白头翁散超微粉和普通粉中各药材的薄层对比鉴别

李艳玲，匡秀华，刘永录，赵建平，张国祖

(河南牧业经济学院，河南郑州450011)

白头翁散是《中华人民共和国兽药典》2015年版二部中收载的经典方剂，由白头翁、黄连、黄柏和秦皮组成。白头翁可以清热解毒，凉血治痢，为君药；黄连，黄柏，秦皮清热解毒而燥湿，秦皮兼有收涩止痢之功。黄连、黄柏助君药清热解毒、燥湿止痢，共为臣药；秦皮清热燥湿、收涩止痢，为佐药。诸药合用，共奏清热解毒、凉血止痢之功。其功效为清热解毒，凉血止痢。主治：热毒赤痢，湿热痢疾，赤多白少和发热口渴等[1]。在兽医临床上应用非常广泛。可用于禽大肠杆菌病、沙门菌病、霍乱、鸭传染性浆膜炎等，治疗仔猪黄白痢、流行性腹泻，以及病毒性、细菌性腹泻的后期修复，可以配合西药一起使用。另外在马、牛、羊、兔等动物疾病上也多有应用。

超微粉碎技术是指利用机械或流体动力的方法，将物料颗粒粉碎至微米级甚至纳米级微粉的过程。中药超微粉碎技术在20世纪90年代中后期兴起，它在遵循中医药理论的前提下，结合中药物料的特点，采用现代粉体技术，将中药材、中药提取物及中药制剂微粉化，既保留了传统饮片的优点，又具一些特殊的理化性质，如良好的分散性、溶解性、吸附性等。因此它将为中药的现代化生产、应用、开发注入新的活力，将为中药走向国际带来新的动力。

白头翁散经超微粉碎后，可以大大提高药材的吸收利用率，有效减少临床用量，节约药材资源。但目前白头翁散超微粉还没有可行的质量标准，并且经超微粉碎后和原来的散剂相比有没有质的变化，这些都还是未知数。中药经超微粉碎后，由于细胞破壁，本来一些不易溶出的成分由于没有了障碍也可能会溶出，为中药的安全性带来隐患。因此，我们在鉴别白头翁散超微粉中各药材的同时，和白头翁散普通粉的薄层色谱进行了对比研究，以期为将来中药超微粉的进一步发展提供更多的借鉴。同时，用薄层色谱法定性鉴别白头翁散超微粉中的白头翁、黄连、秦皮，为将来其质量标准的制定奠定基础。

1 药材与试剂

药材：白头翁、黄连、黄柏、秦皮，购自河南中医学院第一附属医院，经鉴定是白头翁是毛茛科植物白头翁(Pulsatilla chinensis (Bge.)Regel)的干燥根；黄连是毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch)的干燥根茎；黄柏是芸香科植物黄皮树(Phellodendron chinense Schneid)的干燥树皮；秦皮是木犀科植物苦枥白蜡树(Fraxinus rhynchophylla Hance)的干燥干皮。标准品：白头翁对照药材(批号：121415-200702，中国药品生物制品检定所)；秦皮对照药材(批号：121415-200702，中国药品生物制品检定所)；黄连(三角叶黄连)对照药材(批号：120913-201008，中国药品生物制品检定所)；盐酸小檗碱(含量：86.8%，批号：110713-200208，中国药品生物制品检定所)；试剂：甲醇(色谱纯,郑州派尼化学试剂厂)，盐酸(烟台市双双化工有限公司)，三氯甲烷(天津市风船化学试剂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 白头翁的薄层鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 取80目白头翁散和400目白头翁散超微粉各1.4 g，加甲醇10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材溶液的制备 白头翁对照药材1 g，加甲醇10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。

2.1.3 阴性对照品的制备 按白头翁散超微粉的处方制备不含白头翁的白头翁散超微粉，并称取1 g，按制备供试品溶液的方法制备阴性对照品。

2.1.4 薄层色谱法鉴别 吸取上述4种溶液制备各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，看是否显相同颜色的斑点[2]。见图1。

图1 白头翁鉴别薄层图谱

1: 80目白头翁散； 2: 白头翁对照药材； 3: 400目白头翁
散超微粉； 4: 白头翁阴性样品; 5: 空白溶剂

薄层鉴别结果显示，在和白头翁对照药材相对应的位置，80目和400目白头翁散均出现了清晰的斑点，并且白头翁阴性样品在该位置无斑点，所以该方法可以用来定性鉴别白头翁散中的白头翁。400目和80目的白头翁散相对比，没有出现新的斑点。

