超声检测乳腺癌PSV和RI值与术后组织中ephA7和AEG-1表达关系

马进辉 马淑梅 马 琴 (青海大学附属医院超声科，青海 西宁 8000)

乳腺癌主要见于中老年妇女〔1〕，术前常应用彩色多普勒超声检测收缩期峰值血流速度(PSV)和阻力指数(RI)，对判断病变性质及病变程度有一定价值〔2，3〕。乳腺癌生长具有浸润性特征，肿瘤生长时是富于血管的，可以为肿瘤生长提供氧和营养。星形胶质细胞上调基因(AEG)-1是近年发现的新的癌基因，可表达于肿瘤组织中，对促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有重要意义〔4〕。近年研究认为酪氨酸蛋白激酶受体(eph)A7通过与Eph配体结合后激活细胞质内的酪氨酸激酶将信号逐级传递，影响内皮细胞的迁移、芽生和血管的形成，从而共同影响细胞的生长和分化，促进肿瘤细胞的形成和转移〔5〕。本文观察乳腺癌患者术前血流参数PSV和RI值与术后组织中ephA7和AEG-1的关系，分析其在不同临床病理特征中的差异。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2015年1月至2016年12月青海大学附属医院确诊为乳腺癌的82例女性患者为观察组，年龄52～85岁，平均57.9岁。纳入患者均行手术治疗，并经病理确诊且均为浸润性癌。排除标准:①乳腺手术史;②术前行放化疗。同期确诊为乳腺腺病的21例女性患者为对照组，年龄48～67岁，平均50.2岁，对照组经术后病理确诊。两组均留取超声资料，一般资料比较无明显差异。

1.2 PSV和RI的检测方法 采用彩色多普勒超声诊断仪的高频探头，检查时患者取仰卧位，上肢肘关节呈90°放在头的两侧，将高频探头放置于乳腺的皮肤上，以乳头为中心由内向外进行放射状探测，对异常肿物进行仔细观察，并应用多普勒血流显像(CDFI)观察肿块内有无血流，并按Adler等〔6〕半定量法进行血流信号的分级(0～Ⅲ级)，并用脉冲多普勒检测血流频谱，测量PSV和RI值。

1.3 免疫组化方法检测ephA7和AEG-1的表达 ephA7和AEG-1的检测均基于术后石蜡包埋的组织，ephA7和AEG-1均为浓缩液，先行预实验，以显色最佳的浓度(ephA7 为 1∶200，AEG-1 为 1∶300)用于正式实验。ephA7和AEG-1正式实验应用免疫组化SP法，二氨基联苯胺(DAB)显色。做好质控工作。

1.4 免疫组化结果的判断 ephA7的阳性部位为细胞质，AEG-1的阳性部位是细胞核和(或)细胞质，先在100倍镜下选择上皮细胞染色较为集中的热点区，然后在400倍视野下观察。评分按染色强度和阳性染色比例进行评定。强度评分:无显色为0分，弱显色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。阳性染色比例:阳性细胞数＜10%为0分，10%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。以两项相加为最后得分，以＜3分为阴性，以≥3分为阳性。计算阳性率。

1.5 统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行χ2、t检验、方差分析和线性相关分析。

2 结果

2.1 两组PSV和RI值比较 观察组PSV和RI值明显高于对照组(P＜0.05)。见表1。

2.2 两组中ephA7和AEG-1阳性率的比较 两组中ephA7和AEG-1阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

2.3 观察组中PSV和RI值在不同临床病理特征中的比较 观察组中PSV和RI值与肿瘤的最大径和细胞增殖指数密切相关，RI值与肿瘤的组织学分级密切相关(P＜0.05)。见表3。

表1 两组PSV和RI值的比较()

表1 两组PSV和RI值的比较()

组别 n PSV(m/s) RI观察组 82 0.25±0.09 0.79±0.15对照组 21 0.17±0.06 0.44±0.09 t/P值 4.53/0.028 6.67/0.011

表2 两组中ephA7和AEG-1阳性率的比较〔n(%)〕

表3 观察组中PSV、RI值和ephA7、AEG-1阳性率在不同临床病理特征中的比较()

表3 观察组中PSV、RI值和ephA7、AEG-1阳性率在不同临床病理特征中的比较()

临床病理特征 n PSV(m/s) RI值 ephA7〔n(%)〕 AEG-1〔n(%)〕肿瘤最大径 ＜3 cm 32 0.17±0.04 0.69±0.11 7(21.9) 10(31.3)≥3 cm 50 0.30±0.07 0.85±0.12 38(76.0) 30(60.0)t/P值 4.12/0.028 3.53/0.042 23.084/0.000 6.455/0.011细胞增殖指数 ＜50% 39 0.20±0.05 0.70±0.16 13(33.3) 11(28.2)≥50% 43 0.29±0.06 0.86±0.12 32(74.4) 29(67.4)t/P值 3.64/0.042 3.95/0.039 13.941/0.000 12.602/0.000组织学分级 Ⅰ级 10 0.23±0.08 0.70±0.12 3(30.0) 3(30.0)Ⅱ级 58 0.24±0.07 0.79±0.09 30(51.7) 27(46.6)Ⅲ级 14 0.27±0.08 0.87±0.11 12(85.7) 10(71.4)F/P值 1.01/0.217 4.35/0.027 7.726/0.005 7.215/0.009

