STAT3、p-STAT3和E-cadherin在鼻咽癌中的表达及临床意义

王海茹 谭湘敏 郝 玲 王海涛 (海口市人民医院耳鼻喉科，海南 海口 57008)

鼻咽癌(NPC)是我国华南地区高发恶性肿瘤之一，由北向南发病率逐渐增高(1.9/10万)，我国发病率明显高于世界平均水平(1.2/10万)，位居全球鼻咽癌发病的第 18位〔1〕。发病年龄在45～60岁达到高峰〔2〕，严重威胁着人类的健康。鼻咽癌死亡的主要原因是复发和转移，尤其是转移和侵袭机制一直是研究的热点，研究发现信号转导与转录激活因子(STAT)3在多种恶性肿瘤中高表达，而E-cadherin表达降低与肿瘤的分化、侵袭转移和复发相关。本研究检测鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎组织中STAT3及其活化形式p-STAT3和E-cadherin的表达情况，探讨其与鼻咽癌临床特征之间的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月至2016年12月在海口市人民医院治疗的鼻咽癌初治病例40例。治疗前均通过鼻咽组织活检病理证实为鼻咽癌。其中男31例，女9例，年龄31～71(中位50)岁。所有患者根据第7版美国癌症联合委员会/国际抗癌联盟(AJCC/UICC)的鼻咽癌TNM分期标准评定临床分期。另取20例慢性鼻咽炎病例作为病理对照。

1.2 试剂和方法 STAT3鼠抗人单克隆抗体、p-STAT3(Tyr705)鼠抗人单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，鼠抗人上皮性钙黏蛋白单克隆抗体、免疫组织化学试剂及二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学染色采取增强聚合物法。用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 染色结果判定参照Mattern方法进行判定。染色强度以细胞呈特异性染色计分，另以阳性细胞占比计分，随机观察5个高倍镜视野，每个视野均进行染色强度评分和阳性细胞占比分析，取其平均值。综合染色强度和阳性细胞占比，若两者乘积0，则为阴性，计为(－);若两者乘积为1～4分，则为弱阳性，计为(+);若两者乘积为5～8分，则为中度阳性，计为(-);若两则乘积为9～12分，则为强阳性，计为(+)。病理结果的判定由两位高年资病理科医师双盲判定，若两人意见不同则经讨论后决定。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件进行χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 STAT3、p-STAT3、E-cadherin在鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中的表达 STAT3染色主要为胞质和细胞核，p-STAT3染色主要为胞质，E-cadherin染色位于胞膜。40例鼻咽癌患者组织中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin阳性表达率分别为80%(32/40)，65%(26/40)和 12.5%(5/40);20例慢性鼻咽炎组织中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin阳性表达率分别为25%(5/20)，0%(0/20)和100%(20/20)。鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中，STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白表达均有差异(χ2=17.062，P=0.000;χ2=7.279，P=0.007;χ2=42.000，P=0.000，均 P＜0.05)，见图 1。

图1 鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中STAT3、p-STAT3、E-cadherin 的表达(DAB，×200)

2.2 STAT3与p-STAT3阳性表达与鼻咽癌临床特征的关系 STAT3阳性表达与年龄、性别、T分期、N分期、临床分期、病理类型无明显相关(均P＞0.05);p-STAT3表达与患者年龄、N分期和临床分期有关，在高龄、N分期和临床分期较晚的病例中，p-STAT3表达较高(均P＜0.05)，与性别、T分期无明显相关(均P＞0.05)，见表 1。

2.3 各抗体在鼻咽癌组织中表达的相关性 STAT3的阳性表达与E-cadherin的阳性表达呈明显负相关(r=－0.378，P=0.016)，而 p-STAT3阳性表达与 E-cadherin阳性表达无明显相关(r=－0.040，P=0.808)。

表1 STAT3、p-STAT3阳性表达与鼻咽癌临床特征的关系〔n(%)，n=40〕

3 讨论

STAT3是STATs的重要成员之一，与细胞的异常增殖密切有关，并参与恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移〔3〕，其介导的信号传导通路与细胞增殖、分化及凋亡密切相关，该通路持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化〔4〕。有研究证实STAT3在鼻咽癌中高表达〔5～7〕，p-STAT3 是 STAT3 的磷酸化，是信号传导通路持续激活的形式，主要参与细胞增殖、肿瘤发生、发展的调控〔8〕。而STAT3酪氨酸705位点的磷酸化(p-STAT3)是STAT3磷酸化的主要形式。

E-cadherin普遍存在于各类上皮细胞，主要介导同种细胞间的黏附反应，并起到细胞骨架的作用，是维护细胞形态和结构完整性的重要分子。E-cadherin表达的下降或丧失与肿瘤低分化、高侵袭、高转移和肿瘤复发呈正相关，是预示肿瘤进展及预后的重要指标之一，是肿瘤侵袭转移的抑制因子〔9〕。现有研究表明鼻咽癌的转移与上皮-间质转化(EMT)存在密切关系〔10〕。本研究提示STAT3、p-STAT3激活与鼻咽癌的发生发展有密切关系。对鼻咽癌的临床特征研究表明，p-STAT3的阳性表达与鼻咽癌的年龄、N分期和临床分期有关。高龄、N分期和临床分期较晚的NPC患者中p-STAT3表达增高。因为p-STAT3是STAT3的激活形式，p-STAT3蛋白的异常表达，可影响下游基因转录，从而影响细胞增殖侵袭，进而表现为p-STAT3表达同患者临床病理特征相关。提示p-STAT3有可能成为鼻咽癌预后的指标之一，这有待于扩大样本量进一步研究。文献〔11〕报道E-cadherin在鼻咽癌组织中低表达，本研究结果亦显示，E-cadherin在鼻咽癌中的表达较慢性鼻咽炎组低，STAT3的表达与E-cadherin的表达呈明显负相关，而p-STAT3与E-cadherin无明显相关性。由于STAT3许多位点存在磷酸化(Tyr-705，Ser-727)〔12〕。不排除STAT3 与 E-cadherin 在鼻咽癌的发生发展中或许存在其他信号传导通路。