外周血检测MRP与基质金属酶-9对肺癌患者化疗疗效的评估价值

段梅梅 付佳佳

肺癌属于常见的恶性肿瘤，目前在全球范围内患者死亡率占所有癌症首位，在我国男性群体中，肺癌比较高发，且近年来始终呈现出逐年升高的发病趋势，加之该病发病初期具有一定的隐匿性，因此大部分患者确诊时已经丧失了最佳手术根治时机[1]。而对于晚期肺癌主要的治疗手段包括放疗以及化疗[2-4]。癌细胞成功逃避由化疗药物导致的细胞凋亡通常是化疗过程中抗药性形成的一个决定性的因素，虽然化疗药物理论上可诱导癌细胞的自发性凋亡，但若在机体中存在凋亡抑制基因的过表达，亦或是促凋亡基因被抑制后，癌细胞往往不会凋亡，进而逃避了化疗药物所诱导的凋亡过程而表现出耐药性，因此，及时监测肺癌患者的肿瘤标记物显得十分必要。但由于晚期肺癌患者经常无法获取其肿瘤标本，从而增加了对其耐药性以及化疗疗效的评估难度[5-6]。本文研究外周血检测多药耐药相关蛋白(MRP)与基质金属酶-9(martix metalloprpteinase-9，MMP-9)对肺癌患者化疗疗效的评估价值，旨在为患者化疗后疗效及预后评估提供数据参考，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 临床资料

选取2015年6月—2017年6月我院收治的肺癌患者60例为观察对象。其中男36例，女24例，年龄45～77岁，平均61.2±5.3岁；所有入选对象均经病理检查确诊为非小细胞肺癌(NSCLC)患者,其中有吸烟史19例，无吸烟史41例。入选标准:①所有患者均为初次化疗；②未发现肿瘤转移；③所有患者均签署知情同意书。排除以下：发生肿瘤转移的患者，预估生存期低于半年的患者。

1.2 研究方法

患者化疗方案选用培美曲塞+顺铂方案，培美曲塞500 mg/m2，在第一天静滴给药，顺铂剂量60～80 mg/m2，d1-5静滴； 28 d为1个疗程，治疗2个疗程。所有患者均在治疗前1周以及化疗两周期后采集清晨空腹外周静脉血，并在2 h内转速3 000 r/min离心处理，持续25 min后取上层血清，置于-80℃冰箱中冷冻保存，于检测前30 min取出血清标本自然化冻，采用酶联免疫法(ELISA)进行测定MMP-9，具体操作按照说明书进行。

采用免疫组化Envision法检测所有患者外周血中MRP蛋白的表达，具体操作严格按照说明书。

1.3 观察指标

对比化疗前后MMP-9水平、MRP阳性率、化疗后小细胞肺癌与非小细胞肺癌患者MRP阳性率。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 化疗前后MMP-9水平对比

化疗前患者MMP-9水平为(317.35±32.47)pg/ml，显著高于化疗后的(287.32±28.32)pg/ml(P<0.05)。见表1。

表1 化疗前后MMP-9水平对比 (pg/ml，±s)

注：与化疗前相比，1)P<0.05

2.2 化疗前后患者MRP阳性率对比

患者化疗前MRP阳性率为36.67%(22/60)，显著低于化疗后的68.33%(41/60)(P<0.05)。见表2。

注：与化疗前相比，1)P<0.05

3 讨论

在人类机体中，MMP-9主要来自于人体多种细胞分泌产生[7]，包括中性粒细胞、巨噬细胞、恶性肿瘤细胞以及毛细血管内皮细胞等，主要作用是降解破坏细胞外基质(ECM)中最主要的组成成分Ⅳ型以及Ⅴ型胶原与明胶[8]。通过患者肿瘤组织直接检测多药耐药基因的表达水平是最直接有效反映肿瘤耐药情况的手段，但由于该检测手段只能检测一次，而临床上部分诊治较晚的晚期肺癌患者失去了最佳的手术治疗时间，因此无法通过上述方法准确了解患者肺癌组织耐药基因的表达[9]。随着医疗水平的不断提高，通过患者外周血对耐药基因进行检测应用于临床，在一定程度上可以代替组织检查，具有一定的可靠性[10-11]。

本文化疗前患者MMP-9水平显著高于化疗后的MMP-9水平，提示了MMP-9水平确实与化疗疗效密切相关。其中MMP-9基因在正常表达情况下具有调节及维持正常组织功能的作用[12]，但在恶性组织中这一作用完全消失。MMP-9是基质金属蛋白酶(MMPs)家族的主要成员之一[13],在肿瘤的侵袭过程中，ECM表面受体会与肿瘤细胞结合，从而直接分泌MMPs或直接诱导宿主细胞分泌MMPs，进一步促使ECM出现局部降解，而缺失的ECM对肿瘤细胞浸润周围组织起到了推波助澜的作用，促进了肿瘤细胞的侵袭扩散，最终影响患者预后。与此同时，化疗前患者MRP阳性率显著低于化疗后，表明MRP阳性率与化疗疗效也存在一定相关性[14]。其中MRP是ATP结合的盒式膜转运蛋白家族成员之一[15]，与P-gp介导的耐药机制类似，它具有识别以及转运与谷胱甘肽形成复合物的依赖ATP的GS-X泵的作用，从而能将GS-X复合物转运至细胞外，进一步促使了细胞内的药物浓度下降，同时减少了细胞内转运，还可以通过细胞内药物的再分布减少靶点部位的药物浓度[16]。另有报道，MRP在临床多种类型肿瘤疾病中均有不同程度的表达，且肿瘤的耐药性与其高表达存在密切相关，随着患者化疗疗程的逐渐增加，MRP表达率也有升高的趋势[17-18]。肿瘤细胞可能会因为化疗诱导或其他因素影响而出现耐药现象，相应地使得MRP阳性率增加[19]。需要指出的是，本文也存在着一定程度的局限性及不足之处。例如本文的样本量相对较少，且缺乏了对患者进行的长期随访，并且还缺少与同级或者上级医疗机构共同开展的协同性研究，这些情况均可能会对此次研究的结果数据及结论产生一定的影响。为了更好地规避上述影响因素，今后可考虑进一步地扩大研究的样本量，同时对患者实施至少1年的随访，并邀请其他同行共同对结果数据进行分析，争取获得更具科学性的数据结果，从而更好地服务于临床诊治过程。

综上所述，MM-9水平越高，患者预后越差，MRP表达能间接反映癌组织对化疗药物的耐受性，临床上可通过对肺癌患者的外周血检测MM-9水平以及MRP的表达，从而有利于对化疗疗效及预后情况进行评估。