2.4 观察组中ephA7和AEG-1阳性率在不同临床病理特征中的比较 观察组中ephA7和AEG-1的阳性率与肿瘤的最大径、细胞增殖指数和组织学分级密切相关(P＜0.05)，见表 3。2.5 观察组中PSV、RI值与ephA7、AEG-1表达的相关性 RI值与 ephA7的阳性率(r=0.52，P=0.024 1)、RI值与 AEG-1 的阳性率(r=0.49，P=0.047 2)呈正相关。PSV值与ephA7、AEG-1阳性率均无明显相关性(P＞0.05)。

3 讨论

临床上对乳腺癌的治疗取决于乳腺肿块的性状。术前应用超声检查对判断其性质有重要价值。而乳腺癌的早期诊断是患者生存质量和生存率的关键〔7〕。乳腺癌患者的多普勒超声图像显示肿瘤边缘无明显的包膜，且不平整，呈“蟹足状”或“毛刺状”，肿瘤的局部可见不均质和实性低回声，部分区有簇状、散状、沙粒样钙化点，中心区可见到液化性坏死(无回声区)〔8〕。良性(乳腺腺病)病变的血供较少，主要与其缺少血供有关，针对不典型的肿块必须应用血管血流频谱进行观察。乳腺癌病变形成中可以表现出明显的异型性，肿瘤间质的血管形成明显增加，研究显示这种血管不仅缺乏完整的基底膜，而且数量明显增多，且分支紊乱，血管之间的吻合也丰富，CDFI/能量多普勒显像(PDI)可以显示直径超过0.2 mm的血管，也能显示血管的分级方式〔9，10〕。PSV和 RI是观察血管及血流情况最理想的指标〔11，12〕。刘艳萍等〔13〕认为大部分恶性肿瘤内可探及血流信号，并在其观察的患者中发现RI值大于0.70的肿瘤患者占91.61%，即高速高阻型频谱的特征，且随着肿瘤的增大，血流信号检出率有增高趋势〔14〕。在肿瘤形成及进展时，肿瘤细胞中相关蛋白会出现明显变化。Eph激酶是机体中受体酪氨酸蛋白激酶家族的成员，其分为两种:EphA和EphB，其中E-phA7 是家族中的重要成员〔15，16〕。EphA7 能控制细胞间的相互作用。EphA7可以和相应的配体整合，使蛋白出现结构的改变，对活化细胞质中的酪氨酸激酶有明显的促进作用〔17〕。研究认为其还能使自身出现磷酸化，同时有效地活化底物，调节细胞信号的传导〔18〕。AEG-1的编码基因由11个内含子和12个外显子组成，其cDNA全长为3 611 bp，编码由582个氨基酸组成的蛋白质，分子量是64 kD，富含赖氨酸和丝氨酸残基，可以作为转录后修饰的靶点超作用，是转录后修饰的作用靶点〔19〕。研究认为其C端可能具有与ATP/GTP结合的作用，蛋白激酶(PK)A和PKC信号通路激酶能使AEG-1基因保守序列中存在大量的潜在磷酸化修饰位点磷酸化，这对其行使功能起重要的作用〔20〕。

本研究结果提示术前超声检测PSV和RI值在术前诊断中有重要价值，尤其是对乳腺疾病良恶性的判断有更重要的价值。RI值可能对进行肿瘤分级有一定的帮助。本文结果提示ephA7和AEG-1二者高表达可以促进肿瘤的生长及Ki67阳性的细胞增生，使细胞数量明显增加，失控性增生明显，细胞体积增大，肿瘤的侵袭能力升高，恶性潜能增加。二者参与肿瘤的进展，二者对肿瘤分级与预后的判断有一定价值。分级高的肿瘤细胞异型性明显，细胞核的核分裂多，细胞异质性强，此时细胞停滞于幼稚阶段，肿瘤细胞趋于原始，核的染色深。本研究也间接提示ephA7和AEG-1参与肿瘤的进展过程。ephA7和AEG-1均为血管生成的促进因子，能促进内皮细胞的增生，形成芽状的血管内皮细胞，在血液的冲击作用下形成新生血管，具有供应血液的功能〔21〕。但是二者调节血管生成的机制可能不完全一致，也不一定在同一通路上。ephA7对血管的调控可能是间接的，与机体中其他蛋白协同作用后，进而促进内皮细胞增殖〔22，23〕。而 AEG-1对肿瘤血管生成的调节是直接的，通过分泌作用，直接促进内皮细胞的生长。本文提示RI值是直接与术后ephA7和AEG-1表达相关联的指标。由于ephA7和AEG-1可以在一定程度上反映肿瘤的生物学行为〔24，25〕。

综上，彩色多普勒血流参数PSV和RI值对乳腺癌的诊断有一定作用，ephA7和AEG-1在乳腺癌中表达升高对病变的形成有促进作用。