南京市6774份HIV抗体初筛阳性标本复检与确证结果分析

吴咏梅 许文炯 董潇潇 董晓庆 王 燕

HIV抗体是机体针对HIV病毒产生免疫反应的产物，理论上采用针对病毒的检测方法能够有效地进行病原学诊断[1]。但实际上，HIV分离培养的方法敏感性低，操作繁琐，很难应用。HIV 抗体检测是常规使用的诊断艾滋病病原学的实验方法。南京市疾病预防控制中心艾滋病实验室在疾控、医疗、采供血等部门中设立HIV抗体筛查实验室67家，全HIV抗体检测网络系统形成一定规模。抗体检测分为筛查、复检和确认三个步骤，筛查、复检呈阳性反应的标本需要经过确证以后才能下结论。本文拟分析南京市2012-2017年HIV 抗体初筛阳性标本的复检与确证结果，为指导与提高各筛查实验室的检测水平提供依据，为确证实验室寻找更准确的方法提供建议，提高全市HIV实验室检测水平。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2012年1月至2017年12月南京市各艾滋病初筛实验室送检HIV抗体阳性标本6774份。

1.2 试剂和仪器 初筛试验中化学发光法试剂由雅培提供，用发光或荧光仪测定结果；复检试验酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗原夹心法试剂由珠海丽珠提供；胶体金(硒)标快速法试剂由雅培硒标提供；确证试验免疫印迹法(WB)试剂由新加坡GENELABS公司提供。所有试剂均在有效期内使用，严格按本实验室SOP标准操作程序进行检测。酶标仪为安图斯Anthos2010型，洗板机为安图斯Anthos fluido。

1.3 复检程序 根据《全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)》[2]要求，用原有试剂和另一种不同方法或原理的试剂进行复核，如果两种试剂均阳性或一阴一阳者必须进行确证试验。

1.4 确证程序 复检试验阳性的样品，进行WB确证试验。结果阴性者，报告“HIV抗体阴性”；结果阳性者，报告“HIV-1抗体阳性”，按规定做好检测后咨询和疫情报告；结果不确定者，报告“HIV抗体不确定”。

1.5 结果判断 对同时符合以下两条标准可判为阳性：①至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准。如出现HIV抗体特异带(如env带:gp41，gp160/gp120；gag带:p55，p24，p17；pol带:p66，p51，p31)，但不足以判定阳性者判定为不确定，不确定结果不能作为HIV感染的诊断依据。

1.6 统计学方法 数据分析均采用SPSS 13.0软件进行统计分析，计数资料进行χ2检验。

2 结果

2.1 复检双阳性WB确证结果 复检结果6774份初筛阳性标本经金标和酶标复检，复检双阳性4821份，确证阳性4736份，确证阴性3份，不确定82份。各年度检测情况见表1。

2.2 复检一阴一阳WB确证结果 金标和酶标复检一阴一阳 总共有97 份， 51份为确证阴性，3份为确证阳性，43份为不确定。其中ELISA阴性和金标阳性39份，1份为确证阳性，20份为确证阴性，18份为不确定；ELISA 阳性和金标阴性58份，确证阳性2份，31份为确证阴性，25份为不确定。各年度检测情况见表2。

表1 2012-2017年度ELISA(酶标)、金标复检及确证结果

2.3 三年中各种分析指标的变化情况 各种发生率结果HIV不确定率逐年上升；筛查真阳性率和筛查阳性的复检阳性率在2014年最高，2015年以后逐年减少；复检真阳性率2012年最高；复检效率2014年最低，2015年以后逐年上升；确认效率2015年以后逐年减少。各年度检测情况见表3。

