广西产多花黄精不同炮制工艺研究

周改莲　李健　徐梦云　谢栩　王邱燕

【摘 要】 目的：為研究酒制法、熟地制、黑豆制、清蒸、蔓荆子制等不同炮制工艺对广西产药食同源多花黄精成分含量的影响，优选出最佳炮制工艺。方法：采用紫外分光光度法测定广西产药食同源多花黄精不同炮制品中小分子多糖、还原糖、总皂苷、总多糖的含量，并按药典规定方法测其浸出物含量，采用归一化法计算其综合评分并比较。结果：6个指标综合评分由大到小依次为：蔓荆子制法（87.47）>清蒸（86.67）>九蒸九曝法（83.08）>酒制法（81.31）>黑豆、蜜、酒制法（77.07）>黑豆、姜、蜜制法（72.36）>熟地制法（70.55）>生品（66.16）>黑豆制法（64.35）。结论：广西产药食同源多花黄精不同炮制工艺以蔓荆子制法最优。

【关键词】 多花黄精；炮制；综合评价

【中图分类号】R283 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）10-0034-04

Abstract：Objective To study the components of Guangxi Polygonatum cyrtonemaprocessed differently， like stir-frying with wine， processing with Rehmanniae Radix Preparata， black beans or Fructus Viticis and steaming processing techniques， and select the best processing method. Methods Components of Polygonatum cyrtonema， including small molecular of polysaccharides， reducing sugar， total saponins and total polysaccharides， were determinated by UV Spectrophotometry， the extracts were determined by the way according to Chinese pharmacopoeia， and normalized method was used to calculate and compare their score. Results Comprehensive scores of the six indexes were arranged according to the order from big to small：Fructus viticis processing （87.47） > Steaming processing （86.67） >Nine steaming and nine exposure processing（83.08） > Liquor processing （81.31） > Black beans， honey， and liquor processing （77.07） > Black beans， ginger， and honey processing （72.36） > Radix Rehmanniae Preparata processing （70.55） > Unprocessed products （66.16） > Black beans processing （64.35）. Conclusion Fructus viticis processing is the best method to process Guangxi edible and medicinal Polygonatum cyrtonema.

Keywords：Polygonatum cyrtonema； Processing； Comp-rehensive Evaluation

黄精为合百科植物滇黄精（Poιygonatum kingianum CoLL.et HemsL.）、黄精（Polygonatum sibiricum Red.）或多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua.）的干燥根茎。黄精属于药食两用中药材，其化学成分主要为低聚糖、单糖和多糖，多种氨基酸、多种甾体皂苷和人体必需微量元素、生物碱等[1]。黄精历代入药生制兼用，但传统以黄精生用“刺人咽喉”，故多炮制后入药[2]。黄精炮制渊源已久，历代以来黄精炮制方法有：九蒸九曝法、蔓荆子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸晒法、熟地制等[3]。目前对黄精的研究大多数为黄精及滇黄精，炮制方法为酒制法，而主产在广西的多花黄精的研究还处于空白，据笔者调查，广西民间百姓多用黑豆炮制法炮制生黄精，而黑豆制法也分为黑豆汁制、黑豆、蜜、酒制，黑豆、生姜、蜜制等。笔者主要研究广西产多花黄精的酒制、黑豆制、清蒸、蔓荆子制、熟地制等不同炮制工艺，旨在为广西产多花黄精炮制工艺提供理论参考，为今后黄精黑豆制法规范化研究提供参考依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 UV-L5紫外可见分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司），KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DFT-200C万能高速粉碎机（温岭市林大机械有限公司），HH-S6数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），SHB-B95型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）。

1.2 材料 人参皂苷Rb1（批号：wkq16060402，四川省维克奇生物科技有限公司），无水葡萄糖（批号wkq16082202，四川省维克奇生物科技有限公司），其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品的炮制与制备

