芜湖产地牡丹皮的质量分析

余慧冬，秦亚东*，周娟娟

(1.安徽中医药高等专科学校药学系，安徽 芜湖 241000；2.芜湖市中医医院制剂室，安徽 芜湖 241002)

牡丹皮为毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr．)的干燥根皮，苦、辛，微寒。归心、肝、肾经，具清热凉血，活血化瘀之功效[1]。现代药理研究证实牡丹皮在抗肿瘤、抗菌、抗心律失常、抗动脉粥样硬化及增强免疫力等方面具有确切的作用[2-3]，其主要有效成分丹皮酚是研究的热点化合物[4-5]。

牡丹皮作为常用大宗药材，具有极高的药用价值和悠久的用药历史。安徽是牡丹皮的主产区之一，尤其是安徽铜陵产的牡丹皮具有较高盛誉，称为“凤丹”，为安徽著名道地药材[6]。近些年来，随着牡丹皮临床使用量的增加，野生牡丹日益减少，现皖南许多地区大面积栽培牡丹。由于中药材质量受地理环境状况的影响，因而不同产地牡丹皮质量可能存在质量差异。通过查阅文献发现对安徽芜湖产地牡丹皮质量研究报道较少，为牡丹皮药材资源合理应用及客观评价，根据2015版《中国药典》第一部[1]及相关文献[7-8]，对牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚进行含量测定，以期对安徽芜湖产地牡丹皮的质量控制、合理利用牡丹皮药材资源提供参考和借鉴。

1 材料与方法

1.1 供试材料

Agilent Technologies 1100(美国安捷伦公司，二元泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器)；色谱柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm，5μm)；DV215CD型 Discovery电子天平(美国OHAUS公司)；U-16K型台式离心机(德国SIGMA公司)；KQ-250B型超声波清洁器(昆山市超声仪器有限公司)。

丹皮酚对照品(中国食品药品检定研究院,批号: 110708-201506，纯度99.20%，峰面积归一化法)。甲醇(色谱纯，美国TEDIA，15075021)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA，15055017)；水(娃哈哈纯净水，杭州哇哈哈集团有限公司)；磷酸(色谱纯，上海展云化工有限公司)。牡丹皮采集于安徽芜湖南陵县、丫山、弋江区等地，共9个批次，经安徽中药资源研究汪荣斌副教授鉴定为毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr．)的干燥根皮，样品信息见表1。

表1 牡丹皮样品信息

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相为溶剂A：0.1%磷酸乙腈，溶剂B：0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱，0→10min，溶剂A由10%→25%，10→25min，溶剂A由25%→38%；；流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长274nm，进样量10μL。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品5.2mg,用甲醇定容于10mL棕色容量瓶中, 摇匀，配制成浓度为0.52mg/mL的丹皮酚对照品溶液。

1.2.2.2 供试品溶液的制备：取经干燥至恒重的牡丹皮药材粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定后置于具塞锥形瓶中，精密加入50mL甲醇，精密称定质量，超声处理30 min，静置，放冷，再次称定质量，用甲醇补足损失重量，离心处理(5000r/min，10min)，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后，备用。

2 结果与分析

2.1 系统适用性及专属性试验

按“1.2.1”色谱条件及“1.2.2”溶液制备条件，分别对丹皮酚对照品溶液、供试品溶液进行进样，记录色谱图[3,7]。从图2中可见，丹皮酚在25min以内完成分离，分离度大于1.5，理论塔板数大于5000。对照品及供试品溶液代表性色谱图见图1、图2所示。

图1 丹皮酚对照品在274nm下HPLC图(1：丹皮酚)

图2 牡丹皮样品在274nm下HPLC图(1：丹皮酚)

2.2 线性关系考察

精密吸取“1.2.2.1”项下制备的对照品适量，以甲醇为溶剂进行梯度稀释2、4、8、16、32倍，摇匀，过0.22μm微孔滤膜过滤后按上述色谱条件进样，记录色谱图及丹皮酚色谱峰峰面积。以峰面积值 (Y)为纵坐标，进样浓度 (X，mg/mL)为横坐标，进行线性回归，并绘制标准曲线。线性回归曲线见图3，回归方程Y=3870.52X+17.5，线性系数R=0.9996，丹皮酚在0.0325～0.52μg之间线性关系良好。

图3 丹皮酚对照品标准曲线

2.3 精密度试验

取“1.2.2.1”项下制备的对照品溶液，按“1.2.1”色谱条件，连续进样6次, 记录丹皮酚色谱峰峰面积， RSD为0.57%。结果表明仪器精密度符合要求。

2.4 稳定性试验

取“1.2.2.2”项下制备的供试品溶液，按“1.2.1”色谱条件，分别于0、3、6、9、12 h 进样,记录丹皮酚色谱峰峰面积，RSD为0.64%。结果表明丹皮酚供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.5 重复性试验

取牡丹皮药材粉末约0.5g,共6份， 按“1.2.2.2”项下方法进行样品处理, 按“1.2.1”项下色谱条件进行进样，记录丹皮酚色谱峰峰面积，RSD为1.62%。结果表明重复性良好。

2.6 加样回收率试验

精密称取牡丹皮粉末5份[3,7],每份约0.5g，按“1.2.2.2”供试品溶液制备项下方法进行制备，然后加入“1.2.2.1”项下制备的丹皮酚对照品溶液适量，置50mL棕色具塞锥形瓶中 ,加甲醇45 mL，超声处理30min,静置，放冷后以甲醇定容至刻度，摇匀,过0.22μm滤膜，按“1.2.1”项下色谱条件进行测定，并计算含量,结果丹皮酚平均回收率为102.51%，RSD为1.26%，结果表明对照品回收率良好。

2.7 样品含量测定

按照上述HPLC法测定方法测定安徽芜湖不同产地牡丹皮样品[3,7]，结果见表2。

表2 牡丹皮中有效成分丹皮酚含量测定结果

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择：参考2015版《中国药典》(一部)及文献报道，分别尝试对水、甲醇、乙醇、50%甲醇、50乙醇为溶剂，以丹皮酚含量为指标，经过试验，以甲醇为溶剂对牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚进行提取，含量最高，故选择以甲醇为溶剂。

3.2 提取方式的选择：分别采用超声提取法、回流提取法、渗漉法、浸渍法进行对比研究，以丹皮酚含量为指标，发现常规提取方式对丹皮酚含量并无显著影响，考虑到提取的便捷性及降低能源损耗，选用了超声提取方式。

3.3 本次试验对安徽芜湖不同产地野生牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚的含量进行测定，且丹皮酚也是2015版《中国药典》(一部)所要求进行含量测定的成分。从测定结果看，安徽芜湖不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量均大于《中国药典》的规定含量(不少于1.2%)，且丹皮酚的含量存在一定的差异，这可能与不同自然环境及生态环境等因素存在一定的关系。从丹皮酚含量分析，安徽芜湖地区适合牡丹皮药材的栽培。