结直肠癌MICA基因的表达与p53、K—ras基因突变的关系研究

朱晟易 徐永强

[摘要] 目的 研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系。 方法 选取我院从2015年8月～2017年8月132例结直肠癌患者为此次研究对象行回顾性分析，应用半定量PCR-SSCP技术，进行mRNA水平的检测，对结直肠癌组织MICA基因表达量与p53、K-ras進行检测，并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变之间的相互关联。 结果 在K-ras基因突变组中的MICA平均表达量显著高于K-ras基因未突变组，差异具有统计学意义（P<0.05）；在p53基因突变组中的MICA平均表达量显著高于p53基因未突变组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切，MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键，应引起人们的广泛关注。

[关键词] 结直肠癌；MICA基因；p53基因；K-ras基因

[中图分类号] R735.34 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）30-0006-04

[Abstract] Objective To study the relationship between the expression of MICA gene in colorectal cancer and the mutations of p53 and K-ras genes. Methods 132 patients with colorectal cancer from August 2015 to August 2017 in our hospital were selected as the study subjects， and they were retrospectively analyzed. Semi-quantitative PCR-SSCP technique was used for the detection at the mRNA level. The expression quantity of MICA gene in colorectal cancer tissues and p53 and K-ras were detected. The correlation between MICA gene expression in colorectal cancer and mutations in p53 and K-ras genes was analyzed. Results The average expression quantity of MICA in K-ras gene mutants group was significantly higher than that in K-ras gene non-mutants group， and the difference was statistically significant（P<0.05）； the average expression quantity of MICA in p53 gene mutants group was significantly higher than that in p53 gene non-mutants group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The occurrence of highly expressed MICA gene may be closely related to the mutation of p53 and K-ras genes. The expression of MICA gene is the key to the current detection of colorectal cancer and should be widely concerned.

[Key words] Colorectal cancer； MICA gene； p53 gene； K-ras gene

]结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，位于消化道内，发病率较高，直肠与乙状结肠相交联的地方是临床上该疾病发病最常见的位置，占总比重的3/5。且患病与年龄、性别有一定的关系，年龄长者患此病的风险更大，其中，男性患此病的概率大约为女性的两倍[1]。世界卫生组织（WHO）国际癌症科研中心数据显示，全球恶性肿瘤的发病率排名中，肺癌的发病率位居第一位，乳腺癌的发病率位居第二位，结直肠癌发病率位居第三位，结直肠癌在全球恶性肿瘤死亡率位于第四位[2]。本次研究取材于2015年8月～2017年8月来我院治疗的结直肠癌患者132例为研究对象，研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系，给结直肠癌在临床上的诊疗与治疗提供相应的理论依据。

1资料与方法

1.1一般资料

选取自2015年8月～2017年8月我院132例结直肠癌患者为此次研究对象，其中，男72例，平均年龄（42.5±12.6）岁；女60例，平均年龄（42.7±13.5）岁。对26例患者进行姑息性切除术，对另外的106例患者进行结直肠癌根治术。纳入标准：患者知情同意本研究；病历资料完整。排除标准：合并免疫系统疾病；合并严重肝肾功能障碍[3]。

根治性手术：是一种对于结直肠癌疾病能起到高效治疗的手术方法，同时也能防止肝转移现象的发生。手术涉及到肿瘤病发地及其周围的组织或者器官，执行手术的方案因肿瘤部位的不同而不同，常执行的原则为完整结肠系膜切除（CME）[4]。

结肠癌根据其发病情况，可分为4期：Duke A期（44例），Duke B期（46例），Duke C期（20例），Duke D期（22例）。

1.2方法

1.2.1 建立档案 记录患者的年龄、性别、联系方式、家庭情况等，同时记录患者的疾病类型、疾病病程、既往发病等相关情况。患者每次就诊后要将其病情如实记录，保留患者完整的病例记录。患者均知情同意本研究，同时经过我院伦理委员会批准，将132例分为K-ras基因突变组62例及K-ras基因未突变组70例，同时将132例分为p53基因突变组80例及p53基因未突变组52例。

1.2.2 提取结直肠癌基因组的DNA 取出组织研磨，消化，超速离心，DNA沉于试管底部，弃上清液，加入800 mL氯仿进行抽提，最后放置于无水乙醇（提前预冷）中，静置等沉淀析出，将TE溶解，留存便于进行后续的实验。PCR反应程序：总体系达20 μL，于94℃变性（75 s），54℃退火（60 s），72℃延伸（60 s），循环30次。电泳及银染：取出5 μL PCR产物，加入5 μL缓冲液混合，在98℃变性处理300 s，冷浴150 s，加入聚丙烯酰胺（8%），进行电泳并进行银染鉴定[5]。

