KRJ自动粪便检验仪在消化道出血及寄生虫感染检测中的应用

朱丹萍,陈建芸,陈清兰,李林海,孙朝晖

(广州军区广州总医院检验科，广州 510010)

寄生虫感染人体时与某些疾病的临床表现相似,易误诊。例如，肝吸虫感染时，有头晕、腹痛、发热、皮疹等临床表现，易误诊为肝炎、伤寒、肠炎等；钩虫感染时，有贫血、营养不良、胃肠道功能失调症状，严重者有发育障碍及心功能不全表现，容易误诊[1-2]。所以若能检测出寄生虫或虫卵，对于患者的诊断与治疗非常重要。

消化道肿瘤常伴随消化道出血症状。粪便潜血(血红蛋白和转铁蛋白)检测是现代医学分析肠胃疾病的辅助检查指标之一，对于肠胃疾病的诊断具有不可替代的作用[3]。潜血指标不仅可用于检测消化道溃疡、结肠息肉、胃黏膜损伤、肠结核，也可作为结直肠癌、胃癌等消化道肿瘤的筛查指标[4]。目前，大部分临床的粪便常规检测采用自动粪便检验仪和传统手工法。科瑞杰(KRJ)自动粪便检验仪相对于传统手工法来说，能对粪便标本进行标准化的处理，并且能完成高清的显微成像和摄影。因此，KRJ自动粪便检验仪理论上对粪便常规检测指标的检测优于传统手工法，然而目前关于此方面的报道比较少。本研究通过对KRJ自动粪便检验仪和传统手工法的比较，证实KRJ自动粪便检验仪在粪便寄生虫或虫卵检测中具有明显优势，但与传统手工法比较，在消化道出血的检测上并无差别。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2016年7月至2017年3月于本院就诊的700例患者(男478例，女222例，年龄2～95岁)的粪便标本，这些标本外观上有特异性表现(稀便、烂便、褐色便、血便等)。

1.2仪器与试剂 KRJ自动操作粪便检验仪，包括仪器自配的粪便稀释试剂(主要成分为氯化钠、生物染色剂、细胞稳定剂和防腐剂)、玻片板、清洗液；显微镜为改良的奥林巴斯CX22正置显微镜(该显微镜采用无限远光学系统，实现高清图像呈现模式)，同时配备了高清电荷耦合器件(CCD)摄像头和彩色高分辨率发光二极管(LED)液晶显示屏。血红蛋白试剂盒(胶体金法)由武汉康珠生物技术有限公司生产，转铁蛋白试剂盒(胶体金法)由郑州方欣生物科技有限责任公司生产。传统手工法实验用反应杯为0.5 mL普通日立杯，显微镜为奥林巴斯CH30显微镜，粪便稀释液为本院自产的生理盐水，血红蛋白(胶体金法)试剂盒以及转铁蛋白(胶体金法)试剂盒均由万华普曼生物工程有限公司生产。

1.3方法 KRJ自动粪便检验仪：检验人员按照操作说明书操作仪器，粪便标本经过仪器快速搅拌后涂在一张玻片上，再由检验人员操作仪器显微镜镜检，而血红蛋白和转铁蛋白的胶体金法检测由该仪器自动完成并摄影。传统手工法：同一检验人员根据《全国临床检验操作规程(第4版)》，在洁净的载玻片中央加一滴生理盐水，用竹签挑取绿豆大小的粪便，在生理盐水中调匀涂开，涂片厚度以透过玻片可隐约辨认书上字迹为宜，盖上盖玻片镜检。先在低倍镜下按顺序查找，再换用高倍镜观察细微结构。检测血红蛋白和转铁蛋白时，根据试剂盒的说明书操作。

1.4统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

在700例粪便标本中，采用KRJ自动粪便检验仪检测出21例寄生虫或虫卵阳性(肝吸虫卵18例、钩蚴1例、钩虫卵1例和绦虫卵1例)，检出率为3.00%;采用传统手工法只检测出13例(肝吸虫卵10例、钩蚴1例、钩虫卵1例和绦虫卵1例)，检出率为2.57%。KRJ自动粪便检验仪比传统手工法多检测出8例，且这8例通过对拍摄的图片进行再次确认为真阳性。采用KRJ自动粪便检验仪检测的阳性率高于传统手工法，差异有统计学意义(P=0.008)。在本次试验中，KRJ自动粪便检验仪和传统手工法中均可观察到的寄生虫或虫卵(包括肝吸虫卵、钩蚴、钩虫卵和绦虫卵)，检出种类上差异无统计学意义(P<0.05)。

另外在700例粪便标本中，采用KRJ自动粪便检验仪检出115例血红蛋白阳性和97例转铁蛋白(检出率分别为16.43%和13.86%)；而采用传统手工法检出113例血红蛋白阳性和100例转铁蛋白阳性(检出率分别为16.14%和14.29%)。两种方法检测血红蛋白和转铁蛋白的阳性率相近，差异均无统计学意义(P=0.791、0.508)。见表1。