表2 2012-2017年度ELISA( 酶标) 、金标复检及确证结果

表3 HIV抗体检测各种发生率一览表 %

3 讨论

本文统计结果，6774份初筛阳性标本总复检符合率为72.6%[(4821+97)/6774]；总确证符合率为96.4%[(4736+3)/(4821+97)]。有报道北京及广西等地区的确证符合率多在80%以上[3,4]，南京地区与报道相似。其中，酶标法和金标法单阳复检符合率为1.4%(97/6774)，确证符合率3.1%(3/97)；双阳复检符合率为71.2%(4821/6774)，确证符合率为98.2%(4736/4821)。单阳、双阳的复检和确证符合率结果差异均有统计学意义(P<0.05)。本次结果有两点值得注意：①2014年有3例复检双阳，但确证为阴性，需要进一步结合临床资料随访分析；②在复检单阳中共有3例确证为阳性，说明为避免漏检，采用两种不同方法复检十分必要。根据本文统计结果，不确定结果在双阳中占1.7%(82/4821)，在金标单阳中占46.2%(18/39)，在酶标单阳中占43.1%(25/58)，金标、酶标单阳和双阳不确定结果差异有统计学意义(P<0.05)。

筛查策略分析：筛查阳性的复检阳性率是指首次筛查阳性标本的复检阳性概率。筛查真阳性率反映了筛查实验的准确性。从表3中看出2014年这两个指标较高，分析原因可能是因为加强了实验室规范性的建设，随着试剂的成熟度不断提升，检测能力和检测水平不断提高，2012年至2014年就有上升趋势。但从2015年开始有下降趋势，分析其主要原因可能是初筛实验室大部分由以前的手工酶标法变更为上机操作的化学发光法，其灵敏度提高，从而造成的假阳性也增多。这种现象要引起足够重视，有必要多培训疾控部门掌握化学发光学的质量保证内容，加强对各初筛实验室的督导检查，全面提高各初筛实验室的检测水平。

复检策略分析：复检真阳性率指复检阳性人群中确认为阳性的概率，从表3中看出2012年这个指标是最高的，2016-2017年有下降趋势，分析可能是与2016年以后出现的不确定结果增多有关。复检效率指通过复检去除筛查阳性标本中假阳性的能力，2014年此指标是最低的，2015-2017年有上升趋势，说明了复检的必要性。复检时建议除原标本外还需再采集一份新鲜标本,一方面可核对两份结果的一致性，一方面也可以了解原标本是否受到污染。有条件的实验室，复检时建议应尽量使用不同原理的试剂。

确证策略分析：确认效率指复检阳性标本通过确认能够得出肯定诊断的概率。2015-2017年有下降。说明确证试验WB方法有一定的局限性。有报道说WB的特异性不是很好，只有97.8%[5]。HIV不确定率是指用WB检测方法出现HIV抗体不确定结果的概率，本研究中其整体呈逐年上升趋势，其原因可能是早期HIV携带者增多，抗体还没完全产生；艾滋病晚期患者增多，免疫系统长期受损，体内抗体量低于诊断试剂的检测限时；混合感染的标本来源增多，其非特异性反应也增多。美国CDC建议对此结果一个月后复查；同时也认为，对临床和实验室专家来说，核酸检测对初始免疫印迹“不确定”的个体判断是否感染是有用的。有研究认为，病毒核酸定量针对HIV早期感染的敏感性可达97.6%～100%，特异度为100%[6]。

综合以上分析，对于不确定结果，建议有三点：一是增加1～2种性能稳定成熟的确证试剂用于不确定结果的检测工作，如条带免疫印迹，因其条带上不含杂抗原，不带有宿主细胞的成份，因而特异性更好[7]。二是增加核酸检测进行辅助诊断，有研究表明对于不确定的标本，可以应用核酸检测作为辅助诊断[8]。HIV RNA定量检测技术降低了污染的危险，逐渐被应用于HIV感染的诊断[9]。三是辅以抗原检测，抗原是早期诊断和缩短窗口期的一种重要方法[10]。核酸和抗原的阳性结果只能作为感染的辅助诊断。所有结果应结合流行病学资料进行随访观察，以避免报告假阳性结果。

南京市HIV抗体初筛阳性标本复检与确证结果分析有两点结论：一是随着各筛查实验室化学发光法的使用增多，初筛假阳性增多现象应引起重视。二是随着确证实验室不确定性结果逐年增多，有必要找到适合中国人群的HIV感染确认标准，找到快速鉴别HIV抗体不确定的方法和策略。