574例珠蛋白生成障碍性贫血阳性患者基因突变类型的回顾性分析

张满娥，黄文滨，卢志华，张洪彬

(福建省龙岩市第二医院分子生物实验室 364000)

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是一组遗传性溶血性贫血，α地贫和β地贫是其中的主要类型。地贫多发生于地中海沿岸国家和东南亚各国，国内以长江以南各省(区)，尤以广西、广东、海南三省(区)为甚[1]。福建地处我国东南沿海地带，龙岩市地处福建西部(简称闽西)，据文献[2]报导，地贫在龙岩地区携带率高达24.35%,因此成为闽西最常见、危害最大的遗传病之一。地贫基因突变具有高度的异质性，有明显的地域性或群体特异性[1]。本文通过对2014年7月至2016年12月本院确诊为地贫患者的基因突变类型进行回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2014年7月至2016年12月来本院就诊的1 115例疑为地贫的门诊/住院患者进行地贫基因检测，其中男452例，女663例，年龄14 d至85岁,中位年龄27岁。

1.2仪器与试剂 检测仪器为珠海黑马医学仪器有限公司生产的HEMA9600聚合酶链反应(PCR)扩增仪，杭州博日科技有限公司生产的Tc-s-B Gene Max基因扩增仪，韩国Combi-H12分子杂交仪，上海天能科技有限公司生产的EPS300电泳仪和Tanon-3500全自动数码凝胶图像分析系统。全血DNA快速提取试剂盒由爱思进生物技术(杭州)有限公司提供,基因检测使用深圳亚能生物技术有限公司的诊断试剂盒。

1.3方法

1.3.1标本采集 采用不抑制DNA聚合酶活性的乙二胺四乙酸二钾无菌真空抗凝管采集静脉血2 mL，混匀，贴上患者的唯一标识。标本采集后立即送检，4 ℃保存不超过3 d，未及时检测的标本置-20 ℃保存待测。

1.3.2标本检测 采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)检测常见3种缺失型α地贫基因(--SEA、-α3.7和-α4.2)；采用聚合酶链反应-反向点杂交(PCR-RDB)法检测我国常见的3种非缺失型α地贫基因(分别为WS、QS和CS)和β地贫基因17种突变(41-42M、654M、-28M、17M、71-72M、βEM、-29M、43M、27/28M、14-15M、31M、-32M、-30M、IVS-Ⅰ-1M、IVS-Ⅰ-5M、CAPM、IntM)。如遇罕见基因型则用基因测序等方法进一步确诊。检测步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。

2 结 果

2.1地贫基因携带情况 1 115例进行基因检测的患者中，574例为地贫，阳性率为51.48%。其中α地贫362例，占63.07%；β地贫201例，占35.02%；αβ复合型地贫11例，占1.91%。

2.2α地贫基因型及构成比 362例α地贫中，α缺失348例，占96.1%；α突变14例，占3.9%。共检出12种基因类型，α缺失大部分为--SEA/αα型，占73.76%，其次为-α3.7/αα,占7.73%，再次为-α3.7/--SEA,占7.46%，α突变依次为CS、QS和WS。各基因类型及构成比见表1、图1。

表1 362例α地贫基因型及构成比

2.3β地贫基因突变类型及构成比 201例β地贫中，共检出11种基因型，大部分为β654/β杂合突变型，占47.26%；其次为β41-42/β型，占25.87%。各基因类型及构成比见表2。

图1 α地贫凝胶电泳结果

注：1为阴性对照；2为--SEA/αα；3为-α3.7/--SEA;M为标志物；4为-α3.7/αα；5为-α4.2/--SEA； 6为--SEA/--THAI

表2 201例β地贫基因突变类型及构成比

2.4αβ复合型地贫基因检测 11例携带αβ复合型地贫基因患者中共检出7种基因型。其中最常见的为-α3.7/β654(27.28%)，其次为--SEA/β654(18.18%)及--SEA/βCAP(18.18%)。见表3。

