膀胱癌患者miR—29的表达特点及临床意义

吴军 黄群 黄敏玉 孟冬冬 覃天资

【摘要】目的觀察膀胱癌患者miR-29的表达情况，并分析其临床意义。方法选取2014年10月～2017年12月接受治疗的膀胱癌患者为研究对象，用横断面方法抽取Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级膀胱移行细胞癌（BTCC）不同患者，同时选取同期接受体检的健康成年人作为对照。观察不同组别miR-29表达情况，并观察不同临床特征膀胱癌患者的miR-29表达，分析影响膀胱癌患者miR-29表达的因素。结果膀胱癌患者的miR-29a、miR-29b、miR-29c相对表达量高于对照组，且Ⅲ级膀胱癌患者的表达量最高；中、低分化，有淋巴结转移，浸润深度为T3+T4，TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c相对表达量较高，而不同年龄、不同性别的患者中miR-29a、miR-29b、miR-29c表达量无明显差别；将单因素分析有意义的临床分级、分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期作为自变量，将miR-29a、miR-29b、miR-29c的表达情况作为因变量进行回归分析，结果分化程度和临床分级进入回归方程，说明分化程度和临床分级是miR-29表达的影响因素。结论膀胱癌患者的miR-29表达水平较高，且与患者的临床分级、分化程度密切相关。

【关键词】膀胱癌；miR-29；影响因素；病理

中图分类号：R737.14文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2018.05.002

【Abstract】ObjectiveTo observe the expression of miR-29 in patients with bladder cancer，and to analyze its clinical significance.MethodsPatients with bladder cancer who were treated in our hospital from October 2014 to December 2017 were selected as research subjects，and different patients with grade Ⅰ，grade Ⅱ and grade Ⅲ bladder transitional cell carcinoma（BTCC） were taken by cross-sectional method.At the same time，healthy adults who were examined during the same period were selected as controls.The expression of miR-29 in different groups and the expression of miR-29 in patients with bladder cancer with different clinical characteristics were observed，and factors influencing the expression of miR-29 in patients with bladder cancer were analyzed.ResultsThe relative expressions of miR-29a，miR-29b and miR-29c in bladder cancer patients were higher than those in the control group，and the expression level in patients with grade Ⅲ bladder cancer was the highest.The relative expressions of miR-29a，miR-29b and miR-29c in patients with middle and low differentiation，lymph node metastasis，infiltration depth of T3+T4 and TNM stage Ⅲ+Ⅳ were relatively high，but there was no significant difference in the expression of miR-29a，miR-29b and miR-29c in patients with different ages and genders.Clinical grade，differentiation degree，lymph node metastasis，depth of invasion and TNM stage with significance by univariate analysis were used as independent variables，the expressions of miR-29a，miR-29b and miR-29c were used as dependent variable for regression analysis，and differentiation degree and clinical classification entered regression equation，which showed that the degree of differentiation and clinical grade were the influencing factors of miR-29 expression.ConclusionThe expression level of miR-29 in bladder cancer patients is high，and is closely related to the clinical classification and differentiation degree of the patients.

【Key words】bladder cancer；miR-29；influencing factors；pathology

流行病学研究证实，近年来膀胱癌的发生率具有一定的上升表现，我国2010～2017年部分地区的膀胱癌发病率可达（272～373）/10万人[1]。临床上膀胱癌的发生能够导致患者无瘤生存时间缩短，提高了患者的病死风险[2]。在揭示膀胱癌的发病机制的过程中发现，微小RNA的改变可能在促进恶性肿瘤的发生或者病情进展方面发挥了重要的作用。miR-29作为重要的非编码RNA，能显著影响肿瘤细胞的生物学特性，导致早期上皮细胞异常病变的发生。miR-29能够通过激活癌细胞的上游转录过程，进而提高癌细胞的增殖速度[3～4]。部分研究者报道了miR-29在消化系统及生殖系统恶性肿瘤发生过程中的作用，认为miR-29的表达浓度的上升与肿瘤患者临床分期的进展、癌细胞浸润深度的增加密切相关[5～6]，但对于miR-29的表达与膀胱癌的临床病理特征的分析研究较少。为了揭示miR-29的表达与膀胱癌的关系，从而为临床上膀胱的血清学诊断或者临床预后评估提供参考，本次研究选取2014年10月～2017年12月在我院接受治疗的膀胱癌患者为研究对象，探讨了miR-29的表达及其与患者临床病理特征的关系。

