乙型肝炎DNA复制期患者血清IL-12、IL-18水平变化及Foxp3基因表达的研究

李荣国 杨 健

乙型肝炎已成为现今的常见病和多发病之一，传播途径广泛，患者一旦失治或误治，往往会出现肝硬化，甚至诱发肝癌肝功能衰竭，危机患者的生命[1]。据统计学研究发现，在欧美等发达国家乙型肝炎的发病率较低，而在我国乙型肝炎的发病率较高，且随着人们生活水平的提高，其发病率呈现逐年升高趋势[2]。因此，早期的预防和合理的治疗尤为重要[3]。乙型肝炎患者的机体免疫功能紊乱，尤其是T淋巴细胞亚群与细胞因子的调节失调[4]。有研究显示，在乙型肝炎的患者DNA高度复制时，释放内毒素，从而促使IL-12、IL-18的分泌增多[5]。目前，对于乙型肝炎发病机制的研究有多种说法，尚不够明确[6]。因此，本实验基于两院收治的患者进行研究和分析，探讨乙型肝炎DNA复制期患者血清IL-12、IL-18水平变化以及血清Foxp3基因的表达情况，为乙型肝炎的发病提供切实可靠的依据。

资料与方法

一、临床资料

选取2014年1月至2015年5月两院收治的乙型肝炎患者137例。慢性乙型肝炎患者92例（A组），其中男49例，女 43例，年龄 27～64岁，平均年龄（37.61±5.31）岁；乙型肝炎肝硬化患者45例（B组），其中男23例，女22例，年龄24～62岁，平均年龄36.2岁；HBV携带者67例（C组），其中男37例，女 30例，年龄 25～66岁，平均年龄（36.15±5.29）岁；另外选取健康体检者34例为对照组（D组），其中男19例，女14例，年龄25～63岁，平均年龄34.3岁。四组性别、年龄等一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

二、入选标准[7-8]

1.纳入标准

符合乙型肝炎的诊断者，或为病毒携带者，或为健康体检者；入选者及其家属同意并签署知情同意书。

2.排除标准

合并其他系统疾病等严重原发病；出现严重心肝肾功能衰竭的患者；病情危重，难以做出确切评价者；在非规定范围内联合用药，影响试验药物有效性和安全性判断者；由于其他各种原因退出试验，或死亡的病例；集资料不全，影响实验结果判断者。

三、观察指标

1.观察肝功能

肝功能生化指标包括丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶 （ALT）、总胆红素 （TB）。肝功能检测采用AU5800型全自动生化分析仪。

2.血清IL-12、IL-18水平及Foxp3基因表达情况

采集空腹静脉血5 mL，冰箱储存备检。采用ELISA法，进行检测，具体操作步骤按说明书进行，试剂盒选自长春博特生物技术有限公司。

3.血HBV-DNA复制活跃度

抽取血清和血浆分别加入0.5 mL离心管中进行备用，提取DNA，加入不同的DNA提取液，PCR分析仪（美国罗氏公司产品）扩增测定DNA含量，具体操作步骤按说明书进行试剂盒选自深圳匹基公司。

四、统计方法

采用统计学软件SPSS 19.0进行数据处理。计量资料以x±s，多组间比较采用多变量方差分析，两组比较采用t检验；计数资料以%表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、四组肝功能情况比较

同D组比较，A、B组的ALT、AST和TB水平显著升高，患者的肝功能受损，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 四组肝功能指标比较 （x±s）

二、四组血清IL-12、IL-18及Foxp3基因表达水平比较

四组血清IL-12、IL-18，Foxp3基因表达情况性比较，A组和B组的血清IL-12、IL-18较C组和D组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。A组和B组Foxp3基因表达水平也明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