表3 11例αβ复合型地贫基因突变类型及构成比

3 讨 论

α地贫的发病机制是α珠蛋白基因(位于16p13.3)缺失或点突变导致，其中缺失型最常见，我国人群中常见的3种缺失型α地贫为东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4.2)。此外，少数α地贫是由于点突变所导致。本次检出α地贫362例(包括α缺失348例和α突变14例)，最常见的α缺失类型是--SEA/αα(73.76%)，其次是-α3.7/αα(7.73%)，再次是-α3.7/--SEA(7.46%)，这3种缺失型占α地贫阳性对象的88.95%，该统计结果前3位从高到低排序与既往有关龙岩地区的报道基本一致[2]。结果表明本地区α地贫基因型主要以东南亚缺失型(--SEA/αα)杂合子为主，但与之不同的是，本次检出α突变类型14例(3.9%)，依次为CS、QS和WS，与省内厦门地区的结果相似[3]，这可能与研究对象差异有关。由于本院地理位置的关系，到本院就诊的患者大部分来自客家人群。龙岩地处闽粤赣三省交界，西与江西省赣州市交界，南与广东省梅州市毗邻，是客家人的主要祖居地和聚居地之一，现在全市7个县(市、区)中有5个县是客家县，客家人口占全市总人口80%以上，同样以客家人为主的赣州市和梅州市的人群中也有α突变类型CS、QS的检出[4-5]。本研究中α突变类型的检出丰富了龙岩地区地贫的临床资料。本研究中还检出1例罕见--SEA(东南亚型)/--THAI(泰国型)缺失混合型α地贫。如工作中遇到一些基因型与表型不符的结果，提示可能存在罕见未知的基因型需要引起高度重视，否则可能导致基因误诊，延误产前诊断[6]。龙岩地区α地贫基因突变组合多样化，提示了本地区的α地贫基因遗传异质性相对较大。

β地贫的发病机制是β珠蛋白基因(位于11p15.3)多由点突变导致，也有少数大片段缺失型突变。到目前为止，全世界已发现了200多种β珠蛋白基因突变可引起β地贫的发生，在我国已报道有48种，其中我国南方报道有46种[1]。本研究采用PCR-RDB法检测中国人常见的β地贫基因17种突变，共检出11种突变类型。最常见的5种依次为β654/β、β41-42/β、β17/β、β27-28/β、β-28/β，共占β地贫阳性对象的94.51%，这说明龙岩地区β地贫突变类型相对集中，该统计结果前5位从高到低排序与既往有关龙岩地区的报道基本一致[2]。而重庆地区β地贫基因突变主要类型分别是β17/β、β41-42/β和β654/β[7]；广西桂西地区β地贫基因突变占主导地位的是β17/β、β41-42/β[8]，广州、东莞、韶关地区和台山地区β地贫基因突变均以β41-42/β最常见，β654/β次之[9-12]。本研究结果表明龙岩地区β地贫基因突变以β654/β为主(47.26%)，与钟田雨等[4]报道赣州市(40.88%)及吴艳丽[5]报道梅州市(43.8%)相似。赣州市、梅州市和龙岩地区都是以客家人为主,这可能与本地区客家人群独特的遗传背景有关。β654/β有可能起源于客家人群,并随客家人群迁徙而播散[4]。由此可见β地贫具有高度遗传异质性和明显的地域性，在不同地区人群的发病率和类型差别较大。

αβ复合型地贫的临床症状可不明显，但其携带的致病基因传递给后代可造成重症患儿的出现。本研究检出11例患者携带αβ复合型地贫基因中大部分为-α3.7/αα和β654/β复合型，占27.28%，其次为--SEA/αα和β654/β复合型、--SEA/αα和βCAP/β复合型，分别占18.18%。因此，应对αβ复合型地贫携带者的检测给予足够重视，将αβ复合型地贫携带者作为重点防控对象,指导合理婚配,对于降低重型地贫患儿的出生率具有重要的意义。

本研究表明，龙岩地区α地贫以--SEA/αα为主(73.76%)，β地贫以β654/β为主(47.26%)，αβ复合型地贫以-α3.7/αα与β654/β复合型最为常见(27.28%)。本地区α地贫检出率大于β地贫，与文献[2-11]报道相吻合，而北京地区和重庆地区正好相反，以β地贫为主[7,13]。统计本地区地贫基因类型及构成比等流行病学资料，才能制订有效、可行的人群地贫干预计划。地贫是一种难治的，可防、可控的遗传性血液病，不会出现轻型转重型的现象。由于同型地贫基因携带者婚配的下一代有1/4的概率罹患严重溶血性贫血症状的重症地贫，包括重型α地贫(HbBart′s胎儿水肿综合征)和重型β地贫(Cooley贫血)，1/2的概率是地贫携带者，仅1/4的概率是正常基因型，因而构成严重的公共健康问题。由于目前重型地贫的治疗缺乏有效的根治方法，携带者检查及产前基因诊断是唯一阻止重型地贫患儿出生，提高人口素质的有效措施。所以构建地贫群体防控信息系统迫在眉睫。预防地贫发生的第一道防线是对新生儿，以及受教育阶段的初中生、高中生和育龄成人等进行筛查，目的是通过筛查了解自己是否为地贫基因携带者；第二道防线是产前检查和筛查孕早、中期产妇及其配偶，判断是否为有生育高风险的育龄夫妇，进一步做遗传咨询、基因诊断和跟踪随访。做好健康教育、大规模人口筛查地贫基因携带者、婚前检查、孕前检查和产前筛查和遗传咨询，地贫是可预防的。本研究对地贫基因检测资料的总结和分析，丰富了本地区地贫的临床资料，可以为本地区地贫的遗传咨询和制订地贫预防措施提供科学依据，进而指导优生优育，提高人口素质，减轻社会和家庭的负担。