2.2 黄连的薄层鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备 称取80目白头翁散和400目白头翁散超微粉各1.3 g，分别加甲醇15 mL，水浴加热回流10 min，过滤，收集滤液。

2.2.2 黄连对照药材溶液的制备 称取黄连对照药材0.215 g，加甲醇10 mL，水浴加热回流10 min，过滤，收集滤液。

2.2.3 小檗碱溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

2.2.4 黄连阴性对照溶液的对照品制备 按白头翁散超微粉的处方制备不含黄连的白头翁散超微粉，并称取1 g，按制备供试品溶液的方法制备阴性对照品。

2.2.5 薄层色谱鉴别 吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂，置氨蒸汽预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。见中插彩版图2。

薄层鉴别结果显示，在和黄连对照药材相对应的位置，80目和400目白头翁散超微粉均出现了清晰的斑点，并且黄连阴性样品在该位置均无斑点。400目和80目的白头翁散相对比，没有出现新的斑点。

2.3 秦皮的薄层鉴别

2.3.1 供试品溶液的制备 称取80目白头翁散和400目白头翁散超微粉各3 g，分别加乙醇10 mL，加热回流10 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3.2 秦皮对照药材溶液的制备 称取秦皮对照药材0.5 g，加乙醇10 mL，水浴加热回流10 min，过滤，收集滤液。

2.3.3 秦皮阴性对照溶液的制备 按白头翁散超微粉的处方制备不含秦皮的白头翁散超微粉，并称取3 g，按制备供试品溶液的方法制备阴性对照品。

2.3.4 薄层色谱鉴别 吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-三氯甲烷-甲苯-甲酸(8∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见中插彩版图3

薄层鉴别结果显示，在和秦皮对照药材相对应的位置，80目和400目白头翁散超微粉均出现了清晰的斑点，并且秦皮阴性样品在该位置无斑点，所以该方法可以用来定性鉴别白头翁散中的秦皮。400目和80目的白头翁散相对比，没有出现新的斑点。

3.讨论

中药材活性成分主要存在于细胞核和细胞质内，活性有效成分只有通过细胞壁释放出来后才能被利用。经超微粉碎后的中药，其中药材的传统性状特征已不复存在，细胞破壁后其显微特征已被完全破坏，性状鉴别、显微鉴别等方法已不能作为鉴定中药超微粉的主要手段,必须寻找更加有效的方法来建立中药超微粉体的质量标准。在对白头翁散超微粉中白头翁、黄连、秦皮进行定性鉴别的同时，我们比较了80目的普通白头翁散和400目的白头翁散在溶出成分上有无差异，所有图谱均显示，400目的白头翁散超微粉和80目相比，并没有出现不同的斑点，说明白头翁散超微粉虽然破壁了，但超微粉碎只是减小了粉末粒径，增加了原有成分的溶出率及溶出量，并没有改变药材原有的成分，所以原则上不会产生毒副作用[3]。

在白头翁的鉴别时，通过查阅大量文献，对称样量、点样量的进行比较优化，并尝试了文献中不同展开剂，筛选出最为合理的展开显色条件，结果发现，展开剂为正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)时，斑点较为清晰，且与杂质斑点的分离度较好。

鉴别黄连的薄层色谱中，在小檗碱的位置白头翁散超微粉样品中仍有斑点，是因为白头翁散中还有黄柏，而黄柏中主要的化学成分也是盐酸小檗碱。所以该方法只能用来定性鉴别白头翁散中的黄连。

本文分别对白头翁散超微粉中的3种药材进行薄层鉴别研究，方法简单快速，可以有效控制白头翁散超微粉的质量。

中药超微粉碎技术是对传统粉碎技术的更新和发展，它既丰富了传统中药炮制技术，又为中药制剂的现代化生产、开发增加了新的形式，已成为中药现代化的关键技术之一 。然而由于该技术历史短，发展快，在基本定义、科学分级、质量标准、评价体系等方面研究尚不够完善，限制了该技术及其制剂的发展和推广。在今后的中药现代化研究中，应加快研究步伐，开展多学科交叉，多种现代技术融合，尽快制定出中药超微粉碎分级质量标准和中药超微粉制剂的评价体系，使中药超微粉体技术在中药领域中的应用日益广泛。