1资料与方法

1.1一般资料选取2014年10月～2017年12月在我院接受治疗的膀胱癌患者为研究对象。纳入标准：（1）年龄≥18周岁；（2）经术中病理诊断为膀胱癌；（3）无其他系统严重疾病者。排除标准：（1）临床资料不全者；（2）合并其他部位原发肿瘤者。根据纳入排除标准共纳入病例数150例，Ⅰ级50例，Ⅱ级50例，Ⅲ级50例，男90例，女60例，年龄45～63岁，平均（55.08±4.02）岁；对照组纳入排除标准：（1）年龄≥18岁；（2）无其他部位原发肿瘤者。共纳入100例，男80例，女20例，年龄45～68岁，平均（55.11±3.98）岁。本项研究经医院伦理委员会评审通过，且所有患者均知情同意。

1.2检测方法miR-29的检测：采集患者空腹血5 mL，加入0.2 mL的氯仿，2～8 ℃冰冻离心机中离心 （12 000 g/min，15 min），反复一次洗涤RNA，弃上清，在管底部可见一乳白色小沉淀物，加入1 mL 75%乙醇，0.1% DEPC水溶解。加入GAPDH上下游引物、0.1% DEPC使其终浓度均为 20 pmol/μL，制备反应体系，RT-PCR 扩增的条件与参数：48 ℃，45 min，94 ℃，2 min；94 ℃ 30 s，58 ℃ 60 s，68 ℃ 2 min共40个循环；循环完毕后68 ℃ 延伸 7 min。

1.3评价指标观察不同组别研究对象miR-29表达情况，并比较不同临床特征膀胱癌患者miR-29的表达，分析影响膀胱癌患者miR-29表达的因素。

1.4统计学方法数据录入后，采用SPSS 19.0软件进行分析。计量资料如符合正态分布，采用均数±标准差（±s）表示，膀胱癌患者和对照组的比较采用方差分析，组间两两比较采用SKD法进行处理，不同临床特征miR-29表达情况的比较采用t检验进行分析，采用多重逐步回归分析法分析影响膀胱癌患者miR-29表达情况的因素。检验水准：α=0.05，双侧检验。

2结果

2.1膀胱癌患者和对照组miR-29a、miR-29b、miR-29c表达情况的比较膀胱癌患者的miR-29a、miR-29b、miR-29c相对表达量高于对照组（P<0.05），且Ⅲ级膀胱癌患者的表达量最高。见表1。

2.2不同特征膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表达情况的比较中、低分化，有淋巴结转移，浸润深度为T3+T4，TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c相对表达量较高（P<0.05），而不同年龄、不同性别的患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表达量无明显差别（P>005）。见表2。

2.3影响膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表达的多因素回归分析将单因素分析有意义的临床分级、分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期作为自变量，将miR-29a、miR-29b、miR-29c表达情况作为因变量进行回归分析，结果分化程度和临床分级进入回归方程，说明以上项目是膀胱癌患者miR-29表达的影响因素。见表3～表5。

3讨论

膀胱癌的病情进展相对较为隐匿，虽然早期可表现为血尿等临床症状，但疾病的总体早期诊断水平较低。同时膀胱癌的手術治疗或者放化疗后，患者的病死率或者生存时间等指标均无明显改善[7～8]。一项包含了334例样本量的多中心膀胱癌临床诊疗分析研究显示，膀胱癌的早期诊断率不足55%，治疗后的病情缓解率不足40%，无瘤生存时间不足48个月[9]。本次研究通过对相关分子生物学水平的研究，不仅能够为揭示膀胱癌的发病机制提供参考，同时可以为疾病的早期诊断提供潜在的临床观察指标。

微小RNA的表达在恶性肿瘤的发生过程中发挥了重要的作用，其能够参与到肿瘤细胞的代谢、细胞周期调控及细胞凋亡等过程中。miR-29水平的改变对于肿瘤信号通路的激活，能够交错式激活患者体内的癌细胞转录调控因子，提高癌细胞DNA的扩增速度[10～11]。miR-29能够促进癌细胞膜表面糖蛋白配体的激活，促进癌细胞的细胞周期调控依赖性蛋白激活的转录及翻译，增加G1/S期比例，降低G0期细胞的总数。近年来相关基础研究显示，miR-29表达浓度的改变能够通过促进癌细胞内的转录基因的结合，提高癌细胞的增殖活性[12～13]。部分研究者报道了miR-29在乳腺癌中的表达情况，认为miR-29的表达浓度的上升与乳腺癌患者的生存预后的恶化密切相关，同时认为miR-29的表达能够提高肿瘤细胞的增殖风险，导致肿瘤复发风险的上升[5]，但在膀胱癌中的表达分析研究不足。

