6 样品测定 分别吸取供试品溶液，过0.45 μm滤膜，进样量10 μL，记录95 min的色谱图。过对10批次草苁蓉药酒色谱图(扣除背景)的分析，根据色谱峰的保留时间，确定了11个保留时间相同、峰面积较大(见图1)的共有峰。用此方法检测出的各色谱峰分离度和峰形均较好，基线比较平稳，出峰时间和峰面积重现性较好，共有峰峰面积之和约占总峰面积的90%。

3 讨论

实验中对比了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-磷酸溶液，乙腈-磷酸溶液等不同流动相，发现用甲醇-磷酸溶液做流动相进行梯度洗脱，基线较平稳，色谱峰形较好，又对不同的检测波长进行了考察，最后发现在260 nm处峰吸收效果较好，峰数较多，峰高也适宜。实验中样品用54度白酒浸泡，主要是根据民间习用方法，用粮食酒(一般50～60°之间)浸泡后服用。

本实验的样品只是针对黑龙江省大兴安岭地区产的草苁蓉样品，未对吉林和内蒙等其他地区产的草苁蓉药酒进行检测，建议可用此方法进行对比试验，看是否也适用。用此方法检测出的11个共有峰，能够反应草苁蓉药酒的整体质量变化情况，亦可用于草苁蓉药酒的真假鉴别。