三、不同HBV复制活跃程度患者IL-12、IL-18水平的比较

A组和B组DNA≥105/mL患者的IL-12、IL-18水平明显高于DNA＜105/mL的患者，差异均有统计学意义 （P＜0.05），见表 3。

讨 论

近年来，随着人们生活水平的提高，乙型肝炎已成为现今我国最常见的传染病之一，往往在中青年多发，由于其具有传染性，这给患者带来沉重的心理负担[9]。乙肝病毒为非细胞毒性DNA病毒，其本身无细胞毒效应[10]。有研究发现，乙型肝炎的发生与免疫系统的失调密切相关，乙型肝炎病毒促使免疫系统产生毒性细胞，并且促进细胞因子的释放，损伤肝脏的同时，也加重了炎性反应，进一步促进患者的肝脏损害，导致肝纤维化的发生[11]。Foxp3基因到目前为止其具体的调控机理并不是十分清楚[12]。本实验研究对Foxp3基因表达进行统计，发现随着病毒复制的增高，该基因表达也升高，然而也可能存在一定的个体差异，因此，对结果产生了一定的影响[13]。

表2 四组血清IL-12、IL-18及Foxp3基因表达水平比较 （x± s，pg/mL）

表3 不同HBV复制活跃程度患者的IL-12、IL-18水平比较 （x± s，pg/mL）

我们的研究结果发现，慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化患者的病毒活跃程度高，患者的肝功能明显升高，这与相关研究结果相一致，提示乙肝病毒复制造成肝功能损害。有研究发现，乙型肝炎患者的肝功能ALT、AST成倍增高，且随着病毒的复制肝功能持续升高[14]。同时有研究表明，肝功能持续升高的患者肝脏损害较大，患者较易发生肝脏纤维化，丧失肝脏功能[15]。

本研究结果显示，乙型肝炎患者的血清IL-12、IL-18明显升高，提示乙型肝炎患者HBV复制活跃程度与血清IL-12、IL-18的变化密切相关。有研究发现，在乙型肝炎的发病过程中，以及最后转化为肝硬化，甚至诱发肝癌，HBV-DNA复制起着主导作用[16]。且有研究显示，乙肝患者的病毒高速复制使免疫系统失衡，从而导致体液和细胞免疫反应的发生，免疫系统在抑制病毒复制的同时，也对肝细胞进行攻击破坏，从而诱发了炎症反应，这也形成了恶性循环，从而加重肝脏的损害，不利于患者的预后[17]。研究发现，乙型肝炎的病毒复制作用于细胞内的抗原递呈细胞，促进IL-12、IL-18的分泌增多[18]。IL-12同IL-18的作用相似，同时IL-18能促进提高IL-12的分泌，其二者共同作用NK细胞，改善机体免疫系统的功能，二者协同起到抵抗乙型肝炎病毒的作用，因而，在乙型肝炎患者的病毒复制期血中的IL-12、IL-18显著升高[19]。

乙型肝炎患者的Foxp3基因表达明显升高，说明在乙型肝炎患者中其发生了高表达。有研究发现，Foxp3基因能够促进Treg细胞发育，并使其发挥功能，也具有调节Treg转化和表达的作用，在淋巴细胞中常发生高表达。然而，有学者认为，乙型肝炎病毒复制患者的Foxp3基因表达无显著改变[20]。但有研究发现，其可能是Treg细胞一个特异性的标志，能够在体外抑制T细胞的免疫应答。调节性T细胞通过直接作用，具有免疫抑制功能，能够起到抑制T细胞的活化和增殖的作用，因此，在乙型肝炎患者病毒复制时该基因的表达显著升高，从而抑制T细胞的活性。

本实验通过对137例乙型肝炎患者，67例HBV携带者以及343例健康体检者的血HBV-DNA复制，IL-12、IL-18表达水平以及Foxp3基因表达情况进行分析，证实了在乙型肝炎复制期的IL-12、IL-18表达水平以及Foxp3基因表达明显升高，说明病毒的复制与IL-12、IL-18及Foxp3基因表达有一定的相关性。因此，早期的检测IL-12、IL-18及Foxp3表示水平有助于判断乙肝病毒的复制情况，判断预后，在乙型肝炎的治疗中有着重要的意义。在下一步研究中，我们将对T淋巴CT其他组群进行研究，为本实验做出进一步论证和分析。