1.2.3 分子生物学水平实验-免疫组化 （1）标本：EDTA抗凝全血20 mL；（2）DNA抽提：运用Peacl-Treeze说明书中的方法；（3）测序：PCR扩增：扩增1号外显子-8号外显子，37℃ 35 min，80℃ 10 min，其中，1号外显子-4号外显子和5号外显子-8号外显子分别进行扩增。PCR扩增体系：DNA酶Ⅰ2 μL，PCR产物8 μL，热稳定性酶8 μL，改程序：95℃ 1 min，45℃ 35 s，59℃3 min，循环40次，冷却到18℃[6]；（4）Gene Scan检测 扩增反应总体系40 μL。检测程序：按比例20%稀释产物，40 μL体系中，已知19.2 μL，未知品0.8 μL，95℃变性（5 min），扫描，分析结果。基因扫描分析和结果判断：运用程序AongTapcher测出结果[7]。

1.3 观察指标

观察直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系[8]。

1.4 统计学处理

数据应用SPSS18.0进行统计学分析，其中计数资料采用χ2检验，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 K-ras基因与MICA表达量的分析

K-ras基因突变组中MICA平均表达量高于K-ras基因未突变组，差异具有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.2 p53基因与MICA表达量的分析

p53基因突变组中MICA平均表达量高于p53基因未突变组，差异具有统计学意义（P<0.05）（表2）。

3讨论

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，有研究报道，结直肠肿瘤中MICA表达情况所占的总比重显著高于正常结直肠组织中的[9]。随着科学技术的不断发展，现在有关结直肠癌的发病原理和结直肠癌发病的机制有较多研究。且越来越多研究在分子生物学水平进行的结果显示，就相对于结直肠肿瘤细胞来看，其靶点作用于化疗应答反应灵敏性的细胞和组织[10]。结直肠癌发病部位位于消化道内，且发病率较高，直肠与乙状结肠相交联处是临床上最常见的该疾病的发病部位，其概率占总比重的3/5[11]。且患该病与年龄、性别存在一定的关系，年龄长者患此病的风险更大，其中，男性患此病的概率大约为女性的2倍[12]。结直肠癌患者在饮食方面需要注意，不能吃刺激性的东西，忌生冷的食物和辛辣的食物。平时可以按期去医院做相关的检查，消除潜在的隐患，早发现早治疗。如果患者没有空闲的时间去医院，在家里运用试纸也能进行检查。在运动方面要合理运动，最好在医生的指导下制定属于自己的运动计划，禁止长时间坐着不动。适当的娱乐性活动也是必要的，养成良好的作息习惯，不可熬夜、长时间看电视、打麻将等不利于身体健康的行为。结直肠癌研究至今，具体的致病因素、发生、发展仍尚不明确[13]。但已有研究报道了可能的因素，患者可能是平时饮食多食用高脂、高糖、高蛋白等类的食品导致疾病的发生；或是存在遗传方面的原因，这方面有早期研究发现，在直肠癌患者的家族群系中，有25%左右的疾病是伴随着家族史出现的、有规律的发病情况，其中，有一半的患者为男性结直肠癌患者[14]。

人体中存在原癌基因和抑癌基因，若正常人的细胞其基因发生了突变，患癌病人的免疫力就会降低，在此基础上，若再受到某种不利因素的刺激，则会使组织细胞快速生长，最终演变为癌症[15]。具有遗传性质的基因改变，常常表现出癌肿的家族性[16]。此外，此疾病的发生与发展，还与外界因素，如适应环境的敏感能力、气候因素、温度因素等有着十分密切的关系[17]。ras属于原癌基因，p53属于抑癌基因，结直肠癌发生形成的过程，也就是原癌基因和抑癌基因的突变所致，是普通基因突变的现象[18]。前期研究中发现，p53基因突变在结直肠癌的病发中大约所占比重为75%，且多为第7外显子和第8外显子的突变；K-ras基因的第12位点上大都发生ras基因的突变，且有50%的高突变率[19]。WT1基因也是一种抑癌基因，它可以调控MICA基因的表达，p53基因可以通过影响WT1基因从而对细胞产生耐药性，MICA基因产物P-gp蛋白包括诱导耐药的主要成分。肝脏是人体主要的器官之一，在结直肠癌疾病中作为一种重要的靶器官，很大比重的结直肠癌患者的发病伴随着肝转移（colorectal cancer liver metastases），所以这是治疗此疾病所面临的重点和难点。结直肠癌肝转移是结直肠癌患者主要的致死原因[20]。

本次研究取材于2015年8月～2017年8月來我院治疗的结直肠癌患者132例为研究对象，研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系。其中，在K-ras基因突变者中MICA平均表达量显著高于K-ras基因未突变者，差异具有统计学意义（P<0.05）；在p53基因突变者中MICA平均表达量显著高于p53基因未突变者，差异具有统计学意义（P<0.05）。高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切，MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键，应引起人们的广泛关注。

综上所述，高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切，MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键，应引起人们的广泛关注。

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（收稿日期：2018-06-05）