时小艳
(江苏食品药品职业技术学院药学院,江苏淮安 223003)
昆明白56日龄雄性小鼠,体重18~22 g,购于南京市江宁区青龙山动物繁殖场。
试剂:总胆固醇(TC)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、高密度脂蛋白(HDL)试剂盒、低密度脂蛋白(LDL)试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司提供。
仪器:烧杯、电热炉、电子天平、动物电子秤、注射器、半自动生化仪、IGL-LD16G型冷冻高速离心机(50 mL×4)、岛津UV-2700型紫外分光光度计。
将40只18~22 g健康的昆明白56日龄的雄性小鼠,随机分成空白对照组、模型对照组、药膳高浓度组、药膳低浓度组4组,每组10只。4组小鼠经4周造模后进行每日1次给药治疗,连续灌胃给药4周。
每日给药方案如下:空白对照组,给以普通小鼠饲料和0.4 mL蒸馏水;模型对照组,给以高脂饲料和0.4 mL蒸馏水;药膳高浓度组,给以高脂饲料和山楂天麻药膳原液0.4 mL;药膳低浓度组,给以高脂饲料和山楂天麻药膳原液加等量的蒸馏水稀释液0.4 mL。
采用SPSS13.0 软件进行分析,计数资料采用率表示,组间比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
1.3.1 高脂饲料
高脂饲料的配方为鸡蛋黄粉10%,胆酸盐0.2%,胆固醇1%,猪油10%,普通小鼠饲料78.8%。制备的时候,在粉碎的普通小鼠饲料中加入胆固醇和鸡蛋黄粉混合搅匀,再倒入加热融化的猪油,最后一起搅拌均匀即可。
1.3.2 山楂天麻药膳的制作
根据中医学理论,挑选出山楂、天麻、薏苡仁、皮肚等药物按一定量组成药膳。将上述药物称量取药后一起粉碎混匀,然后放入烧杯中加入适量的水,浸泡1 h,放在电热炉上加热并搅拌煎煮3次,每次煎制时间为30 min。时间到后,把用纱布过滤后得到的滤液收集并混合在另一个烧杯之中,将获得的混合滤液蒸发精制至100 mL,若不足100 mL则补水至100 mL,定容。
1.3.3 小鼠高脂血症模型建立
将空白对照组的小鼠,用普通小鼠饲料喂养,其他3组全部用高脂饲料喂养,进行人造高脂血症模型。模型建立期间,每天观察小鼠状态、进食量和饮水量并记录,每周测1次体重,并记录数据。于造模的第4周末,尾静脉取血,分别测定小鼠的血清总胆固醇(TC) 含量、甘油三酯(TG) 含量、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 含量等指标。
1.3.4 进食量及饮水量测定
小鼠在空调环境下,有自然光照,温度23~25℃,湿度控制40%~60%的环境下喂养,均可以自由摄食和饮水。每只试验小鼠都单独饲养,在鼠笼里放置带有刻度的饮水容器,按照试验要求测量记录进食量和饮水量。
1.3.5 指标含量测定
血清TC含量、TG含量、HDL-C含量、LDL-C含量,根据各试剂盒的说明书进行测定。
1.3.6 数据统计
试验期间每周称量小鼠的体重,记录数据并整理。
试验期间小鼠的体重变化见表1,试验期间小鼠的体重变化见图1。
表1 试验期间小鼠的体重变化 /g
图1 试验期间小鼠的体重变化
如图1所示,试验期间各组试验小鼠的体重都有所提高。对每周称量的各组小鼠体重进行比较,空白对照组的小鼠生长良好,模型对照组的小鼠体重增长明显,药膳高浓度组和药膳低浓度组的小鼠造模期间体重有显著的增加,经过给药治疗后,小鼠体重增加趋于正常,药膳高浓度组给药效果比药膳低浓度组明显。
