孕晚期子痫前期患者入院时外周血、分娩时脐血及胎盘组织miR-126表达观察

董迪荣，张元珍，邝伊敏，尹秋，龚青，李家福

(1武汉大学中南医院，武汉 430071；2大冶市中医医院)

子痫前期(PE)是孕产妇及围产儿病死率增高的重要原因之一。流行病学显示，PE的发病率为3%～10%[1,2]。血管内皮损伤是妊娠期高血压疾病生理改变的中心环节，PE患者多出现血管内皮功能紊乱，微血管收缩和血管内血栓形成最终导致了胎盘供血不足[3]。微小RNA(miR)是一种非编码短的小RNA，参与发育、分化、凋亡等生理过程[4]。人胎盘中表达有大量的miR，重度PE患者胎盘组织中miR-130、miR-181、miR-222、miR-195、miR-126等表达增加[5]。微小RNA-126(miR-126)是近年发现的一种小分子调节物质，具有调节血管内皮细胞和促进血管生成的功能，在正常组织的血管发生和血管炎症反应等病理过程中发挥重要作用[6]，但miR-126在PE中的研究鲜有报道。本研究观察了PE孕晚期孕妇血清miR-126水平变化，旨在探讨miR-126在PE高危人群筛查中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年3月～2018年4月武汉大学中南医院收治的PE孕晚期孕妇52例(观察组)，诊断参照《妊娠期高血压疾病诊治指南(2015)》[7]，除PE相关母胎并发症外，无其他内外科并发症。早发型(<34周)27例和晚发型(≥34周)25例。另选同期孕晚期正常孕妇68例(对照组)，血压正常，无蛋白尿，分娩健康足月儿(孕周≥37周)，无内外科并发症。两组均排除多胎妊娠、胎膜早破、多囊卵巢综合征和不明阴道流血等患者。本研究已经过我院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 孕妇血清、脐血血清、胎盘组织miR-126检测 ①标本收集：采集所有入选对象晨起空腹肘静脉血5 mL，置于EDTA管中，离心机(2 500 r/min)离心15 min，收集血清，储存于-70 ℃。孕妇分娩后立即收集脐血和胎盘。从脐带植入点旁5 cm处将胎盘分为母体面部份、中间部份、胎儿面部份共3部分，切开时尽量避免胎盘梗死和钙化部份。采集中间部份的绒毛，体积为2 cm×2 cm×2 cm，冰生理盐水中冲洗后储存于-70 ℃[8]。②胎盘组织miR-126检测：碾磨法提取胎盘组织中的RNA，miRNA 3′端加Poly(A)处理、修饰后逆转录，置于-20 ℃下保存，进行实时荧光定量PCR检测。检测时将miR-126 nmol per OD引物稀释为100 μmol，将2倍miRNA premix混合后离心，0 ℃下反应，反应体系包括miRNA premix 10 μL、miR-126 2 nmols per OD 0.4 μL、reverse primer 0.4 μL、miRNA第一链cDNA 2 μL、去离子水7.2 μL。反应过程为起始模板变性、PCR循环中模板变性、退火和延伸。③血清miR-126检测：采用离心柱型分离试剂盒分离血清中miRNA，200 μL血清中加入200 μL裂解液，离心后进行RNA的提取，检测步骤同“②”。本研究所选的内参基因为U6，miRNA相对量的计算采用 CT法。miR-126的相对表达量为2-ΔΔCt， CT(阈值循环数)=待测样本基因Ct均值-待测样本内参Ct均值[9]。

1.3 一般资料收集及血生化指标检测 入院时，收集患者年龄、孕次、产次、孕前身体质量指数(BMI)、孕周、定期检查例数、最高收缩压、最高舒张压、新生儿质量等一般资料，患者的最高收缩压和舒张压为入院后未服用降压药前所测的最高值；检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度胆固醇(LDL-c)、血肌酐、尿酸和白蛋白等生化指标，血生化指标动态复查，以全部测得值的中位数作为最终数据。

