饲料中霉菌毒素的检测及控制措施

李雅丽

摘要：霉菌毒素具有很多种类，并在自然界中广泛分布，往往会污染饲料。当霉菌污染饲料后就会导致其含有大量的霉菌毒素，从而能够导致畜禽发生中毒死亡，或者导致畜禽的免疫机能降低，长时间处于亚健康状态，生产性能下降，引起免疫失败，并经常发病，还可经由肉、蛋、奶等食物链危害人类健康，应注意检测。

关键词：饲料；霉菌毒素；肉眼观测；显微镜检测；酶联免疫吸附法；荧光检测法；薄层层析法

中图分类号：S816

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）06-0052-01

1 霉菌毒素种类

饲料、油籽、谷物以及加工的粮食容易污染霉菌，特别是在温度超过25℃，相对湿度达到80%以上时，通风较差以及阴雨季节，更容易污染。在饲料原料或者饲料中常见的霉菌主要是曲霉菌、镰刀菌和青霉菌。这些霉菌通常可产生黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、单端孢霉烯（T- 2毒素）、呕吐霉素、腐马菌素、串珠镰刀菌素等。这些霉菌及其产生的毒素往往会导致饲料中的常用原料被污染，如曲霉菌分泌的黄曲霉毒素Bl（ AFBl）、黄曲霉毒素B2（ AFBl）、黄曲霉毒素Gl（ AFGl）以及黄曲霉毒素G2（ AFG2），是导致大部分数动物发生霉菌毒素中毒的主要原因；青霉菌属中的多个菌种分泌的赭曲霉毒素，对家禽具有十分强的毒力，且往往与黄曲霉毒素一起污染饲料。

2 常用检测方法

肉眼观测。在畜禽饲养过程中，如果出现减少采食，饲料结块谷物和饲料发热，颜色变暗，以及散发出较小异味等情况，就可怀疑饲料发生霉变。饲料及其污染霉菌的菌丝体能够纵横交织，编织成菌丝蛛网状物，这种结构导致饲料形成结块。在肉眼观察发现这些菌丝网状物之前，菌丝体就已经在饲料中大量生长繁殖，由此说明其中已经含有霉菌毒素。因此判断饲料发生霉变一种最简易实用的方法就是饲料存在结块。

显微镜检测。不同霉菌菌落会形成的特有形态，并具有不同的生物学特征，通过光学显微镜观察能够进一步确认。现列举几种常見的霉菌菌落的特征：曲霉属菌落可呈多种颜色，表面通常呈绒毛状，开始时呈灰白色或者白色，但形成孢子后就会呈现不同颜色，通常不同菌种有所不同；青霉属菌落通常呈灰绿色，且菌落呈四种不同形态，即束状、绒状、绳状、絮状等，部分菌落会存在放射性皱褶，能够形成同心轮纹，部分在基质表面存在渗出液，且在显微镜下能够看到特殊的帚状体结构；镰刀菌属菌落通常呈白色绒毛状，可分泌可溶性色素，能够形成两种类型的分生孢子，在显微镜下可见小型分生孢子主要呈圆形、柱形、卵形以及梨形等，而大型分生孢子通常都呈镰刀形。

酶联免疫吸附法（ ELISA）。该法是根据抗原抗体反应原理，先在酶标板上加入已知抗原，再加入酶标记抗体以及样品提取液，完全混合，经过充分反应再加入去离子水将多余的抗体洗去，接着加入酶的底物就会形成有色物质，然后加入终止液来终止反应，之后即可使用酶标仪对酶底物的降解量进行测定，并根据标准曲线计算出样品中的抗原量。例如，常用ELISA法检测黄曲霉毒素Bl、烟曲霉毒素。该法能够对样品进行净化处理，能够快速检测，操作简单，费用低，在对大批量样品进行快速筛选时使用。

荧光检测法（FLD）。该法一般同免疫亲和柱配合应用，也是美国AOAC规定的标准检测方法，我国国标（GB/T18979-2003）也使用该法检测黄曲霉毒素的含量。FLD方法是先对样品用甲醇或水提取，接着进行过滤稀释，之后再使用免疫亲和柱层析（存在黄曲霉毒素特异抗体）进行净化，然后使用超纯水将杂质除去，同时洗去甲醇，最后再添加溴溶液，洐生后使用荧光光度计进行测定。一般来说，通常使用该法来检测玉米中赤霉烯酮的含量。该法操作快捷、费用较低，不需要使用霉菌毒素的标准品，避免伤害工作人员，一般是快速筛选霉菌毒素使用的方法。

薄层层析法（TLC）。该法是测定饲料以及食品中霉菌毒素含量的一种国际规定的标准方法，其主要原理是对不同的样品使用相同的提取溶剂对其中所含的霉菌毒素进行提取，接着使用柱层析进行纯化，再在薄层板上进行展开分离，最后根据不同霉菌毒素会产生特有的荧光，再结合荧光斑点大小以及强弱同标准进行比较，由此确定霉菌毒素的具体含量。该法使用设备比较简单，且容易普及推广，因此已经在国内外普遍应用，但该方法需要对样品进行比较复杂的前处理，且提取和净化效果相对较差，特别是提取液中如果存在较多杂质，就会影响其在展开时的荧光斑点强度，尽管双向展开能够避免杂质干扰，但会导致操作步骤复杂，所需时间延长。

3 控制措施

确保饲料、垫料、环境以及用具等干燥、清洁，避免饲料、饲草发生霉变。饲料的贮存温度必须在25℃以下，同时相对湿度要小于85%，避免饲料受潮、发热。饲料要定期进行检查，如果发生霉变要立即挑除，避免霉菌蔓延。目前，饲料加工行业中防止饲料发生霉变的一种比较普遍的方式是在饲料中加人防霉剂，这是一种比较直接且有效地方法。现在一般选择使用的防霉制剂主要是丙酸、乙酸、苯甲酸、山梨酸及其盐类，特别是在饲料加工处理中通常使用丙酸和丙酸盐类，一般每1000 kg饲料加入1—2 kg。