三种消毒剂对兔球虫卵囊孢子化的抑制作用研究

陈 益，夏艳勋，贺桂芬，邓同炜，李文刚，石冬梅

（河南牧业经济学院，郑州 450046）

兔球虫病是家兔最常见的原虫病，在我国各地广泛流行，幼兔几乎100%感染，死亡率极高［1-5］，由于无有效疫苗，该病主要依赖化学药物防治。聚维酮碘、二氧化氯和三氯异氰尿酸是生产中常用消毒剂，对细菌、病毒等高效，但迄今未见其抑杀球虫卵囊的研究报道。本试验选用这3种消毒剂在不同条件下体外作用于兔球虫卵囊，以检测其对兔球虫卵囊孢子化的影响，为兔球虫病的防制提供参考。

1 材料

1.1 聚维酮碘 浓度99.8%，上海迈瑞尔化学技术有限公司生产。配制成500 mg/L、1 000 mg/L、2 000 mg/L三种不同浓度溶液，现配现用。

1.2 二氧化氯 有效氯12%，北京京久环保科技有限公司生产。配成不同有效氯浓度溶液：25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L，现配现用。

1.3 三氯异氰尿酸 有效氯450 mg/g，德清县康博消毒化工有限公司生产。配成3种不同有效氯溶液：250 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L，现配现用。

1.4 重铬酸钾 分析纯，上海浦江化工厂生产。称取2.5 g重铬酸钾溶于100 mL蒸馏水，配成2.5%重铬酸钾溶液备用。

2 方法

2.1 卵囊收集

采集加利福利亚兔2 h内排出的粪便，研细，加入约10倍体积的饱和盐水，充分搅匀，过滤，收集滤液并以3 000 r/min离心15 min，用胶头滴管吸取表层溶液，然后将溶液混于10倍体积蒸馏水中，9 000 r/min离心5 min，弃上清，收集沉淀，加适量2.5%重铬酸钾溶液，置 4 ℃冰箱备用［6］。

2.2 卵囊孢子化抑制试验

将保存于2.5%重铬酸钾的卵囊溶液9 000 r/min离心5 min，弃上清，沉淀加适量蒸馏水洗涤后9 000 r/min离心5 min，收集沉淀，重复洗涤3次，在最终沉淀中加入蒸馏水，使卵囊数每毫升约4 000个。分别吸取200 μL卵囊液加入到1 800 μL上述3种不同浓度消毒剂溶液中，充分混匀，对照组以蒸馏水代替消毒液，室温静置。第5、15、30和60分钟各吸取500 μL处理后卵囊液于2 mL EP 管中，离心（9 000 r/m，离心 5 min），弃上清，沉淀加2 mL蒸馏水以同样转速离心洗涤3次，最后在沉淀中加入500 μL 2.5%重铬酸钾溶液，置29℃恒温箱中通气培养，间断性震荡。

2.3 卵囊孢子化率计算

卵囊培养后第24、48和72小时分别统计各组孢子化卵囊数及总数，每次计数3次，求其平均值，计算卵囊孢子化率，卵囊孢子化率（%）=孢子化卵囊（/孢子化卵囊+未孢子化卵囊）×100%。

2.4 数据处理

试验数据采用SPSS 22.0统计软件进行处理。

3 结果与分析

3.1 聚维酮碘对兔球虫卵囊孢子化的影响

由表1可见，培养24 h后，对照组卵囊孢子化率为68.23%，聚维酮碘不同处理组孢子化率集中在67.68%～68.40%间，与对照组无显著差异（P＞0.05）。培养48 h和72 h后，聚维酮碘各处理组卵囊孢子化率略低于对照组，但差异均不显著（P＞0.05）。此外，孢子化培养24、48和72 h后，聚维酮碘各浓度组在不同处理时间上均无明显差异。

表1 不同条件下聚维酮碘对兔球虫卵囊孢子化率的影响

3.2 二氧化氯对兔球虫卵囊孢子化率的影响

如表2所示，培养24、48和72 h后，除个别组外，3种浓度的二氧化氯对卵囊不同作用时间后卵囊孢子化率总体上均略低于对照组，但均未达到显著水平（P＞0.05），同时各组不同作用时间差异也不明显（P＞0.05）。不难看出，二氧化氯各试验组卵囊孢子化率与对照组差异不明显（P＞0.05），揭示有效氯为25～100 mg/L的二氧化氯溶液对兔球虫卵囊孢子化基本无抑制作用。

表2 二氧化氯不同条件下的兔球虫卵囊孢子化率

3.3 三氯异氰尿酸对兔球虫卵囊孢子化率的影响

由表3可知，培养24 h后，各组孢子化率50.88%～59.71%，均显著低于对照组68.23%（P＜0.05）。培养48 h和72 h后，各处理组孢子化率均低于相应对照组，但差异不显著（P＞0.05）。此外，同一浓度三氯异氰尿酸对卵囊不同处理时间比较显示，仅1 000 mg/L组在培养24 h后不同处理时间表现出一定差异，尤其以处理60 min组显著低于处理15 min组（P＜0.05）。综合分析发现，三氯异氰尿酸对兔球虫卵囊孢子化有一定抑制作用，且随三氯异氰尿酸浓度的升高而增强；而在同一浓度三氯异氰尿酸对卵囊不同作用时间下，总体上各处理组间的卵囊孢子化差异不明显。

表3 三氯异氰尿酸不同条件下的兔球虫卵囊孢子化率

4 讨论

在一定温度下，球虫卵囊迅速孢子化发育到感染性阶段，因此阻止其孢子化是防止动物感染球虫的关键措施之一。目前，已发现一些化学药物可体外抑制球虫卵囊孢子化，如有试验发现，10%氨水可抑制球虫卵囊孢子化［7-8］，但高浓度氨水对动物呼吸道黏膜刺激性强，容易诱发呼吸道疾病［9-10］，因此难以推广。此外，碘制剂对球虫卵囊孢子化也有一定作用。张龙现等［8］报道，3%碘酊和2%碘酊醋酸液体外作用球虫卵囊30 min，可完全抑制球虫卵囊孢子化。陈汉忠等［11］也报道，含碘0.05%的复合消毒液可较好地抑制鸡球虫卵囊孢子化。本试验结果表明，聚维酮碘溶液对兔球虫卵囊孢子化基本无抑制作用，可能与聚维酮碘浓度较低有关，有待于进一步探索。

二氧化氯和三氯异氰尿酸具有强烈的氧化作用，对细菌、病毒、真菌等效果良好。本试验中二氧化氯溶液（按有效氯计，25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L）在不同作用时间下，均未明显地表现出对兔球虫卵囊孢子化的抑制作用，这可能与二氧化氯浓度较低有关。三氯异氰尿酸溶液各处理组的卵囊孢子化率均低于对照组，尤其是培养24 h抑制作用最强。此外，三氯异氰尿酸溶液随浓度升高，对兔球虫卵囊孢子化抑制效果越好。综合分析，二氧化氯及三氯异氰尿酸溶液的抑制结果，有效氯低于100 mg/L几乎无抑制作用，250 mg/L以上有一定抑制作用，表明高浓度的含氯消毒剂对兔球虫卵囊孢子化有抑制作用。