不同类型银屑病患者全血中Thl7细胞因子mRNA表达及血清IL—26蛋白水平的临床分析

付继成 江珊

[摘要]目的：分析不同类型银屑病患者全血中Thl7细胞因子mRNA表达及血清IL-26蛋白水平。方法：选取2012年12月-2017年12月在笔者医院接受治疗的80例进行期银屑病患者，选取同期体检健康者80例作为对照组，检测两组对象血清白细胞介素-26（IL-26）含量，实时荧光定量PCR检测IL-26、白细胞介素-22（IL-22）、白细胞介素-17A（IL-17A）mRNA表达状况，并行统计分析。结果：银屑病及不同分型患者血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表达量和IL-26蛋白含量均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。关节型银屬病患者IL-26 mRNA表达量和血清IL-26含量高于寻常型银屑病、红皮型银屑病和局限性脓疮型银屑病，差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示，患者疾病严重程度和IL-26蛋白含量呈正相关（r=0.702，P<0.05）。结论：银屑病患者血清IL-26蛋白含量及IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表达量较健康者升高，且关节型银屑病患者IL-26 mRNA表达量高于其他类型患者。

[关键词]银屑病；Thl7细胞因子；白细胞介素-26；白细胞介素-22； mRNA

[中图分类号]R758.63 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2018） 08-0078-03

银屑病是一种反复发作、慢性自身免疫性皮肤疾病，其病因当前尚不完全明確，可能和感染、基因、环境及激素等因素有联系。银屑病患者病变组织可见大量浸润性白细胞、异常增殖的角质形成细胞及活化T细胞等[1-2]。相关研究显示，角质形成细胞与浸润T细胞及它们分泌的细胞因子在病情进展中发挥着重要作用。在病变皮肤组织内有大量Thl细胞分泌的白细胞介素-1β（IL-1β）、γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等细胞因子，故人们认为银屑病中Thl细胞有重要影响。近年来，人们发现T细胞亚群内Thl7细胞能够合成白细胞介素-22（IL-22）、白细胞介素-17（IL-17），且IL-22和IL-17都参与银屑病发病进程，为患者体内主要炎性细胞因子[3-5]。Thl7除了分泌IL-22与IL-17，还能够合成白细胞介素-26（IL-26）。因此，本文通过分析不同类型银屑病患者全血中Thl7细胞因子mRNA表达及血清IL-26蛋白水平，为临床患者诊疗提供一些实验室依据。

1 资料和方法

1.1 临床资料：选取2012年12月-2017年12月在笔者医院接受治疗的80例进行期银屑病患者，均由2名以上副主任及以上职称医师确诊，其中男性36例，女性44例；年龄22?60岁，平均（34.28±10.06）岁；平均病程（4.27±1.03）年；红皮型银屑病18例，寻常型银屑病25例，关节型银屑病15例，局限性脓疱型银屑病22例；患者近1个月内未口服免疫抑制剂、糖皮质激素和维A酸等药物，近2周未进行光化学疗法或者光线疗法，未外用他克莫司、维生素衍生物和糖皮质激素等药物，无脏器器质性病变和系统性红斑狼疮等免疫性皮肤病，肝肾功能和血常规检测正常。

选取同期在医院体检健康者80例作为对照组，既往无血管炎和银屑病等皮肤病病史，近1个月内无感染史，其中男性39例，女性41例；年龄20?59岁，平均（35.82±10.35）岁。两组年龄、性别等临床资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，患者或家属知情并签署同意书。

1.2 主要仪器与试剂：台式高速离心机（由美国Heal Force公司生产）、IL-26试剂盒（由美国BD公司生产）、实时荧光定量PCR仪（由美国Applied Biosystems公司生产）、RN Aiso Plus（由日本TaKaRa公司生产）、酶标仪（由美国Bio-RAD公司生产）、UltraSYBR Mixture与反转录试剂盒（由北京康为世纪公司生产）。

1.3 方法

1.3.1 血清IL-26含量检测：采集两组早晨空腹静脉血5ml，使用EDTΑ-K3抗凝后摇匀，ELISA法检测血清IL-26含量，具体步骤依据试剂盒说明书进行，检测范围8?1 000ng/L，A值酶标仪测量，波长450mm。

1.3.2 血清Thl7 mRNA含量检测：100ml全血和200mlRNAiso Plus放入离心管内，氯仿加入后摇匀，离心机3 000rmp离心10min，取上清液移到另外离心管内，异丙醇加入后摇勾，静置8min后离心机lOOOOrmp离心12min。上清液倒掉，加入750ml 75%乙醇，离心机lOOOOrmp离心6min后将上清液倒掉，干燥沉淀6min。无RNA酶去离子水将RNA沉淀全部溶解以后，紫外分光光度仪检测，读取260nm及280nmA值，A260nm/A280nm比值为1.8?2.0，并估算核酸纯度。

