聚乙二醇干扰素治疗非活动性HBsAg携带者血清MIP-1β水平变化趋势

曹振环，柳雅立，马丽娜，郑燕红，王 群，王俊丽，吴芳芳，陈新月

非活动性HBsAg携带者（inactive hepatitis B surface antigen carrier, IHC）是指HBsAg阳性＞6个月，HBeAg阴性，抗-HBe阳性，HBV DNA低水平或检测不到，ALT正常，肝组织学检查病变轻微的患者[1]。通常IHC被认为处于机体的“免疫控制期”，但其仍存在潜在的危险，可逆转为HBeAg阳性及阴性慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB），导致ALT升高，肝脏炎症再度活动。有报道称IHC肝炎复发率在5、10、15、20和25年分别为 10.2%、17.4%、19.3%、20.2%和20.2%[2]。另外，IHC的肝癌发生率也远高于正常人[3]；IHC使用化疗药物、糖皮质激素等免疫抑制剂时，极易发生HBV再激活，甚至肝衰竭[4-6]。我们之前对IHC进行了聚乙二醇干扰素（pegylated-interferon,Peg-IFN）治疗，HBsAg清除率达到44.7%[7]，为这类人群的治疗提供了可靠的临床依据。但目前尚缺乏Peg-IFN治疗IHC获得HBsAg清除的相关免疫学研究。巨噬细胞炎性蛋白1β（macrophage inflammatory protein-1β, MIP-1β）是一种趋化因子，可以趋化T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞和未成熟树突状细胞（dendritic cell, DC）在炎症部位和肿瘤局部发挥作用。有报道称在HBV感染过程中，MIP-1β不利于机体快速清除病毒，导致慢性持续性肝炎，另外可诱发免疫损伤，促进肝脏纤维化[8-9]。但MIP-1β与HBsAg清除，尤其是与经过Peg-IFN治疗的IHC获得HBsAg清除的关系还未见报道。

1 对象与方法

1.1 对象 2013年1月—2016年1月就诊于首都医科大学附属北京佑安医院门诊的IHC 20例。IHC诊断符合2015年《慢性乙型肝炎防治指南》，入组标准：①HBsAg阳性＞6个月，HBeAg阴性、抗-HBe阳 性、 抗 -HBc阳 性，HBV DNA＜ 20 IU/ml，ALT正常；②HBsAg定量＜1000 IU/ml；③TBIL＜25 μmol/L，ALB＞40 g/L，INR 0.8～1.2；④WBC（4～ 10）×109/L，PLT（100～ 300）×109/L；⑤FibroScan：E值＜6.4 kPa；⑥未接受过抗病毒治疗；⑦排除重叠HIV、HCV感染，自身免疫性疾病，肝硬化，肝癌，肝功能失代偿，严重代谢性疾病及合并其他系统肿瘤等。另纳入健康人11例（HBsAg阴性，抗-HBs＞200 IU/ml）。

1.2 治疗方法与疗效 20例IHC接受Peg-IFNα-2a 135 μg，1次/周，皮下注射。13例治疗24周后获得HBsAg清除，设为应答组（R组），7例治疗24周后未获得HBsAg清除，设为无应答组（NR组）。

1.3 标本 采集20例IHC基线、12周、24周的血清及11例健康者的血清进行MIP-1β检测。

1.4 实验室方法 细胞因子检测：采用Luminex（液相芯片技术）检测血清MIP-1β水平，仪器为美国Bio-Rad公司Bio-Plex 200 system。HBsAg、抗-HBs定量：应用HBsAg quantitative Elecsys（Roche Diagnostics GmbH, German）检测，HBsAg定量检测下限为0.05 IU/ml，抗-HBs＞10 IU/ml为阳性。HBV DNA定量：采用RT-PCR，仪器为Roche Cobas/Taqman Real-Time PCR2.0 System，德国罗氏公司试剂盒，检测下限为20 IU/ml。肝功能检测：采用脱氢酶法、溴甲酚绿法、循环酶法氧化酶法、肌氨酸氧化酶法等，仪器为Olympus AU5400全自动生物化学分析仪，试剂为上海科华东菱公司相关试剂盒。

