双唑草酮原药高效液相色谱分析方法研究

傅 黎，黄 伟，姜宜飞*

(1.湖南加法检测有限公司，湖南 长沙 410014；2.农业部农药检定所，北京 100125)

1 前言

双唑草酮，CAS号1622908-18-2，分子式C20H19F3N4O5S。双唑草酮是一种新型HPPD类除草剂，与当前麦田常用的双氟磺草胺、苯磺隆、苄嘧磺隆、噻吩磺隆等ALS抑制剂类除草剂，唑草酮、乙羧氟草醚等PPO抑制剂类除草剂以及2甲4氯钠、2,4-D等激素类除草剂不存在交互抗性，可以有效解决抗性以及多抗性的播娘蒿、荠菜、野油菜、繁缕、牛繁缕、麦家公等阔叶杂草。

目前国内有关双唑草酮的分析方法尚未见任何公开报道。本文采用高效液相色谱法，对双唑草酮原药进行定量分析，该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液 乙腈(色谱纯)；磷酸(分析纯)；超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；双唑草酮标样，已知质量分数98.2%(由农业部农药检定所提供)；双唑草酮原药(由某公司提供)。

2.2 仪器 高效液相色谱仪：Agilent 1100，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；Millipore超纯水制备系统；色谱柱：250mm×4.6mm(id)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C185.0μm填充物。

2.3 液相色谱操作条件 流动相：ψ(乙腈∶0.1%磷酸水)=60∶40；流量∶1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：254nm；进样体积：5μL；保留时间：双唑草酮约4.0min。

双唑草酮原药的高效液相色谱图(图1)。

图1 双唑草酮原药高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制 称取双唑草酮标样0.02g(精确至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制 称取含双唑草酮0.02g的试样(精确至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.4.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中双唑草酮峰面积分别进行平均。试样中双唑草酮的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1──标样溶液中双唑草酮峰面积的平均值；

A2──试样溶液中双唑草酮峰面积的平均值；

m1──标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P──标样中双唑草酮的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择 通过Agilent 1100高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得双唑草酮的紫外波长扫描图(图2)。从图中可以看到双唑草酮最大吸收波长在210nm处，在254nm处也有较大的吸收，为了尽量减少溶剂的干扰，将检测波长定为254nm。

图2 双唑草酮紫外吸收谱图

色谱柱选择常规的ZORBAX SB-C18反相柱。依据双唑草酮物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和磷酸溶液作为流动相。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，最终确定流动相为ψ(乙腈∶0.1%磷酸水)=60∶40，在流速1.0mL/min时，有效成分与杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，能在短时间能得到满意的分析结果，提高了工作效率。

3.2 分析方法的线性相关性试验 将2.4.1中配制的标样溶液在上述色谱操作条件下进行分析，进样量分别为1、2、5、10、20μL，以双唑草酮的质量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校正曲线。试验测得双唑草酮线性方程为y=20 150.521 2 x+3.526 4，相关系数为1.000 0。结果表明双唑草酮在测试的质量浓度范围内线性关系良好。

3.3 分析方法的精密度试验 从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱操作条件下进行分析，测得双唑草酮的标准偏差为0.16，变异系数为0.17%(表1)。

表1 分析方法的精密度试验结果

3.4 分析方法的准确度试验 从已知质量分数的双唑草酮(96.95%)中称取5个试样，分别加入一定量的双唑草酮标样(98.20%)，在上述色谱操作条件下进行分析，测得双唑草酮的平均回收率为99.75%(表2)。

表2 分析方法的准确度试验结果

4 结论

试验建立了高效液相色谱法检测双唑草酮中有效成分的分析方法。试验结果表明，双唑草酮在测试浓度范围内线性关系良好，方法准确度和精密度较高，具有操作简便、快速的特点，是产品质量控制和应用研究中较为理想的分析方法。