2 结果

2.1 两组孕妇血清、脐血血清miR-126水平及胎盘组织miR-126表达比较 结果见表1。

表1 两组孕妇血清、脐血血清miR-126水平及胎盘组织miR-126表达比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 两组年龄、孕次、产次、孕前BMI、妊娠期体质量增加值比较 结果见表2。

表2 两组年龄、孕次、产次、孕前BMI、妊娠期体质量增加值比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.3 两组分娩孕周、定期检查例数、最高收缩压、最高舒张压、新生儿质量比较 观察组及对照组定期检查比率分别为63.46%(33/19)、88.24%(60/8)，两组比较，P<0.05。两组分娩孕周、最高收缩压、最高舒张压、新生儿质量比较见表3。

表3 两组分娩孕周、最高收缩压、最高舒张压、新生儿质量比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.4 两组TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比较 结果见表4。

表4 两组TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.5 观察组孕妇血清miR-126水平与临床指标的相关性 相关性分析显示，观察组孕妇血清miR-126水平与年龄呈负相关(-4.02，P<0.05)，而与分娩孕周、收缩压、舒张压、新生儿体质量、白蛋白、血肌酐、尿酸均无相关性(P均>0.05)。

3 讨论

PE是指妊娠20周后出现新发的高血压，且伴有蛋白尿或其他系统的损害，严重的系统损害使其成为孕妇围产期发病率和病死率升高的主要原因。PE是是孕产妇和围产儿患病率和病死率增高的主要原因之一，尤其对于孕晚期孕妇[3]。既往研究[10]证实，miR表达异常与人类疾病的发生有关。文献[11]报道，PE患者胎盘和外周血中miR的异常表达也会使细胞功能紊乱。Wang等[12]发现，PE患者胎盘中miR-20a的高表达会抑制叉头框蛋白A1，导致滋养层细胞增殖和侵袭能力下降。Muralimanoharan等[13]发现，PE患者胎盘组织中miR-210的表达水平增高会导致线粒体功能紊乱。

miR-126是Deeppak等于2006年发现的一类小分子RNA，与血管生成密切相关[14,15]。miR-126在血管内皮细胞中的含量最为丰富，且具有特异性，其可以调节细胞增殖、迁移和血管生成[16,17]。研究[14]发现，miR-126可以通过调节内皮祖细胞的功能参与胎盘血管的新生。本研究发现，PE患者外周血和胎盘组织中miR-126的表达水平均明显升高，这与Yan等[18]研究一致。本研究发现，观察组孕妇血清miR-126水平和胎盘组织miR-126表达高于对照组，脐血血清miR-126水平无差异，说明miR-126可能与PE的发病有关，孕妇血清异常表达的miR-126可能来源于胎盘。本研究还发现，观察组早发型和晚发型孕妇血清、脐血血清miR-126水平及胎盘组织中miR-126表达均无明显差异，提示miR-126参与这两型的病理机制可能类似，且与发病时间无关。结果提示，孕晚期检测孕妇miR-126的表达水平可能有助于PE高危人群的筛查。

既往有研究[2]发现，PE发病的高危因素有初产妇、孕妇年龄<20岁、分娩时孕周<32周、产前保健<5次等。本研究显示，观察组孕妇血清miR-126水平与年龄呈负相关，说明随着年龄的增长，孕妇外周血清miR-126水平下降。而孕妇血清miR-126水平与分娩孕周、收缩压和舒张压等无关，这可能是因为PE多为胎盘源性，机体全身系统炎症反应过度激活[19]。

总之，孕晚期孕妇血清和胎盘组织中miR-126异常表达，其可能参与了PE的发病，且随着年龄的增长，其在孕妇血清中的水平越低。孕晚期对孕妇血清miR-124的检测有助于PE高危人群的筛查。