细胞因子诱导杀伤细胞治疗对肺癌患者IL—2、IL—6、IL—8、IL—10、TNF—α的影响及研究

师鹏辉

摘要 目的：探讨肺癌CIK治疗后，血浆IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平变化及对Thl/Th2比值的影响。方法：患者CIK治疗前及治疗后1～2 d分别抽取外周血分离出血清，检测IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α.结果：CIK治疗后IL-2、TNF-α数值下降，IL-8升高，Thl/Th2比值失衡纠正，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：化疗期间合理应用CIK治疗有利于改善预后。

关键词 肺癌；Thl/Th2；IL-2；IL-6；11-8；IL-10；TNF-α；CIK

肺癌是世界上公认的癌症相关性死亡的首要原因[1]，晚期肺癌患者失去手术机会，化疗是治疗晚期肺癌的重要手段。现阶段化疗后肿瘤复发率较高。研究表明，肺癌的复发转移与机体的Thl/Th2比值失衡密切相关。本研究探讨肺癌CIK治疗后免疫功能的变化，为临床制定个体化治疗方案提供参考。

资料与方法

2015年6月-2016年5月收治CIK肺癌患者16例，男8例，女8例；年龄45～ 75岁，平均60岁，所发病例均病理证实为肺癌。其中肺鳞癌8例，腺癌8例。符合同际肺癌研究协会（IASLC）2009年第7版分期标准Ⅲ～Ⅳ期。治疗组给予CIK治疗1个疗程，细胞总数1.6×l09/L，对照组化疗后给予观察。

实验试剂：IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α试剂是购白易科拜得公司产品，用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）。

实验过程：患者CIK治疗前及治疗后分别抽取外周血分离出血清，标准品按照说明书稀释5个梯度，各个梯度每孔加样量50μL；分别设空白孔及待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔可先加样品稀释40μL，然后再将样品10μL加于酶标版孔底部，尽量不触及孔壁，可轻轻晃动混匀；用封板膜封板后置37℃温育30 min；将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍（48T的20倍）稀释后备用；然后小心揭掉封板膜，弃去液體，甩干，每孔加满洗涤液，之后静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干；每孔加入酶标试剂50μL，再加入显色剂B 50 μL，之后轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 min；每孔加终止液50μL，以终止反应；以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15min内进行；以标准物浓度为坐标，OD值为横坐标，计算出标准曲线的多项式二次回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

监测项目：患者CIK治疗前及治疗后1—2d分别抽血检测IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-dα，观察其变化。

统计学方法：所有统计分析将采用sPSS 19.O统计分析软件进行计算。所有的统计检验均采用双侧检验，P≤0.05为差异有统计意义。

结果

CIK治疗后IL-2、IL-6、IL-8、1L-10、TNF-α的变化：应用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）方法测定各项细胞因子，CIK治疗后1～2 dIL-2、TN F-α数值下降，IL-8数值升高，差异有统计学意义。Thl/Th2比值失衡得到纠正，见表1。

讨论

肺癌患者免疫功能低下，术后、放化疗后其免疫功能进一步破坏，免疫功能抑制是影响临床疗效及生活质量的重要因素之一，因此提高患者机体免疫力是临床治疗中亟待解决的问题。机体抗肿瘤免疫机制分为细胞免疫和体液免疫两方面。根据分泌细胞因子的不同，T辅助细胞分为Thl和Th2两个不同功能的亚群，两类细胞在发挥功能过程中，分泌不同细胞因子，发挥着协调作用[2]。其中Thl细胞分泌IL-2、TNF-α等细胞因子，Th2细胞分泌IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子。Thl细胞主要介导机体的细胞免疫反应，Th2细胞主要介导体液免疫反应。

本研究显示，经CIK治疗后1～2dIL-2、TNF-α浓度较前降低，IL-8、IL-10水平在CIK治疗后较前升高。从而使CIK治疗后患者外周血Thl/Th2细胞因子平衡紊乱明显改善。对照组Thl/Th2细胞因子平衡紊乱纠正不明显。

本研究结果与其他CIK治疗研究不同。叶联华等研究显示[3]，经CIK治疗后2周，外周血IL-2明显升高，IL-10于CIK治疗后2周下降。试验结果不同可能与CIK治疗后采血时间有关，本试验是CIK治疗后1～2d采血，与叶联华等实验ClK治疗后2周、4周、8周时间点采血不同。至于CIK治疗后1～2d，与治疗后2周细胞因子变化如此明显，其中原因还不是很清楚，需要进一步研究。

总之，晚期肺癌患者存在Thl/Th2细胞因子失衡，相对于单纯化疗患者，加用CIK治疗后可早期改善Thl/Th2平衡紊乱。化疗期间合理应用CIK治疗对改善预后会有一定帮助。

参考文献

[1]Waiker S.Updaies in non-small cell lungcancer[J]. Clinj Oncol Nurs， 2008， 12（4）：587-596.

[2] Hsieh CH，Wang CH，Kuo HP.Astham controlin asthmaLic patients treated for lung cancer[J].Chang Cung Med J，2011，34（1）：35-43.

[3]叶联华，黄云超，赵光强，等.细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗对非小细胞肺癌患者术后免疫功能的影响[J].中国胸心血管外科杂志，2008，15（2）：96-99.