FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原检测结果比较

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(1.邢台市第三医院皮肤科，河北 邢台 054000；2.邢台市第三医院检验科)

生殖器疱疹是临床上最常见的性传播疾病，给患者的生活质量造成明显的不利影响[1]。单纯生殖器疱疹病毒(HSV)是生殖器疱疹的主要病原菌，临床上分为HSV-1和HSV-2两型[2]。由于生殖器疱疹病毒早期感染症状不显著，因此，加强生殖器疱疹病毒的早期诊断对临床治疗具有重要的临床价值[3]。目前实验室诊断生殖器疱疹的方法包括细胞培养、抗原检测、PCR方法和血清抗体检测等[4]。每种方法在灵敏度、特异性等方面均有明显的优缺点。本文对FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原的检测结果进行比较，为临床诊断治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料分析邢台市第三医院皮肤性病科2015～2017年收治的生殖器疱疹60例患者的临床资料。所有研究对象均为初发病例，感染部位包括龟头(23例)、冠状沟(17例)、尿道口(11例)、阴茎(5例)、阴囊(4例)，未经治疗患者，年龄18～60岁，生殖器部位皮肤或黏膜损伤，近日未服用抗生素或抗病毒药物，损害部位未进行外用药物治疗。本文所有患者均知情同意并经医院伦理委员会批准。

1.2检测试剂及方法单纯疱疹病毒检测试剂盒(1型和2型)购自中山大学达安基因股份有限公司(HSV-1:甲：5′-ATCACGGTAGCCCGGCCGTGTGTGACA-3′，乙：5′-CATACCGGAACGCACACACAAA-3′， HSV-2:甲：5′-GATCTGGTACTCGAATGTCTCCG-3′，乙：5′-CGCGCGGTCCCAGATCGGCA-3′，Lot20160611)；酶联免疫吸附测定相关抗体试剂盒购自丹麦DAKO公司(兔抗HSV-1 SM44，兔抗HSV-2 Sav，Lot20151126)；单纯疱疹病毒通用引物检测试剂盒(第二次检测)购自中山大学达安基因股份有限公司(HSV-1:甲：5′-TCACGGGACCTCCTTCGGCAGTA-3′，乙：5′-GATCTGGTCACTCGAATCTCTCCG-3′， HSV-2:甲：5′-AGACGTGCGGGTCGTACACG-3′，乙：5′-CGCGCGGTCCCAGATCGGGCA-3′，Lot2051209)。荧光定量PCR仪为AB公司的7500型，全波长酶标仪为BioTek公司的Epoch型。检测步骤严格依照说明书要求进行。以HSV通用引物检测试剂盒作为二次检测，其结果作为检测HSV 的“金标准”。

1.3敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值本文分析FQ-PCR和ELISA法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。敏感性=真阳性人数/(真阳性人数+假阴性人数)*100%；特异性=真阴性人数/(真阴性人数+假阳性人数))*100%；阳性预测值为诊断阳性中有病的概率，阴性预测值为诊断阴性中无病的概率。

1.4统计分析数据统计采用SPSS20.0软件进行，计数资料采用χ2检验，结果采用百分比(%)表示。

2 结 果

2.1 FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原结果比较60例样本中FQ-PCR法检测阳性为46例，占76.7%(混合感染部位为冠状沟5例和尿道口4例)，ELISA法检测阳性为48例，占80.0%(混合感染部位为冠状沟6例和尿道口5例)，检测结果不一致样本为6例，占10.0%，见表1。

表1 FQ-PCR和ELISA法检测60例生殖器疱疹病毒抗原结果比较(例，%)

2.2 FQ-PCR和ELISA法检测效果比较1例FQ-PCR法阳性而ELISA法阴性样本经第二次检测后为阴性，3例ELISA法检测阳性而FQ-PCR法检测阴性样本经第二次检测后阳性为2例，阴性为1例，见表2。

表2 FQ-PCR和ELISA法检测效果比较(例)

