ACE基因多态性人群分布及其在原发性高血压中的高表达研究

刘龙梅 周双艳 杨泽华 赵克斌

作者单位：030024 山西太原，山西省心血管病医院实验室（刘龙梅、周双艳）

030003 山西太原，山西医科大学第六医院检验科（杨泽华）

030001 山西太原，山西医科大学第一医院检验科（赵克斌）

高血压是危害人类健康最主要的疾病之一［1］，相关研究显示，截至2010年，中国的高血压患者数量达2亿［2］，全国约1/4成年人为高血压患者，每年因血压升高导致过早死亡的人数高达300万，占我国死亡人数的51%［3］。血管紧张素Ⅰ转换酶（angiotensin Ⅰ converting enzyme，ACE）为内皮细胞的外分泌酶，是构成血管内皮细胞的膜性糖蛋白，在缓激肽的分解代谢及血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）的产生过程中起重要作用。ACE基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）导致不同ACE基因型个体的肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）对目的器官的作用不同，对高血压的发生、发展和治疗的反应也有差异。本研究采用Tap-man探针法检测原发性高血压患者及健康体检者的ACE基因位点，旨在了解ACE的SNPs与原发性高血压的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象与分组 选择2017年11月—2018年5月本院收治的50例原发性高血压患者作为原发性高血压组，根据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）诊断标准，收缩压≥140 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），舒张压≥95 mmHg，空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）＜6.1 mmol/L；排除心肌梗死、心肌病、继发性高血压及肾功能障碍。另选择同期体检的50例健康体检者作为健康对照组，根据WHO诊断标准，收缩压＜140 mmHg，舒张压＜90 mmHg且家族中的一级亲属均无原发性高血压病史、糖尿病、心脑血管系统疾病。

1.2 仪器与试剂 所用仪器为美国Applied Bio systems 7500聚合酶链式反应仪，德国Eppendorf Centrifuge 5430离心机；基因组DNA提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.3 研究方法

1.3.1 基因组DNA的提取 按照试剂盒说明书提取乙二胺四乙酸（eathylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝全血的DNA，于-20 ℃保存。

1.3.2 寡核苷酸引物序列 聚合酶链反应（polymerase chain reation，PCR）引物序列［4］如下：引物 1为5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'，引物 2 为5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。

1.4 统计学分析 应用SPSS 16.0统计软件处理数据，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间频数比较采用χ2检验。 P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 原发性高血压组男性23例，女性27例；年龄37～72岁，平均（52.1±5.4）岁；健康对照组男性25例，女性25例；年龄40～69岁，平均（52.1±5.4）岁。两组的性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.2 两组的基因型频率与等位基因频率分布 健康对照组的基因型以I I型居多，而原发性高血压组以DD型居多。原发性高血压组患者的DD基因型频率、D等位基因频率均明显高于健康对照组（χ2＝5.09，χ2＝2.56，均 P＜0.05）。见表 1。

表1 ACE基因型与等位基因频率分布

3 讨论

ACE基因插入/缺失（insertion/deletion，I/D）多态性由第16位内含子序列中一段ALU序列的插入或缺失形成。相关研究表明，ACE基因多态性与血清中ACE的浓度密切相关，进一步影响了患者的血压［4-5］。ACE 基因存在 I/D 多态性，O'Toole等［6］研究表明，ACE基因在该位点的SNPs与降压效果有关，DD基因型表现的降压效应比ID、I I基因型更敏感。唐晓鸿等［7］研究表明，不同ACE基因型的患者治疗前后ACE表达水平不同，DD基因型组ACE水平明显高于ID和I I基因型组，ID基因型组ACE水平明显高于I I基因型组。

本研究结果显示，健康对照组基因型I I型较多，原发性高血压组患者多为DD型，且DD型频率和D等位基因频率高于健康对照组，与文献［6-8］的报道一致。其中D等位基因使血管的ACE水平增加，引起血中AngⅡ活性增加，AngⅡ可使阻力血管和容量血管收缩，灭活缓激肽，升高血压。本研究结果也表明，原发性高血压患者相对于健康体检者的D等位基因呈高表达。另外，周述旺等［9］发现，继发于原发性高血压的脑梗死也与DD基因型有关。

原发性高血压为多基因与多环境因素共同参与的疾病，一般认为遗传因素作用占40%。目前，有关原发性高血压基因的研究不断深入，因本研究标本收集不充足，实验设计存在局限性，还需联合多因素扩大样本量做进一步研究。