各组小鼠24 h之内的饮水量,记录整理数据。试验期间小鼠24 h内饮水量的变化见表2,试验期间小鼠24 h内饮水量的变化见图2。
表2 试验期间小鼠24 h内饮水量的变化 /mL
从图2中可看出,造模期间、模型对照组、药膳高浓度组和药膳低浓度组的小鼠饮水量有显著的增长,经过给药治疗后,模型对照组没有减少趋势,而药膳高浓度组和药膳低浓度组的小鼠饮水量趋于正常,给药效果明显。
记录试验小鼠24 h之内的进食量,分析小鼠进食量的变化。
图2 试验期间小鼠24 h内饮水量的变化
试验期间小鼠24 h内进食量的变化见表3,试验期间小鼠24 h内饮水量的变化见图3。
表3 试验期间小鼠24 h内进食量的变化/g
图3 试验期间小鼠24 h内进食量的变化
从图3中可看出,在造模期间,模型对照组、药膳高浓度组和药膳低浓度组的试验小鼠进食量有明显的增加。在经过给药治疗后,模型对照组没有减少的趋势,而药膳高浓度组和药膳低浓度组的小鼠进食量下降,接近正常水平,给药治疗效果明显。
在试验期间测量小鼠的TC含量,记录数据。
小鼠TC含量的测定见表4,小鼠TC含量的测定见图4。
表4 小鼠TC含量的测定/mmol·L-1
由图4可知,空白对照组小鼠TC含量在给药前后无明显变化。给药前,除空白组外的其他3组TC含量增加明显,经给药治疗后,模型组没有显著的变化,高浓度组的TC含量比低浓度组下降明显,高浓度组的治疗效果比低浓度组较好。
图4 小鼠TC含量的测定
在试验期间测量小鼠的TG含量,记录数据。
小鼠TG含量的测定见表5,小鼠TG含量的测定见图5。
表5 小鼠TG含量的测定/mmol·L-1
图5 小鼠TG含量的测定
由图5可知,空白对照组小鼠TG含量在给药前后无明显变化。给药前,除空白组外的其他3组TG含量增加明显,经给药治疗后,模型组没有显著的变化,而高浓度组和低浓度组TG含量有所下降,高浓度组的TG含量比低浓度组下降明显。
在试验期间测量小鼠的HDL-C含量,记录数据。小鼠HDL-C含量的测定见表6,小鼠HDL-C含量的测定见图6。
表6 小鼠HDL-C含量的测定/mmol·L-1
图6 小鼠HDL-C含量的测定
根据图6可知,空白对照组小鼠HDL-C含量在给药前后无明显变化。给药前,各组HDL-C含量差异无统计学意义。经给药治疗后,模型组有下降趋势,而高浓度组和低浓度组HDL-C含量有所上升,高浓度组的HDL-C含量比低浓度组上升较明显,药膳高浓度组疗效更好。
在试验期间测量小鼠的LDL-C含量,记录数据。
小鼠LDL-C含量的测定见表7,小鼠LDL-C含量的测定见图7。
表7 小鼠LDL-C含量的测定/mmol·L-1
根据图7可知,空白对照组小鼠LDL-C含量在给药前后无明显变化。给药前,除空白组外的其他3组LDL-C含量增长明显。经给药治疗后,模型组没有显著变化,而高浓度组和低浓度组LDL-C含量有所下降,高浓度组的LDL-C含量比低浓度组下降较明显,药膳高浓度组疗效比药膳低浓度组好。
图7 小鼠LDL-C含量的测定
血清中甘油三酯及胆固醇含量是降脂功能常用的评价指标[5]。研究表明,在人造高脂血症小鼠建立的试验阶段,造模4周后,高脂饲料喂养的3组小鼠的TC含量、TG含量和LDL-C含量有明显升高,HDL-C含量同空白对照组相比变化不大,经过4周的山楂天麻药膳的给药治疗后,药膳高浓度组和药膳低浓度组的TC含量、TG含量、LDL-C含量相对于模型对照组均有明显下降,而HDL-C含量有所上升,小鼠的精神状态良好、毛色光亮,高浓度组给药后的效果比低浓度组好,说明山楂天麻药膳具有显著改善高脂血症小鼠的血脂状况,有明显的降血脂作用。