黄连-姜的不同比例配伍使用对有效成分含量的影响

黄文娟， 刘 晶， 陈 良， 轩辕欢

(新疆医科大学附属中医医院药学部， 乌鲁木齐 830000)

黄连(CoptischinensisFranch.)为毛茛科黄连属多年生草本植物，性味苦寒，具有清热燥湿、泻火解毒等功效[1]，主要含有生物碱等化学成分，其中盐酸小檗碱、巴马汀碱含量最高[2]，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用[3]。生姜(ZingiberofficinaleRoscoe)为姜科姜属的多年生草本植物的新鲜根茎，性温，具有开胃止呕，化痰止咳等功效，化学成分以姜辣素类和挥发油为主[4]，其中6-姜酚最具代表性，具有强心、调节血管、抗粥样动脉硬化等作用[5,6]。有研究记载用姜来炮制黄连，能够降低黄连的苦寒之性，增加和胃止呕的功效，炮制理论认为姜黄连的炮制属于“以热治寒”，又称“反制”[7]。在临床应用中，黄连-姜的配伍组合十分常见，如黄连生姜汤、半夏泻心汤等，多用于和胃降逆、寒热平调、补虚和中、泄热消痞等[8]。本研究参照临床常用的6种方剂中黄连-姜的配伍比例，采用了高效液相HPLC法测定配伍前后盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚的含量变化[9]，初步探讨了二者“以热治寒”的配伍原理，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器Waters 2489型高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Q2008型超声提取仪(上海启前电子科技有限公司)。

1.2试剂盐酸小檗碱标准品(中国药品生物制品检定院，批号110715-201212)，巴马汀碱标准品(中国药品生物制品检定院，批号0732-9604)，6-姜酚标准品(成都瑞芬思生物科技有限公司，批号J-019-151222)，甲醇、乙腈等均为色谱纯，其他试剂为分析纯。

1.3药材黄连药材2017年3月购买于重庆石柱黄连有限公司，生姜、干姜2017年6月购买于新疆新特药公司，经新疆医科大学附属中医医院李永和主任中药师鉴定为毛茛科植物黄连(CoptischinensisFranch.)的根茎、姜科植物姜(ZingiberofficinaleRoscoe)的根茎。

2 方法与结果

2.1黄连-姜的配伍组合依照2015版《中国药典》选择6种方剂中黄连-姜的不同配伍比例作为样品，见表1。

2.2对照品溶液的制备

2.2.1 黄连混合生物碱对照品的制备 称取盐酸小檗碱、巴马汀碱对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为0.086 mg/mL盐酸小檗碱、0.027 mg/mL巴马汀碱的混合对照品溶液，备用。

2.2.2 6-姜酚标准品的制备 称取6-姜酚对照品适量，用甲醇溶解制成浓度为0.441 mg/mL的对照品溶液，备用。

表1 临床上6种不同方剂组合中黄连-姜的配伍

2.3供试品溶液的制备

2.3.1 黄连供试品溶液的制备 称取生黄连粉末、1～6的样品粉末各0.1 g置于具塞锥形瓶中，加入甲醇-盐酸(100∶1)混合溶液50 mL，密塞称重，超声提取50 min，放至室温再称重，用甲醇补重，摇匀、滤过，取滤液即得。

2.3.2 姜供试品溶液的制备 称取生姜2.0 g、干姜0.5 g、样1～6的样品各3.0 g置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，回流提取30 min，放至室温再称重，用甲醇补重、摇匀、滤过，取滤液即得。

2.4色谱条件

2.4.1 黄连生物碱色谱条件 symmetry shield C18柱色谱柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-(磷酸∶三乙胺∶水=1∶2∶100)(24∶76)，检测波长265 nm，流速1 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL，见图1、2。

图1 混合标准品HPLC色谱图

图2 样品1HPLC色谱图

2.4.2 6-姜酚色谱条件 symmetry shield C18色谱柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)，检测波长280 nm，流速为1 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL，见图3、4。

