杜德燕,方鹏飞,朱冬梅,邹智坤,严 成,郭健宝
(华派生物工程集团有限公司,四川成都641400)
猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of suline,MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,M.hyopneumonic)引起的一种猪的慢性呼吸道传染病,临床表现为慢性非生产性咳嗽。该病在我国常称为猪喘气病(或气喘病),国外常称为猪地方性流行性肺炎,这种病在世界广泛流行,特别是集约化生产程度高的国家和地区,给全球养猪业带来了巨大的经济损失。猪支原体肺炎造成的经济损失与日体重(daily weight gain,DWG)的降低、死亡率的增加、饲料利用率的下降以及给药治疗导致的成本增加等有关。同时该病也增加了其他呼吸道病原体的易感性,比如多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、化脓隐秘杆菌和猪链球菌等,同时猪肺炎支原体也是猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)的主要病原体。
在猪屠宰场能观察到肺炎是最常见的肺部病变之一,患病率从19%到79%不等,导致这些肺损伤的最主要细菌性呼吸道病原体之一就是猪肺炎支原体,猪肺炎支原体在肺脏具有较高的繁殖力和能够诱导较为严重的炎症过程,无数的猪肺炎支原体攻毒试验证明,在无并发症感染的情况下,猪支原体肺炎的肺炎病变范围主要集中在左右肺的尖、心、膈叶的前三分之一和中间叶,眼观可见有紫红色至灰白色的呈橡皮样的实变结节,从肺脏切面上看,肺实质颜色相对均一。当然如果继发了其他病原菌感染,肺炎病变则较复杂。猪支原体肺炎引起的猪肺炎病变不仅影响着猪的呼吸系统,还影响着平均日体重的增加,有研究报告显示,由猪支原体肺炎引起的肺炎每10%病变区域可以导致体重少增加23~37 g/d,进而影响到每头猪的利润率[1-3]。总之,有相当多的研究显示,肺炎病变影响着体重的增加,为验证两者的关系,本试验将免疫与非免试验猪的肺炎病变和体重之间相关性进行探讨,也为猪肺炎支原体疫苗的合理评价提供参考。
1.1 试验分组 102头14日龄的健康易感仔猪由四川省华派生物制药有限公司定点猪场提供。所有试验猪均为猪呼吸道疾病综合征、猪伪狂犬病、猪瘟静脉血抗原阴性猪,副猪嗜血杆菌、支原体肺炎、传染性胸膜肺炎母源抗体阴性猪,已观察3 d,完全健康。将试验猪随机分为12组,其中10组为免疫组各9头,分别免疫不同厂家的疫苗,另外2组分别为空白对照组和攻毒对照组各6头,各组试验猪严格隔离饲养。
1.2 试验设计 免疫组的试验猪14日龄首免0.5
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烟曲霉在自然界广泛存在,潮湿环境有利于霉菌繁殖,环境中存在大量霉菌孢子,可以通过饲料和空气侵入体内。机体低抗力正常情况下,不会繁殖。企鹅由南极引入温带饲养,饲养环境潮湿,企鹅年龄较大(已饲养17年)导致免疫力低下,所以在肺脏、气囊等处繁殖,出现霉菌病变。
头份,28日龄按相同的方式和剂量进行二免,二免后4周进行攻毒试验,攻毒方法为所有免疫猪和攻毒对照猪均进行气管内接种猪支原体肺炎济南系攻强毒冻干肺组织毒100MID,攻毒后对临床症状进行观察记录,连续25~30 d后剖杀,观察肺部病变。
毒试验猪每天观察2次,每次15 min,监测范围包括总体健康状况、活动情况、食欲和咳嗽等方面。观察记录标记为0(没有咳嗽),1(追赶时轻度咳嗽)、2(休息时轻度咳嗽)、3(追赶时温和咳嗽)、4(休息时温和咳嗽)、5(追赶时严重咳嗽)、6(休息时严重咳嗽),计算每天的累积咳嗽情况和平均咳嗽情况,试验猪分别在免疫前、攻毒前、剖杀前称重。剖杀后用Goodwin氏55分法记分法对肺部病变进行评分,计算肺炎病变减少率。
肺炎病变减少率=(对照猪肺炎几何平均分-免疫猪肺炎几何平均分)/对照猪肺炎几何平均分×100%。
评分和评价标准:评分标准为Goodwin氏55分法记分,依据攻毒后对肺部各肺叶的病变程度,全程由一人进行打分,避免了系统误差。
评分标准:采用济南系强毒对攻毒后各组进行评判时,要求免疫组试验猪的肺炎病变减少率应不低于60%,方能判定为合格。病变减少率越高,表明抵抗强毒的能力越强。
