鸡新城疫、传染性支气管炎抗体消长规律研究

董 娜

（沈阳市农业综合行政执法支队，辽宁 沈阳 110031）

鸡新城疫和传染性支气管炎是严重危害养禽业发展的重要疫病，每年给我国养禽业造成巨大的经济损失。为准确掌握疫苗免疫效果，制定合理的免疫程序，笔者通过动态监测鸡新城疫、传染性支气管炎血清抗体水平，测定抗体消长规律，确定抗体保护的临界值与最佳免疫时机，为制定科学的免疫程序提供了依据。

1 材料

1.1 试验鸡群

1日龄海兰褐蛋鸡。

1.2 器材

96孔微量凝集反应板、微量移液器、滴头、微型振荡器、台式离心机、一次性注射器、灭菌离心管。

1.3 抗原和疫苗

新城疫阳性血清，购自中国兽医药品监察所。血凝试验抗原，购自中国兽医药品监察所。

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）M41株疫苗，购自中国兽医药品监察所。D弱毒克隆苗Clone30、新城疫油苗，购自中国兽医药品监察所。

1.4 溶液的配制

1%鸡红细胞悬液制备。采集至少3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积的阿氏液混合，用pH7.2、0.01摩尔/升PBS液洗涤3次（若上清液不澄清，需要继续洗涤），每次均以2000转/分钟离心10分钟，洗涤后用PBS液配成体积分数为1%的红细胞悬液，4℃保存备用。

阿氏液制备(制作方法：柠檬酸钠8克，柠檬酸0.55克，葡萄糖20.5克，NaCL4.2克，加水至1000毫升，其pH值6.1)。

2 方法

2.1 试验设计

海兰褐蛋鸡90只，随机分成三组，分别为：A（鸡新城疫抗体消长规律测定）组、B（鸡传染性支气管炎抗体消长规律测定）组和C（对照）组。每组30只。

A组在7日龄进行新城疫Clone30点眼，每只1.2头份；21日龄ND油苗颈部皮下注射0.3 mL，同时Clone30点眼；42日龄ND油苗颈部皮下注射0.5毫升同时clone30点眼。B组在1日龄进行传染性支气管炎H120株滴鼻点眼；21日龄M41株灭活疫苗肌肉注射。C（对照）组不免疫。在第二次免疫当天和以后的第1至10周分别静脉采血。

2.2 采血方法

用一次性注射器翅静脉采血2～3毫升，室温条件下静置使血清自然析出，然后用一次性 2毫升 离心管收集血清，做好标记后放入 4℃冰箱中保存。

2.3 检测方法

2.3.1 传染性支气管炎抗原的制备与冻干 以l04/0.1ml气管轮纤毛半数停止摆动剂量(OCD50) 的M41株经尿囊腔接种10日龄非免疫鸡胚，37℃孵化30小时， 4℃过夜，无菌收取尿囊液。经3000转/分钟离心30分钟澄清的尿液，再经3000转/分钟离心1小时沉淀病毒。用稀释液悬浮沉淀至原尿液量的1/100。加入新鲜的磷酸脂酶C，使其终浓度为5单位/毫升， 充分混匀。37℃作用2小时，间隔10分钟振荡一次，取出后置4℃48小时。然后加入等容积10%蔗糖脱脂乳做保护剂，分装、冻干，于-25℃保存。

2.3.2 采用血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验进行抗体检测先通过血凝试验测定标准抗原的效价，然后根据血凝抑制试验的方法及操作规范对血清样品进行检测。能够完全抑制4单位抗原的血清最高稀释倍数为HI滴度，并按常规方法进行阴性和阳性对照。

3 结果与分析

3.1 雏鸡新城疫免疫后抗体消长规律

雏鸡新城疫免疫后在不同免疫次数和免疫周数的平均抗体效价见表1。

3.2 雏鸡传染性支气管炎免疫后抗体消长规律

雏鸡传染性支气管炎免疫后在不同免疫次数和免疫周数的平

表2 传染性支气管炎疫苗免疫鸡抗体消长规律

结果表明，鸡新城疫初免时基础抗体效价为3.7 log2，免疫后1周达到保护线以上（5.4 log2），二周达6.8 log2，此时进行二免，二免后第一周抗体水平略有下降，第二周开始上升，第三周进行三免，三免后第四周抗体水平升至高峰的10.2 log2，此后逐渐下降。均抗体效价见表2。

结果表明，传染性支气管炎M41株疫苗二次免疫后抗体水平持续30周还保持在7log2以上，证明其保护期至少在二免后30周以上。

4 讨论

雏鸡首次新城疫免疫后抗体水平不会很高，免疫后7～10天出现应激反应，2周免疫抗体达到高峰，此后抗体开始下降。本实验在一免后2周抗体达到最大值6.8 log2，此时进行二免，使抗体水平一直保持在保护值以上。二免后第一周抗体为6.1 log2，由于活疫苗抗体中和作用，抗体略有下降，第二周抗体开始升高达7.3 log2，第三周达到8.5 log2，此时三免。至三免后第17周降至保护线的5.1 log2，此时应进行加强免疫。

雏鸡传染性支气管炎免疫抗体平均水平在首免后2周达到保护值5.3 log2，此时进行加强免疫。二免后抗体持续升高，到第7周达到最大值，此后逐渐回落，但到30周时仍保持较高水平，说明传染性支气管炎M41株疫苗能提供较好的免疫保护。