使用SuperQuickRT Mas-ter Mix行RNA反转录，依据试剂盒行反转录反应，条件为38°C下16min，86°C下5s。

1.3.3 实时荧光定量PCR：采用UltraSYBR Mix-ture扩增目的基因，反应体积50ml；引物正义链与反义链，IL-26： 5 -GCTATCGGTTAACGTAGTAC-3，

5-TGGACTGACGAGGGAAGCG； β-actin：

5-TAAGCTCGGCCCTTACCAAT-3，

5- CTTAGCCAATTGCGTAGGGT-3； IL-22： 5-ATTCGACGTACGAACTGGTT-3，

5-TAAGTGACGCGAGCGACCTG-3； IL-17A ：5-ACCTAGCTACTGGACAGTTΑ-3，5-TCCGGTATTATGGAGTCCAG-3。反应条件，95°C下10min，95°C变性 15s，60°C 下退火lmin，60°C 下延伸lmin，40个循环。溶解曲线，95°C下15s，60°C下lmin，95°C下 15s， 60°C下 15s。内参为β-actin，2-△ct表示结果，△Ct=Ct目的基因-Ct内参。

1.4 统计学分析：采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计量资料 表示，单因素方法分析，两两对比检验；计数资料行；χ2检验；Pearson行相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表达及IL-26含量比较：银屑病组及不同分型组患者血清IL-26、IL-22、IL-17A mRNA表达量和IL-26蛋白含量均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；关节型银屑病患者IL-26 mRNA表达量和血清IL-26含量高于寻常型银屑病、红皮型银屑病和局限性脓疱型银屑病，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 相关性分析：Pearson相关分析显示，患者疾病严重程度和IL-26蛋白含量呈正相关，差异有统计学意义0=0.702， PC0.05）。

3 讨论

当前IL-26相关生物学功能研究不是很多，国外一些专家曾报道克罗恩病患者血清内IL-26含量上升，同时可诱引肠上皮细胞产生IL-8及TNF-α[6-7]。Dambacher等[8]研究显示，类风湿关节炎患者关节腔积于血清内IL-26含量都上升，并且可加速单个核细胞形成TNF-α与IL-8等一些细胞因子。银屑病患者血清IL-26作用因素目前还不太明确，IL-26受体在皮肤角质所产生细胞表层表达，同时诱发分泌IL-8，这可能为银屑病患者发病中IL-26參与机制影响[9-12]。

本文研究显示，关节型患者IL-26 mRNA表达量高于寻常型、红皮型和脓疱型，差异有统计学意义，这可能因为除Thl7产生IL-26外，关节型患者发生病变关节腔内滑膜细胞也会形成IL-26。当前对于IL-22与IL-17生物学功能研究已比较深入，但IL-26生物学功能不是太清楚。IL-17包含IL-17F、IL-17E和IL-17A等，主要为IL-17A，它可以将MAPK、NF-kB信号路径激活，进而引发多种效应，诱使中性粒细胞聚集与活化，并对炎症组织内中性粒细胞凋亡其抑制作用[13-15]。另外，IL-17A还能够加速形成机制金属酶与血管生成素，进而加快修复与生成组织血管。IL-17A对TNF-α有协同影响，加速释放TNF-α、IL-1P与IL-6，使体内炎症程度加重。IL-22为Thl7所分泌主要炎症因子，它可加速角质形成细胞增殖，IL-22可刺激角质形成细胞分解抗微生物氨基酸肽和基质金属酶，同时银屑病患者病情程度和血清IL-22含量相关[16-18]。由于IL-26和IL-22都用相似氨基酸序列，为IL-10细胞家族，同时都是Thl7所分泌，因此，IL26是否有和IL-22近似生物功能还需行更深入研究。

综上所述，虽然本研究验证了银屑病患者血清内IL-26含量上升，且关节型患者含量比其他类型患者含量更高，和银屑病病情严重程度为正相关，这说明IL-26可为银屑病，特别是关节型银屑病患者诊疗辅助指标。由于人力和时间等限制，本文样本量偏少，且没有对银屑病起病中IL-26的相关机制进行研究，因此，IL-26若要作为关节型银屑病患者诊断辅助指标和治疗靶点，还需进一步行动物实验和大样本临床研究。

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