miR-218在调控肝癌发生发展中的机制及其干预措施分析

胡金陵

全球范围内肝癌死亡患者每年的死亡数量超过100万,因此为患者提供有效的治疗干预有重要的临床价值［1］。MicroRAs作为一种非编码RNA, 在人体当中广泛分布, 研究结果提示miR-218同肿瘤发生发展存在密切联系, 在肺癌患者、前列腺癌患者以及肝癌患者当中呈现出表达下降的倾向,在癌症发生发展环节能够发挥抑制效果［2,3］。miR-218对于肝癌细胞增殖方面的影响研究仍然较少, 本研究分析肝癌患者miR-218表达及其同病理特征之间的关系, 给予患者针对性干预, 并在此基础上分析干预措施的效果, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年2月～2017年2月本院收治的40例肝癌患者作为研究对象, 其中男29例, 女11例；年龄26～68岁, 平均年龄(50.1±6.3)岁。纳入标准：符合肝癌诊断标准［4］；病历资料完整；知情同意本研究。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并精神性疾病；妊娠哺乳期女性。本研究经过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 miR-218检测方法 人肝癌细胞株HepG2在含有胎牛血清的培养基当中进行培养, 稳定传代3代子后, 取对数生长期的细胞。miR-218转染使用脂质体法转染HepG2之后分为两组, 实验组添加miR-218mimic以及培养液、脂质体,对照组添加无义序列的miRNAmimic以及培养液、脂质体。接种细胞到培养瓶中, 常温条件下持续培养到细胞融合度＞60%, 更换培养液进行培养。收集HepG2细胞制作单细胞悬液, 细胞密度调整为1×105/ml, 100 μl/孔的浓度接种到96孔板。左上孔当作空白孔, 仅仅添加培养基而不添加细胞。每组设置6个复孔, 每孔添加10 μl的3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)溶液, 避光条件下持续培养2 h,去除上清之后添加100 μl的二甲基亚砜(DMSO), 常温条件下持续孵育30 min直到颗粒溶解。酶标仪检测570 nm各孔的吸光度D值, 计算各组细胞的活性, 细胞活性=实验组的D均值/对照组的D均值［5］。重复实验3次计算平均值。

1.2.2 干预方法 患者均口服应用伊马替尼治疗, 200 mg/次,2次/d, 用餐时服用。在此基础上加强配套干预。①饮食干预：合理控制饮食, 最大限度实现多样化, 确保营养均衡。避免单一饮食而使得患者的营养缺乏, 食物需要避免过热或者过冷, 同时要指导患者少食多餐, 避免高脂肪以及高热量食物。应当根据患者具体条件确定饮食计划。②疼痛干预：为了缓解患者痛感, 医务人员应当找出疼痛的特征、具体位置以及原因, 给予个性化的干预措施。临床上往往应用止痛药物缓解患者的疼痛, 不过应当控制用量。此外, 还可以应用按摩或者是心理暗示等方法。③心理干预：医务人员需要对患者提供心理疏导, 缓解其负性情绪, 要帮助患者树立积极治疗的信心, 同家属沟通, 以便在第一时间发现其情绪变化。

1.3 观察指标及判定标准 比较患者肝癌组织以及附近组织miR-218表达水平, 并分析miR-218表达与患者病理特征之间的相关性。比较患者干预前后的SAS、SAS评分, 分数越高焦虑、抑郁情绪越为严重。比较患者干预前后VAS评分,分数越高疼痛情况越明显。同时应用SF-36量表评估患者干预前后生活质量, 具体包括社会功能、躯体功能、角色功能、认知功能, 分数越低生活质量越差［9］。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示, 两组比较采用t检验, 多组比较采用方差分析；相关性分析应用Pearson相关性检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 肝癌组织及癌旁组织miR-218表达水平比较 肝癌患者肝癌组织的miR-218表达水平为(0.45±0.18)低于癌旁组织的(1.54±0.63), 差异有统计学意义(P＜0.05)。随着与癌组织距离的缩短, 患者组织的miR-218表达水平不断降低, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 40患者肝癌组织及癌旁组织miR-218表达水平比较( )