1.5 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行统计分析。正态分布的计量资料以±s表示；3组间比较用单因素方差分析（组间方差齐），两两比较用q检验。2组间比较用t检验。计量资料不同时间点比较用单因素重复测量的方差分析。多组间计数资料比较采用R×Cχ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般资料及基线特征 本研究共入组20例IHC，R组13例，NR组7例，同时纳入11例健康人为HC组。3组在性别、年龄、ALT水平上无明显差异。R组基线HBsAg定量低于NR组，但差异无统计学意义（t=3.684，P=0.067）。见表1。

表1 一般资料及基线特征Table 1 General data and baseline characteristics of the patients

2.2 3组间基线血清MIP-1β水平比较 R组基线MIP-1β水平为（102.25±72.09）pg/ml，NR 组为（80.49±57.82）pg/ml，HC 组 为（87.46±52.74）pg/ml，虽然R组MIP-1β水平较高，但可能由于样本量较小，3组之间差异无统计学意义（F=0.320，P=0.729）。见图1。

图1 3组血清MIP-1β水平比较Figure 1 Comparison of serum MIP-1β levels among 3 groups

2.3 R组抗病毒治疗后MIP-1β水平变化 R组抗病毒治疗后MIP-1β水平明显下降，基线为（102.25±72.09）pg/ml，12 周 降 至（59.19±31.05）pg/ml，24周降至（48.95±26.91）pg/ml（F=4.532，P=0.018）。基线与12周、24周相比，差异均有统计学意义（P=0.028，P=0.007）。见图2。

图2 R组抗病毒治疗后MIP-1β水平变化情况Figure 2 Changes of MIP-1β level after antiviral treatment in R group

2.4 NR组抗病毒治疗后MIP-1β水平变化 NR组中大部分患者MIP-1β呈下降趋势或水平波动。各时间点平均值无明显变化，基线为（80.49±57.82）pg/ml，12周为（76.16±64.32）pg/ml，24周为（69.48±40.71）pg/ml（F=0.071，P=0.932）。见图3。

图3 NR组抗病毒治疗后MIP-1β水平变化情况Figure 3 Changes of MIP-1β level after antiviral treatment in NR group

3 讨 论

IHC是HBV感染者中最大的一个群体[10-11]。多项在高加索人群中进行10年以上的随访数据显示，与HBeAg阳性或HBeAg阴性的CHB患者相比，IHC预后好，发生HCC几率较低[12]。但亚洲人群与高加索人群不同，亚洲的IHC可能存在HCC高风险。台湾的一项研究对1965例IHC进行了平均11.5年的随访，结果显示16%的患者出现病毒再激活，25年肝硬化累积发生率达到15%，病毒再激活者20年肝硬化累积发生率更是高达46%[13]。另一项台湾研究对1932例IHC进行了平均13.1年的随访，结果发现这些IHC的肝癌和肝癌相关死亡风险是非HBV携带者的4.6倍（HR=4.6，95%CI：2.5～8.3）和2.1倍（HR=2.1，95%CI：1.1～4.1）[14]。由此可见，我们不应该把IHC作为“健康携带者”对待，探索其治愈方案对于改善其预后仍具有非常重要的意义。本课题组在前期应用Peg-IFN治疗IHC，获得了较高的HBsAg清除率，为进一步的基础研究提供了宝贵的临床资源。

MIP-1β是一种趋化因子，表达于单核细胞，巨噬细胞，NK细胞，T、B淋巴细胞及内皮细胞。MIP-1β对T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞和未成熟DC均具有很强的趋化能力。但MIP-1β水平与CHB患者抗病毒疗效的相关性报道甚少，尤其是与HBsAg清除的相关性尚未见报道。

本研究选取了前期部分获得HBsAg清除的IHC病例，初步检测了基线及治疗过程中血清27种细胞因子水平，包括IL-1、IL-2、IL-17、IL-22、MIP-1β等。结果发现IHC在Peg-IFN治疗后，其MIP-1β水平下降明显。为此，本文进一步分析了血清MIP-1β水平与HBsAg清除的相关性，结果显示HBsAg清除者MIP-1β水平下降明显，而未清除者则无此现象。既往研究表明病毒性肝炎患者血清MIP-1β表达升高，其可介导CCR5HIGH的T细胞进入门脉区，发挥免疫效应，导致机体不能迅速清除病毒，而发展为慢性持续性肝炎[14]。本研究的结果提示Peg-IFN治疗IHC，可一定程度降低MIP-1β水平，使之发挥疾病慢性化的作用减弱，这可能有利于疾病的治愈——获得HBsAg清除。