肝细胞癌中磷脂酶CE1和血管内皮生长因子的表达

于 敏 林哲洙 张 红 (锦州医科大学附属第三医院普外三科，辽宁 锦州 121001)

肝细胞癌是起源于肝细胞的恶性上皮性肿瘤，病变形成过程中细胞可发生一系列异型增生的特征〔1〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是PLC基因编码的蛋白，也是磷脂酰肌醇信号通路中有明显作用的关键酶〔2〕。近年研究显示PLCE1能被各种G蛋白水解，使细胞内储存的钙离子释放，并对一些基因的表达有一定影响，并协同调节肿瘤细胞的生长和迁移的进程〔3〕。血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤中表达升高，其具有癌基因的作用，同时对肿瘤间质的血管生成有一定的促进作用〔4〕。本文关注肝细胞癌中PLCE1和VEGF表达，分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2015年1月至2016年12月锦州医科大学附属第三医院确诊并行手术治疗的肝细胞癌患者59例为观察组，均经病理学确诊，并符合WHO中的诊断标准及分型。其中男31例，女28例，年龄46～79岁，平均(61.9±9.9)岁。患者术前均未行放、化疗。选取距肿瘤边缘＞3 cm的正常肝组织27例为对照组，其中男14例，女13例，年龄47～76岁，平均(60.4±8.6)岁。两组在性别、年龄等常规因素的比较中无明显差异，具有可比性。

1.2 免疫组化检测PLCE1和VEGF的表达 两组术后标本均应用中性甲醛溶液固定、脱水、石蜡包埋。PLCE1和VEGF两种试剂均为浓缩液，按不同配比浓度进行稀释，选择最理想的浓度进行实验。切取4 μm切片后应用免疫组化SP法检测PLCE1和VEGF的表达、二氨基联苯胺(DAB)染色，按实验说明书进行操作，做好质控工作。

1.3 PLCE1和VEGF判读 PLCE1和VEGF均定位于细胞质中，以细胞质中有不同程度的棕黄和棕褐色为阳性表达。结果以阳性着色强度和阳性细胞百分比评分之和来评定。着色强度评分:无着色为0分;弱着色为1分，中等程度着色为2分，强着色为3分。选择5个高倍视野进行阳性细胞计数，取其平均值;阳性细胞百分比，以＜5%为0分，以5%～10%为1分，以11%～25%为2分，以26%～50%为3分，以＞50%为4分。两项之和为最终评定结果。取两项评分之和的值作为最终评分结果。≤3分为阴性，以＞3分为阳性。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结果

2.1 两组中PLCE1和VEGF蛋白的表达 两组中PLCE1和VEGF表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

2.2 PLCE1和VEGF在观察组不同临床特征中表达阳性率的比较 观察组中PLCE1和VEGF的表达与肿瘤最大径、增殖指数密切相关，PLCE1的表达与肿瘤的分化程度相关。二者均与神经侵犯无明显相关性。见表2。

2.3 观察组中PLCE1和VEGF表达的相关性PLCE1和VEGF的表达无明显相关性(P=0.143 2)。

表1 两组PLCE1和VEGF蛋白的阳性表达〔n(%)〕

表2 PLCE1和VEGF在观察组不同临床特征中表达阳性率的比较〔n(%)〕

3 讨论

肝细胞癌最常见的病因包括病毒因素、饮食因素及酗酒等。乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的慢性感染是病变的最主要的病因。在上述因素的持续作用下，肝细胞发生异型增生，癌变，进而形成肝细胞癌。病变可以形成大小不等的结节，内有汇管区和输出静脉，结节被宽而不规则的结缔组织和瘢痕所分隔〔5〕。这些结节均由类似肝细胞的肿瘤细胞组成，间质由衬覆单层内皮细胞的血窦样腔隙所组成，形成“毛细血管化”的特征。因此间质的血管内皮生成对肿瘤的形成和进展有明显的促进作用〔6〕。PLCE1能通过催化多磷酸肌醇如磷脂酰肌醇4，5-二磷酸盐水解，产生第二信使三磷酰肌醇和二酯酰甘油，促进钙离子的释放，引发蛋白激酶(PK)C过表达，并结合更多的PKC同工酶的目标蛋白〔7，8〕，参与细胞信号的传导，调控基因表达，进而调节细胞的生长、分化、细胞凋亡及血管新生〔9，10〕。VEGF是血管生成的促进因子，可以促进内皮细胞的繁殖和生长，同时对枝芽状血管管腔形成有一定的促进作用〔11，12〕。VEGF是癌基因的一种，肿瘤细胞可以高度分泌，其表达上调后引发肿瘤间质的血管生成，在作用过程中通过其受体VEGF受体2发挥作用，并能有效促进CD31、CD34等阳性血管内皮生成〔13，14〕。

本研究结果提示PLCE1和VEGF二者高表达对肝细胞癌的发生有重要作用，PLCE1和VEGF在病变过程中可能具有促进上皮细胞异型增生和恶性转化的作用。PLCE1和VEGF二者高表达可以促进肿瘤的生长及Ki67阳性的细胞增生，使细胞数量明显增加，失控性增生明显，细胞体积增大，肿瘤的侵袭能力升高，恶性潜能增加。Cheng等〔15〕在膀胱肿瘤中发现敲除细胞的PLCE1基因可以抑制肿瘤的增殖能力，降低增殖细胞核心抗原的表达水平和CylclinD1表达，并通过抑制PLCE/PKC通路来减少癌基因C-jun的表达，进而抑制细胞的增生和繁殖。本文结果提示PLCE1升高时可以调节细胞的分化进程。分化是细胞在发育过程中的一系列表现，也是细胞生长过程中不同时期细胞形态的反映，PLCE1表达升高可以使细胞停滞于幼稚阶段，肿瘤细胞趋于原始，肿瘤细胞异型性明显，核的染色深。本文结果提示PLCE1和VEGF不是促进肿瘤嗜神经生长的因子。PLCE1和VEGF均有促进血管生成的作用，但是二者调节血管生成的机制可能完全不同，也不在同一通路上。PLCE1对血管的调控可能是间接的，与机体中其他蛋白协同作用后，进而促进内皮细胞增殖。而VEGF对肿瘤血管生成的调节是直接的，通过分泌作用，直接促进内皮细胞生长〔16，17〕。