2.1 咳嗽 在96头免疫组和攻毒对照组的试验猪中,只有49头发生了咳嗽,免疫组中,B组有1/9头追赶时有轻度咳嗽,H组有2/9头追赶时有轻度咳嗽,其余免疫组的咳嗽头数和咳嗽指数均较这两组高,而攻毒对照组所有试验猪6/6头均出现咳嗽、气喘、食欲下降等症状,在观察期内出现咳嗽的试验猪中,最早的在攻毒后7 d便可观察到,但也有试验猪在攻毒后25 d才观察到咳嗽等临床症状。各试验组咳嗽症状的平均计分见中插彩版图1。
2.2 体重 从统计数据可以得出,各试验组猪的基础体重均在4 kg左右,但经过免疫和攻毒后,各组差异较显著,见图2。在攻毒前,A组、B组、C组、D组、F组、E组、G组、H组、J组、空白组平均体重均能达到10 kg,但B组、H组、E组比其他组增重效果更明显。
在攻击强毒后,由于受到强毒对健康状况的不同影响,各组体重表现出明显差异,仅B组、H组、J组和空白对照组的体重平均值超过15 kg,其余组均受到较为严重的影响,其中B组和H组两组的体重情况基本一致,超过空白对照组。
图2 各试验组3个时间点的平均体重
2.3 肺炎病变 攻毒后26 d,将所有试验猪进行剖杀,观察肺部病变,病变主要集中在肺的尖叶、心叶、膈叶的前三分之一以及中间叶,其中右尖叶、右心叶和左心叶病变率又较其他4个部位更高,表现为实质样病变,如“肉样变”、“胰样变”。将肺炎病变按Goodwin氏55分法记分法评分,计算出了每个免疫组的肺炎病变减少率,从图3柱状统计图可以看出,B组的肺炎病变减少率最高,达72.3%,H组次之,为69.9%,说明两组在肺炎病变减少率上相差不大。其余8组肺炎病变减少率均在60%以下,J组比其他组稍好,E组肺炎病变减少率最低,只有29.1%。
图3 各免疫组肺炎病变减少率与攻毒后平均增重情况
2.4 肺炎病变与临床参数比较 在近1个月的攻毒观察期内,从图2可以看出,每个试验组的体重差异明显,从图3可以看出,10个免疫组的平均肺炎病变减少率与平均增重之间存在相关性,B组肺炎病变减少率和平均增重量最高,H组均次之,两者的肺炎病变减少率在70%左右,平均增重在8 kg以上;肺炎病变减少率在60%以下的试验组,其平均增重也在7 kg以下,J组的两项较其他组高,而A组、C组、D组、I组的肺炎病变较少率介于40%~50%之间时,其平均增重在4 kg左右。E组、F组、G组肺炎病变较少率在40%或以下,平均增重在3 kg或以下。
将所有免疫组和攻毒对照组的肺炎病变情况和体重增加情况进行比较分析,见图4。在25 d的攻毒观察期内,体重增加4 kg以下的,其肺炎病变大多在30分以上;而体重增加6.5 kg以上的,其肺炎病变评分大多在20分以下,从图4的整体趋势来看,体重增加量越大,猪肺炎病变评分就越小,说明猪支原体肺炎能影响到体重的增加。
在本次试验中,阴性攻毒对照组的肺炎病变几何平均分为43.75,按Goodwin氏55分评分标准,算出的肺炎病变较少率应在60%及以上算疫苗的合格,即本次肺炎病变评分应小于等于17.5分为合格,以此推算出本次试验只有20头猪合格,但对96头猪的日常观察来看,约1/3(27/76)发生肺炎的猪没有观察到咳嗽,说明猪感染猪支原体肺炎后,肺产生了病变,也影响到体重的增加,但是不一定能观察到咳嗽或者喘气。
图4 各试验猪的肺炎病变评分及攻毒后增重情况
表1 咳嗽与肺炎病变的相关性
本次试验为更好地观察肺炎病变与体重增加之间的相关性,接种的各厂家的疫苗均为正常剂量的1/2,即使这样,仍有厂家生产的疫苗接种14日龄仔猪后,体重增加较空白组更高,说明接种猪支原体肺炎疫苗能促进免疫猪体重的增加,而且这种促进随着免疫猪生长日龄的增加会更明显,在最终屠杀时,猪支原体肺炎的免疫猪与非免猪体重差异显著,免疫猪平均的日增重比非免猪可多20g以上,这个结论已经被其他研究者证实[4-8]。
在攻毒试验后,以上数据表明,猪肺炎病变与体重增加存在相关性,在此之前,也有研究者已经证实这个结论[9-11],肺炎病变面积越大,体重增加越小,甚至在短期内几乎会停滞不生长,导致后期“僵猪”的出现,有研究显示[4,12],日龄小的猪比日龄大的猪出现喘气症状对体重增加的影响更大,日龄小的猪感染猪支原体肺炎后,对猪体重的影响是终生的,而肺损伤过程有时并不能观察到临床症状,正如本试验数据所显示,约1/3的支原体肺炎病变猪观察不到咳嗽或喘气等临床相关症状,导致有些养殖场不能找出饲料利用率降低和体重增加小的根本原因。当然疫苗的接种能明显降低肺炎病变和促进体重增加,众多的研究者已经证实该结论[13],本次试验中,即使减半接种,B组和H组疫苗仍有70%左右的肺炎病变减少率,体重增加也明显高于空白对照组,H组疫苗为华派的猪支原体肺炎灭活疫苗“支肺通”。本试验的另一方面也说明了不同厂家的疫苗存在差异,养殖户在选择疫苗时要综合多方面来考察。