结直肠癌MICA基因的表达与p53、K—ras基因突变的关系研究

2018-12-06 07:44朱晟易徐永强
中国现代医生 2018年30期
关键词:结直肠癌

朱晟易 徐永强

[摘要] 目的 研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系。 方法 选取我院从2015年8月~2017年8月132例结直肠癌患者为此次研究对象行回顾性分析,应用半定量PCR-SSCP技术,进行mRNA水平的检测,对结直肠癌组织MICA基因表达量与p53、K-ras進行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变之间的相互关联。 结果 在K-ras基因突变组中的MICA平均表达量显著高于K-ras基因未突变组,差异具有统计学意义(P<0.05);在p53基因突变组中的MICA平均表达量显著高于p53基因未突变组, 差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论 高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切,MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键,应引起人们的广泛关注。

[关键词] 结直肠癌;MICA基因;p53基因;K-ras基因

[中图分类号] R735.34 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2018)30-0006-04

[Abstract] Objective To study the relationship between the expression of MICA gene in colorectal cancer and the mutations of p53 and K-ras genes. Methods 132 patients with colorectal cancer from August 2015 to August 2017 in our hospital were selected as the study subjects, and they were retrospectively analyzed. Semi-quantitative PCR-SSCP technique was used for the detection at the mRNA level. The expression quantity of MICA gene in colorectal cancer tissues and p53 and K-ras were detected. The correlation between MICA gene expression in colorectal cancer and mutations in p53 and K-ras genes was analyzed. Results The average expression quantity of MICA in K-ras gene mutants group was significantly higher than that in K-ras gene non-mutants group, and the difference was statistically significant(P<0.05); the average expression quantity of MICA in p53 gene mutants group was significantly higher than that in p53 gene non-mutants group, and the difference was statistically significant(P<0.05). Conclusion The occurrence of highly expressed MICA gene may be closely related to the mutation of p53 and K-ras genes. The expression of MICA gene is the key to the current detection of colorectal cancer and should be widely concerned.

[Key words] Colorectal cancer; MICA gene; p53 gene; K-ras gene

]结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,位于消化道内,发病率较高,直肠与乙状结肠相交联的地方是临床上该疾病发病最常见的位置,占总比重的3/5。且患病与年龄、性别有一定的关系,年龄长者患此病的风险更大,其中,男性患此病的概率大约为女性的两倍[1]。世界卫生组织(WHO)国际癌症科研中心数据显示,全球恶性肿瘤的发病率排名中,肺癌的发病率位居第一位,乳腺癌的发病率位居第二位,结直肠癌发病率位居第三位,结直肠癌在全球恶性肿瘤死亡率位于第四位[2]。本次研究取材于2015年8月~2017年8月来我院治疗的结直肠癌患者132例为研究对象,研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系,给结直肠癌在临床上的诊疗与治疗提供相应的理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取自2015年8月~2017年8月我院132例结直肠癌患者为此次研究对象,其中,男72例,平均年龄(42.5±12.6)岁;女60例,平均年龄(42.7±13.5)岁。对26例患者进行姑息性切除术,对另外的106例患者进行结直肠癌根治术。纳入标准:患者知情同意本研究;病历资料完整。排除标准:合并免疫系统疾病;合并严重肝肾功能障碍[3]。

根治性手术:是一种对于结直肠癌疾病能起到高效治疗的手术方法,同时也能防止肝转移现象的发生。手术涉及到肿瘤病发地及其周围的组织或者器官,执行手术的方案因肿瘤部位的不同而不同,常执行的原则为完整结肠系膜切除(CME)[4]。

结肠癌根据其发病情况,可分为4期:Duke A期(44例),Duke B期(46例),Duke C期(20例),Duke D期(22例)。

1.2方法

1.2.1 建立档案 记录患者的年龄、性别、联系方式、家庭情况等,同时记录患者的疾病类型、疾病病程、既往发病等相关情况。患者每次就诊后要将其病情如实记录,保留患者完整的病例记录。患者均知情同意本研究,同时经过我院伦理委员会批准,将132例分为K-ras基因突变组62例及K-ras基因未突变组70例,同时将132例分为p53基因突变组80例及p53基因未突变组52例。

1.2.2 提取结直肠癌基因组的DNA 取出组织研磨,消化,超速离心,DNA沉于试管底部,弃上清液,加入800 mL氯仿进行抽提,最后放置于无水乙醇(提前预冷)中,静置等沉淀析出,将TE溶解,留存便于进行后续的实验。PCR反应程序:总体系达20 μL,于94℃变性(75 s),54℃退火(60 s),72℃延伸(60 s),循环30次。电泳及银染:取出5 μL PCR产物,加入5 μL缓冲液混合,在98℃变性处理300 s,冷浴150 s,加入聚丙烯酰胺(8%),进行电泳并进行银染鉴定[5]。