表1 KRJ自动粪便检测仪与传统手工法检测结果对比(n)

3 讨 论

3.1KRJ自动粪便检验仪与传统手工法对粪便中寄生虫或虫卵检测的比较 粪便涂片可以见到蛔虫卵、鞭虫卵、钩虫卵、蛲虫卵、血吸虫卵、肺吸虫卵、阿米巴滋养体和隐孢子虫等。寄生虫感染消化道，临床症状常不明确，有时候有合并感染的现象；也有在远离寄生部位的组织出现病变的现象，例如BALOCH等[5]曾报道过有关钩虫病相关的反应性脊柱关节炎。寄生虫病原体的检出是寄生虫感染的确诊依据，提高对大便虫卵的检测能力对于临床诊断寄生虫相关疾病至关重要。在本研究中，检出的寄生虫或虫卵有肝吸虫卵、钩虫卵、钩蚴、绦虫卵等，其中最多的是肝吸虫。在寄生虫感染中，肝吸虫阳性率最高，主要原因可能是广东本地人有食用鱼生的习惯，而淡水鱼是肝吸虫的第二中间宿主。

本研究还发现，传统手工法漏检率明显高于KRJ自动粪便检验仪，其主要原因有：(1)KRJ自动粪便检验仪对粪便的质量和数量要求更严格，半自动粪便的分析前处理系统通过对标本的自动定量稀释、自动混匀、自动灌注计数池，使实验室对于粪便标本的处理基本做到了标准化，大大减少了人为因素的误差。(2)显微拍摄技术的使用可以直接影响诊断结果[6]。KRJ自动粪便检验仪采用的显微镜为改良的奥林巴斯CX22正置显微镜(该显微镜采用UIS光学系统，实现高清图像呈现模式)，能够使成像更加清晰，便于观察。数码显微镜摄影把肉眼观察到的图像拍摄下来，在电脑上对图片进行再放大(可以放大到实际的400～600倍)，从而使检验人员更加清楚地辨别虫卵，给临床提供最直接的依据。同时为未来建立了基于特征值融合方法的寄生虫虫卵分类器算法及相应流程的建立打下基础[7]。(3)部分的检验人员存在对手工处理粪便标本为难的情绪，而机器能够在密闭的空间内自动处理标本，从而有效提高了检验人员的工作效率和检测的准确率。在本研究中，自动粪便检验仪和传统手工法都发现了相同种类的寄生虫或虫卵，而没有发现其他类的寄生虫，可能是由于实验的标本不够多，未能发现更多的种类。在本研究中对于同一标本采取涂一张片来观察研究，比较的只是一张片的结果，并没有按照临床检验要求涂取3张片观察。若能多次涂片镜检，理论上可以减少漏检率，这一点将在未来的研究中进一步完善。直接镜检法能够对所有种类的寄生虫卵进行检查，是临床上比较常见的寄生虫或虫卵的检测方法。但是此种方法的漏检率较高，因此对于有怀疑的标本应该采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀法、静置沉淀集卵法等来提高阳性率[8]。

3.2KRJ自动粪便检验仪和手工法对粪便中血红蛋白和转铁蛋白检测的比较 粪便隐血的检测作为一个早期筛查联合指标，是消化道出血、消化道肿瘤，特别是结直肠癌诊断的有用依据[9]。用科学的方法进行大便隐血的常规测定是必要的。血红蛋白是消化道出血最直接的检测项目；转铁蛋白是一种比血红蛋白稳定的血浆物质。因此，联合检测转铁蛋白和血红蛋白是判断消化道出血的良好指标。在本研究中，自动粪便检验仪和传统手工法的检测结果相近，差异均无统计学意义(P=0.791、0.508)。这可能是实验标本量不够，没有得出更具体的实验结果；也有可能是由于单克隆抗体法本身是灵敏度较高的检测方法[10]，所以二者的检验结果差异不大。KRJ自动粪便检验仪对于检测的标准化以及在节约人力、物力方面的作用远远大于手工法。但胶体金法本身存在方法学的缺陷，它的检测范围为0.2～2 000.0 μg/mL，小于或者大于此范围都无法检测，因此对于临床上有可疑的标本应该进行稀释法或者与其他的检测方法(例如：改良的匹拉米洞法)结合[11]。

本研究中，可以得出KRJ自动粪便检验仪对粪便寄生虫或虫卵的检出率高于手工法，而两种方法对粪便中血红蛋白和转铁蛋白的检测无明显差别。因此，自动粪便检验仪可以应用于临床试验，不仅可以提高工作人员的工作效率，而且可以提高检测的准确性。在一定程度上，自动粪便检验仪可以代替传统手工法。粪便常规项目还包括镜像白细胞、红细胞等，基于本研究的标本数量有限，也许不能完全反映出二者更细微的差异，有待更多的检验人员进一步研究。