2.1.1 生黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，切厚片，晒干[4]。

2.1.2 九蒸九曝法制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净。①拌黄酒：与适量（约10 %用量）黄酒与净黄精拌匀，并闷润至酒吸尽。②第1次蒸制、晒干：要求第1次“蒸至黄精中央发虚为度”（蒸制过程中注意收集黄精汁），取出“晒至外皮微干”，然后将黄精拌入黄精汁和适量黄酒，并“闷润至辅料吸尽”。③反复蒸制、晒干：按第1次蒸制、晒干方法；再蒸，晒至外皮微干，再拌入黄精汁，适量黄精，如此反复，蒸制晒8次。第2次至第8次制需要使用黄酒的70 %用量。④第9次蒸制、晒干：最后将剩余（20 %用量）黄酒及黄精汁一起拌入，“蒸至外表棕黑色，有光泽，中心深褐色，质柔软，味甜为度”；最后晒至八成干，然后切成片状[5-6]。

2.1.3 黑豆制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加米泔水泡透心，淘净，取黑豆100 g熬取浓汁，与黄精共入锅中，加水与药平；煮沸后，用微火煮至微干，取出，筛去黑豆，晒至半干，又入蒸锅蒸至上气，取出日晒夜露，隔天又蒸至上气，再晒再露，每次蒸前，加入前次的蒸出液于盛装器皿中与黄精一起蒸，反复5次，晒干[7]。

2.1.4 黑豆、蜜、酒制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，浸泡2 d，每日换水1次，取出。取黑豆50 g水煮，取汁，与黄精合煎12 h，取出，晒至半干，再加熟蜜25 g及白酒25 g，共兑化拌匀后，蒸24 h，蒸至黑色，无麻味，晒干，即可[7]。

2.1.5 黑豆、生姜、蜜制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加水泡透后，再加水煮沸，去水，加生姜250 g，黑豆50 g煮2 h，晒半干，加蜂蜜75 g与水拌匀，蒸至黑亮为度，取出，晒干[7]。

2.1.6 熟地制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，切厚片，蒸至略带黑色，晒半干，露一夜。如此反复3次，至第4次与熟地膏120 g拌匀，润一夜，次日蒸至里面黑透，再晒、露一次，晒干[7]。

2.1.7 酒制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，加酒拌匀，置蒸笼内，密闭，隔水加热蒸至黑透，取出，稍晾，晒干[7]。

2.1.8 清蒸黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，蒸6 h，晒八成干，加蒸出液浸润，再蒸6 h，至内心成黑色，晒半干，再加蒸出液拌匀，晒至六成干，在闷润均匀。蒸格上垫编织袋，蒸一夜，闷一夜（12 h），次日取出剖视，以内外发黑为度，切片，晒干[7]。

2.1.9 蔓荆子制黄精 取黄精500 g，除去杂质，洗净，置适宜的容器内，加入蔓荆子汁及适量水拌匀，浸润过夜，置蒸制容器内蒸24 h，取出，晒干[7]。

2.2 浸出物的含量测定 取粉碎过筛后的黄精样品4 g，精密称定，按2015版《中国药典》四部附录通则2201项下热浸法[8]，用稀乙醇、蒸馏水作溶剂，测定醇溶性浸出物、水溶性浸出物，结果见表1。

2.3 供试品溶液的制备 取黄精样品各200 g，60℃干燥至恒重，粉碎，过80目筛，备用。取黄精样品粉末各1.00 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇100 mL，水浴回流提取1 h，趁热过滤，滤渣用80 %乙醇洗3次，每次10 mL，取滤液，挥尽乙醇，转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀后用于小分子总糖和还原糖含量测定[1]。将药渣与滤纸置圆底烧瓶中，加蒸馏水100 mL，水浴加热回流提取1 h，趁热过滤，滤渣用水洗3次，将滤液转移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，用于总多糖的含量测定[1]。

2.4 还原糖的含量测定

2.4.1 葡萄糖对照溶液的制备 取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品55.0 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得[1]。