1.2.3 分子生物学水平实验-免疫组化 (1)标本:EDTA抗凝全血20 mL;(2)DNA抽提:运用Peacl-Treeze说明书中的方法;(3)测序:PCR扩增:扩增1号外显子-8号外显子,37℃ 35 min,80℃ 10 min,其中,1号外显子-4号外显子和5号外显子-8号外显子分别进行扩增。PCR扩增体系:DNA酶Ⅰ2 μL,PCR产物8 μL,热稳定性酶8 μL,改程序:95℃ 1 min,45℃ 35 s,59℃3 min,循环40次,冷却到18℃[6];(4)Gene Scan检测 扩增反应总体系40 μL。检测程序:按比例20%稀释产物,40 μL体系中,已知19.2 μL,未知品0.8 μL,95℃变性(5 min),扫描,分析结果。基因扫描分析和结果判断:运用程序AongTapcher测出结果[7]。

1.3 观察指标

观察直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系[8]。

1.4 统计学处理

数据应用SPSS18.0进行统计学分析,其中计数资料采用χ2检验,计量资料以(x±s)表示,采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 K-ras基因与MICA表达量的分析

K-ras基因突变组中MICA平均表达量高于K-ras基因未突变组,差异具有统计学意义(P<0.05)(表1)。

2.2 p53基因与MICA表达量的分析

p53基因突变组中MICA平均表达量高于p53基因未突变组,差异具有统计学意义(P<0.05)(表2)。

3讨论

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,有研究报道,结直肠肿瘤中MICA表达情况所占的总比重显著高于正常结直肠组织中的[9]。随着科学技术的不断发展,现在有关结直肠癌的发病原理和结直肠癌发病的机制有较多研究。且越来越多研究在分子生物学水平进行的结果显示,就相对于结直肠肿瘤细胞来看,其靶点作用于化疗应答反应灵敏性的细胞和组织[10]。结直肠癌发病部位位于消化道内,且发病率较高,直肠与乙状结肠相交联处是临床上最常见的该疾病的发病部位,其概率占总比重的3/5[11]。且患该病与年龄、性别存在一定的关系,年龄长者患此病的风险更大,其中,男性患此病的概率大约为女性的2倍[12]。结直肠癌患者在饮食方面需要注意,不能吃刺激性的东西,忌生冷的食物和辛辣的食物。平时可以按期去医院做相关的检查,消除潜在的隐患,早发现早治疗。如果患者没有空闲的时间去医院,在家里运用试纸也能进行检查。在运动方面要合理运动,最好在医生的指导下制定属于自己的运动计划,禁止长时间坐着不动。适当的娱乐性活动也是必要的,养成良好的作息习惯,不可熬夜、长时间看电视、打麻将等不利于身体健康的行为。结直肠癌研究至今,具体的致病因素、发生、发展仍尚不明确[13]。但已有研究报道了可能的因素,患者可能是平时饮食多食用高脂、高糖、高蛋白等类的食品导致疾病的发生;或是存在遗传方面的原因,这方面有早期研究发现,在直肠癌患者的家族群系中,有25%左右的疾病是伴随着家族史出现的、有规律的发病情况,其中,有一半的患者为男性结直肠癌患者[14]。

人体中存在原癌基因和抑癌基因,若正常人的细胞其基因发生了突变,患癌病人的免疫力就会降低,在此基础上,若再受到某种不利因素的刺激,则会使组织细胞快速生长,最终演变为癌症[15]。具有遗传性质的基因改变,常常表现出癌肿的家族性[16]。此外,此疾病的发生与发展,还与外界因素,如适应环境的敏感能力、气候因素、温度因素等有着十分密切的关系[17]。ras属于原癌基因,p53属于抑癌基因,结直肠癌发生形成的过程,也就是原癌基因和抑癌基因的突变所致,是普通基因突变的现象[18]。前期研究中发现,p53基因突变在结直肠癌的病发中大约所占比重为75%,且多为第7外显子和第8外显子的突变;K-ras基因的第12位点上大都发生ras基因的突变,且有50%的高突变率[19]。WT1基因也是一种抑癌基因,它可以调控MICA基因的表达,p53基因可以通过影响WT1基因从而对细胞产生耐药性,MICA基因产物P-gp蛋白包括诱导耐药的主要成分。肝脏是人体主要的器官之一,在结直肠癌疾病中作为一种重要的靶器官,很大比重的结直肠癌患者的发病伴随着肝转移(colorectal cancer liver metastases),所以这是治疗此疾病所面临的重点和难点。结直肠癌肝转移是结直肠癌患者主要的致死原因[20]。

本次研究取材于2015年8月~2017年8月來我院治疗的结直肠癌患者132例为研究对象,研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系。其中,在K-ras基因突变者中MICA平均表达量显著高于K-ras基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05);在p53基因突变者中MICA平均表达量显著高于p53基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05)。高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切,MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键,应引起人们的广泛关注。

综上所述,高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切,MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键,应引起人们的广泛关注。

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(收稿日期:2018-06-05)

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