本次研究对于miR-29的表达浓度的分析可见，在膀胱癌患者血清中，miR-29的表达浓度明显上升，且高于对照组，同时在Ⅲ级膀胱癌患者中，miR-29的表达浓度可进一步上升，提示了miR-29的表达与膀胱癌的病情密切相关。通过荟萃国内外相关文献，笔者认为miR-29的表达浓度的改变与膀胱癌的病情关系可能与下列几个机制有关[14]：（1）miR-29的表达上升能够诱导癌细胞的浸润能力的增强，使膀胱上皮移行细胞的浸润风险增加；（2）miR-29的高表达能够导致膀胱上皮移行细胞的转录活性的增强，导致癌细胞的扩增速度明显加快。张永海等[15]研究者也认为，在膀胱癌患者中，miR-29等微小RNA的表达浓度可平均上升55%以上，同时在合并有远处转移或者淋巴结转移的患者中，miR-29的表达浓度可进一步上升。在探讨miR-29的表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系过程中，可以发现在发生了淋巴结转移、癌细胞浸润程度较高、临床分期较晚的人群中，miR-29的表达浓度可显著上升，提示了miR-29与膀胱癌的临床病理特征密切相关，这主要是由于miR-29的表达能够提高癌细胞对于淋巴结的黏附能力，导致癌细胞的分化诱导成熟障碍，并提高了膀胱移行上皮细胞对于邻近正常组织的浸润程度。但部分研究者并不认为miR-29的表达与膀胱癌患者的淋巴结转移有关，存在不同的结论可能与不同研究的样本量差别较大或者miR-29的检测敏感性不同等因素有关。最后回归分析也可见，癌细胞的分化程度和临床分级水平是影响miR-29表达的重要因素，进一步提示了miR-29与膀胱癌的病情关系，miR-29对于癌细胞的异型性的影响，能够显著影响膀胱癌患者的临床分级。

本次研究的创新性在于探讨了miR-29的表达与膀胱癌患者的临床病理特征的关系。综上所述，miR-29在膀胱癌患者中呈现出明显的高表达趋势，miR-29的表达与膀胱癌的临床病理特征密切相关。

参考文献

[1]Lucca I，de Martino M，Klatte T，et al.Novel Biomarkers to Predict Response and Prognosis in Localized Bladder Cancer[J].Urologic Clinics of North America，2015，42（2）：225-233.

[2]Symanowski JT，Kim ES.Gene expression and prognosis in bladder cancer-real progress？ Editorial on ‘S100A9 and EGFR gene signatures predict disease progression in muscle invasive bladder cancer patients after chemotherapy[J].Annals of Oncology，2014，25（5）：919-920.

[3]任雪维，张吉才.miR-29在肿瘤中的研究进展[J].中国肿瘤临床，2016，43（17）：775-779.

[4]郑立敏，龚雪巍，盛德乔.微小RNA-29与恶性肿瘤[J].生命科学，2017，29（6）：600-605.

[5]李志华，熊建萍.miR-29家族调控乳腺癌形成、发展和转移分子机制的研究进展[J].肿瘤研究与临床，2016，26（7）：490-493.

[6]陈栋，赵萍，陆连芳，等.抑制miR-29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移的影响[J].中华胰腺病杂志，2017，17（6）：386-392.

[7]Masson-Lecomte A，Rava M，Real FX，et al.Inflammatory Biomarkers and Bladder Cancer Prognosis：A Systematic Review[J].European Urology，2014，66（6）：1078-1091.

[8]Kwon T，Jeong IG，You D，et al.Obesity and prognosis in muscle-invasive bladder cancer： The continuing controversy[J].International Journal of Urology，2014，21（11）：1106-1112.

[9]Yun SJ，Kim W.Role of the Epithelial-Mesenchymal Transition in Bladder Cancer： From Prognosis to Therapeutic Target[J].Korean Journal of Urology，2013，54（10）：645-646.

[10]謝益敏，刘海涛，顾杰，等.长链非编码RNA在膀胱癌中的研究进展[J].中华腔镜泌尿外科杂志（电子版），2018，28（1）：63-66.

[11]舒静，黄梦鸽，田强，等.膀胱癌相关lncRNA及其共表达mRNA的初步筛选与功能预测[J].山东医药，2017，57（20）：5-8.

[12]阎家骏，孙泽宇，邱庆崇，等.膀胱癌尿液中微小RNA类肿瘤标志物的研究进展[J].中华实验外科杂志，2014，31（6）：1374-1376.

[13]林健海，鄢阳，郑军华.长链非编码RNA在膀胱癌中的研究进展[J].国际泌尿系统杂志，2016，36（1）：119-121.

[14]孙明，潘春雨，刘学锋，等.长链非编码RNA在泌尿系统恶性肿瘤中的研究进展[J].现代肿瘤医学，2016，24（7）：1165-1168.

[15]张永海，陈凌武，徐庆春，等.膀胱癌组织及血浆中微小RNA的差异表达情况分析[J].中华泌尿外科杂志，2014，24（3）：222-225.

（收稿日期：2018-06-19修回日期：2018-08-21）

（编辑：潘明志）