表1 40患者肝癌组织及癌旁组织miR-218表达水平比较( )

注：不同与癌组织距离的组织miR-218表达水平比较, P＜0.05

2.2 miR-218表达与肝癌患者病理特征的相关性分析 miR-218表达与肿瘤大小以及TNM分期存在显著相关性(r=-0.628、-0.755, P＜0.05)。见表 2。

表2 miR-218表达与肝癌患者病理特征的相关性

2.3 患者干预前后SAS、SDS以及VAS评分比较 干预后,患者SAS、SDS以及VAS评分均显著低于干预前, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 干预前后40例患者SAS、SDS以及VAS评分比较( , 分)

表3 干预前后40例患者SAS、SDS以及VAS评分比较( , 分)

注：与干预前比较, aP＜0.05

?

2.4 患者干预前后生活质量评分比较 患者干预后社会功能、躯体功能、角色功能、认知功能评分均高于干预前, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表4。

表4 40例患者干预前后生活质量评分比较( , 分)

表4 40例患者干预前后生活质量评分比较( , 分)

注：与干预前比较, aP＜0.05

?

3 讨论

miRNAs属于非编码RNAs, 借助于结合目的转录降低mRNA, 或者是抑制mRNA翻译实现基因表达的负向调节。肝癌当中存在表达异常的一系列miRNAs, 同时大部分同细胞增殖、细胞凋亡以及肿瘤转移存在联系［4］。本研究结果显示,肝癌组织miR-218表达水平显著低于癌旁组织, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。进一步分析可以发现, miR-218表达下降同肿瘤大小(＞5 cm)以及TNM高分期(Ⅲ+Ⅳ)存在密切联系。这表明miR-218同肝癌病情的发展存在联系［5］。人类的miR-218主要包括两个部分的基因编码, 也就是miR-218-1以及miR-218-2, 其中miR-218-1位于SLIT2染色体4,而miR-218-2位于SLIT3染色体［6］。

有研究人员在肝癌细胞系HepG2当中过表达miR-218,发现miR-218可以有效抑制细胞增殖同时加速细胞凋亡［7］。为分析miR-218加速肝癌细胞凋亡以及肝癌细胞增殖的具体机制, 研究人员选择依赖性激酶6(CDK6)以及Bmi-1当作miR-218的靶蛋白展开分析, CDK6是蛋白通道当中的调节因子之一, 能够调节癌蛋白活性以及p27活性, 同时调节特定细胞的分化, 对于胸腺细胞以及肿瘤发生发展都有不容忽视的重要影响［8］。miR-218借助于下调CDK6蛋白, 能够抑制恶性肿瘤细胞的增殖, 同时加速细胞凋亡。在肝癌当中miR-195借助于抑制CDK6表达使得G(1)/S转换发生阻滞。其中Bmi-1可以调节细胞转化以及细胞增殖, 并且在干细胞更新环节以及肿瘤恶化环节都有重要影响。Bmi-1作为核染色质调控因子, miR-218可以抑制Bmi-1表达从而抑制肿瘤细胞的增殖［9,10］。

本研究中, 干预后, 患者SAS、SDS以及VAS评分显著低于干预前(P＜0.05), 提示伊马替尼干预有明显效果。PI3K/Akt通路借助于p85发挥影响, c-Kit磷酸化之后能够同PI3K亚基p85加以结合, 从而激活PI3K/Akt通路。对于伊马替尼较为敏感的肝癌患者, 在应用伊马替尼进行治疗的过程当中,这条通路能够得到有效的抑制。本研究中, 患者干预后社会功能、躯体功能、角色功能、认知功能评分均高于干预前,差异具有统计学意义(P＜0.05)。

综上所述, 肝癌患者的miR-218表达显著下降, 为靶向治疗提供新的思路, 采取针对性干预措施有利于减轻疼痛情况, 改善患者生活质量。