图3 6-姜酚HPLC色谱图

图4 样1HPLC色谱图

2.5回归方程的建立分别吸取“2.2.1”项下盐酸小檗碱、巴马汀碱混合标准品5、10、20、40、80 μL进样，分别吸取“2.2.2”项下6-姜酚标准品2、4、6、8、40 μL进样，以峰面积积分值(Y)为浓度X(μg/μL)进行回归处理，得到盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚的回归方程，见表2。

表2 盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚回归方程的建立

2.6方法学考察

2.6.1 精密度试验 分别吸取“2.2”项下的对照品溶液各10 μL，按“2.4”项下色谱条件，连续进样5次，结果盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚峰面积的RSD分别为1.0%、0.9%、1.1%，表明仪器精密度良好。

2.6.2 稳定性试验 分别吸取“2.2”项下的对照品溶液10 μL，按“2.4”项下色谱条件，于0、2、4、8、12、24 h进样测定峰面积，结果盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚峰面积的RSD分别为1.1%、1.0%、1.9%，表明供试品溶液在24 h之内稳定。

2.6.3 重复性试验 称取样品1共12份，分别按“2.3.1”“2.3.2”项下制备供试品各6份，按“2.4”项下色谱条件进样测定，结果盐酸小檗碱、巴马汀碱、6-姜酚含量的RSD分别1.3%、1.7%、2.0%，表明试验重复性良好。

2.6.4 加样回收率试验 按“2.3.1”“2.3.2”项下制备供试品各6份，分别加入一定量的盐酸小檗碱、巴马汀碱混合对照品和6-姜酚对照品，按“2.4”项下色谱条件进样测定，计算平均加样回收率。盐酸小檗碱、巴马汀碱混合对照品和6-姜酚对照品的平均加样回收率分别为98.14%、99.02%、99.73%，见表3。

表3 加样回收率试验结果

2.7样品的含量测定取“2.3”项下供试品溶液，按“2.4”项色谱条件进样测定，以△盐酸小檗碱、△巴马汀碱、△总生物碱、△6-姜酚表示配伍前后成分的含量差值，对应样1～6黄连-姜的比例进行比较，见表4。

表4 黄连-姜中成分的含量测定结果

注∶与生黄连相比，△P<0.05；与生姜相比，◆P<0.05；与干姜相比,▲P<0.05。

表5 样1～6黄连-姜的配伍前后成分的含量差异(mg/g)

3 讨论

3.1试验数据分析本研究发现，随着姜类物质在黄连配比使用中的增加，盐酸小檗碱的溶出逐渐增加，巴马汀碱、6-姜酚的含量有所降低，而对于总生物碱是有所增加的，这就证明了姜类物质能够增加生物碱的溶出。

3.2化学角度分析黄连中生物碱易溶于水，呈碱性，而6-姜酚分子结构中的羧基、羟基容易断裂形成醛和酚，故姜酚的分子中具有一般酚羟基、羧基的共性[10]，6-姜酚利用自身的酸性将黄连中更多的生物碱游离出来，这与本研究的试验结果也是相吻合的。

3.3炮制原理分析生物碱是黄连抗菌、消炎、抗肿瘤的主要化学成分[11,12]，而6-姜酚是姜的辣味成分,也是其主要的活性成分[13]。在黄连-姜的配伍使用中，温热性的药物姜可以缓解黄连的苦寒之性，同时又能够增加黄连总生物碱的溶出，这就是炮制学中的“以热治寒”、 “增效减寒”的原理[14]，即黄连-姜配伍使用后，苦寒之性降低并扩大了黄连治病的范围，符合临床用药需求。对于具体临床疗效的改变，可以通过进一步的药理实验，结合本研究的成分变化进行对比分析。

本研究单纯对临床常用方剂中黄连-姜的比值进行了研究，而在实际应用中黄连-姜的配伍多与其他中药以复方制剂形式存在，这就增加了其他成分的干扰，组方的不一致也可能造成黄连、姜的成分含量变化，所以本次试验结果可以作为对比含有黄连-姜的复方制剂的研究提供基础。