2.3 FQ-PCR法和ELISA法检测效果评价FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为92.4%、96.3%、93.7%和94.5%，而ELISA法的上述指标分别为94.4%、96.3%、93.8%和95.8%，见表3。

表3 FQ-PCR法和ELISA法检测效果评价

3 讨 论

生殖器疱疹是生殖器疱疹病毒引起的慢性、终生性感染性疾病，具有周期复发的特点。部分生殖器疱疹感染患者无明显的临床症状，但免疫功能低下患者容易呈现周期性复发的特征。同时，生殖器疱疹病毒感染患者感染艾滋病病毒的风险比非感染患者高2～3倍。因此，加强对生殖器疱疹病毒感染的早期诊断并及时采取治疗措施具有重要的现实意义。本文在对FQ-PCR和ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原的检测结果进行比较时发现60例样本中FQ-PCR法检测阳性为46例，占76.7%，ELISA法检测阳性为48例，占80.0%，检测结果不一致样本为6例，占10.0%；1例FQ-PCR法阳性而ELISA法阴性样本经第二次检测后为阴性，5例ELISA法检测阳性而FQ-PCR法检测阴性样本经第二次检测后阳性为3例，阴性为2例；FQ-PCR法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为92.4%、96.3%、93.7%和94.5%，而ELISA法的上述指标分别为94.4%、96.3%、93.8%和95.8%，表明ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原敏感性和特异性高，值得临床推广。

生殖器疱疹病毒在临床上通常采用PCR法和酶联免疫吸附测定法进行，但在诊断的效果方面存在一定的差异性[5-6]。在对生殖器疱疹患者女性性伴HSV-2抗体的临床检测时发现研究组的HSV-2抗体阳性率显著高于对照组，20～30岁年龄组的血清HSV-2抗体阳性率显著高于31～40岁和41～50岁年龄组[7]。以往的研究发现疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗体检出率高，酶联免疫检测HSV抗原的方法可直接检测出泌尿生殖道及皮损中HSV病原体，在生殖器疱疹筛查中具有一定的优势[8]，且DFA联合型特异IgG及IgM抗体检测对生殖器疱疹实验室诊断的效果符合临床需要[9]。荧光定量聚合酶链反应在生殖器疱疹诊断和分型中应用的研究中也发现建立的FQ-PCR方法具有高特异性和敏感性，分型、定量准确，方法快速、简便，可用于GH的诊断和分型[10]。早期的研究也发现ELISA和IFA法检测HSV有较高的灵敏度和特异性，均可为临床诊治提供可靠依据[11]，且3种检测方法对临床疑似生殖器疱疹患者的检测阳性率差异无统计学意义，但相对另外两种检测方法,ELISA因其便宜、实用的优点而适用于临床推广应用[12]。本文60例样本中FQ-PCR法检测阳性为46例，占76.7%，ELISA法检测阳性为48例，占80.0%，检测结果不一致样本为6例，占10.0%，与上述研究结论一致。而张永乐等[13]发现real-time PCR方法能够快速、准确地检出HSV-2DNA,其特异性强、灵敏度高,可用于临床诊断HSV-2感染，且李敏[14]发现生殖器疱疹患者的疱疹抗体检测率较高,并主要以HSV-2为主要感染方式，且女性HSV-2IgG感染率明显高于男性。在对聚合酶链反应与血清酶联免疫吸附试验在生殖器疱疹中的应用对比分析的研究中也发现相比于PCR法，ELISA法具有更高的敏感度和特异性，避免了样本间的相互污染，具有临床应用价值，与本文的结论一致。但应当指出的是本文中纳入的病例数存在一定的局限性，在下一步的工作中课题组将不断增大研究的样本量，在更大的研究范围内分析两种方法的差异性。

因此，ELISA法检测生殖器疱疹病毒抗原敏感性和特异性高，值得临床推广。