2.4.2 DNS溶液的配制 取0.650 g 3，5-二硝基水杨酸，精密称定，加水50 mL溶解，转移至100 mL棕色容量瓶中，加入32.5 mL的2 mol/mL的NaOH溶液，再加入4.5 g丙三醇，加水至刻度，摇匀，即得[9]。

2.4.3 还原糖标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至4 mL，再各加入5 mL DNS溶液，摇匀后置沸水浴中加热6 min，冰浴冷却至室温，加水至刻度，以空白管为对照，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在540 nm处测定吸光度[9-10]。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（μg/mL）为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0067X+0.0353（r=0.9997），表明无水葡萄糖对照品溶液在22～132 μg/mL范围内具有良好的线性关系，用于DNS法测定还原糖含量。

2.4.4 样品的测定 精密量取“2.3”项下方法制备的供试品溶液各1.0 mL稀释到50 mL，精密量取4 mL，分别置10 mL具塞试管中，按照“2.4.3”项下方法自“再加入5 mL DNS溶液”起操作，测定吸光度，计算还原糖含量。结果见表2。

2.5 多糖、总糖的含量测定

2.5.1 苯酚溶液的制備 取2.5 g苯酚，精密称定，加水溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中[10]。

2.5.2 多糖、总糖标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，然后分别精密量取上述稀释后的葡萄糖对照品溶液各1 mL，置10 mL具塞试管中，加水至2mL，摇匀，再加1 mL的5%苯酚溶液和7 mL浓硫酸溶液，混匀，静置5 min，水浴加热20 min，并与冷却至室温，以空白管为对照，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在490 nm处测定吸光度[9-10]。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（μg/mL）为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0696X-0.0223（r=0.9998）， 表明无水葡萄糖对照品溶液在2.2～13.2 μg/mL范围内具有良好的线性关系，用于苯酚-硫酸法测定多糖、总糖含量。

2.5.3 样品的测定 精密量取2.3项下方法制备的供试品溶液各0.5 mL，置10 mL具塞试管中，按照“2.5.2”项下方法自“加水至2 mL”起操作，测定吸光度，计算多糖含量，结果见表1。

精密量取2.3项下方法制备的供试品溶液各1.0 mL稀释到50 mL，精密量取1 mL，置10 mL具塞试管中，按照“2.5.2”项下方法自“加水至2 mL”起操作，测定吸光度，计算小分子总糖含量，结果见表2。

2.6 总皂苷含量测定

2.6.1 标准曲线的制备 取人参皂苷Rb1对照品11.3 mg，精密称定，加甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中。取人参皂苷Rb1对照品溶液40、80、120、160、200 μL，置10 mL具塞试管中，挥尽溶剂，加0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液（新鲜配制），冰浴时加0.8 mL高氯酸，混匀，60℃水浴加热15 min，再冰浴2 min，加5 mL冰醋酸，混匀，静置5 min，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在550 nm处测定吸光度[9]。以吸光度（A）为纵坐标，人参皂苷Rb1的质量（μg）为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0039X+0.0305（r=0.9997），結果表明人参皂苷对照品溶液在45.2～226 μg范围内具有良好的线性关系。

2.6.2 样品的测定 取黄精样品粉末各1.00 g，精密称定，加14倍量水饱和正丁醇，40℃超声提取50 min，过滤，滤渣再提取1次，合并两次滤液，置25 mL容量瓶中，加水饱和正丁醇至刻度，摇匀[11]。取上述供试品溶液各100 μL，按照“2.6.1”项下方法自“置10 mL具塞试管中”起操作，测定吸光度，计算总皂苷含量。结果见表1。

2.7 数据处理及综合评分 以多花黄精不同炮制品的浸出物、还原糖、多糖、小分子总糖、总皂苷含量为指标，采用综合评分法评定。评分时以各指标的实验最大值作为参照，将数据进行归一化处理，再根据各指标的炮制工艺特性和成分重要性，给予糖类成分含量加权系数为0.4，总皂苷含量加权系数为0.3，浸出物加权系数为0.3，以行归一化处理后的数值加权求和，即得综合评分，其关系式为：（还原糖含量/还原糖含量最大值+多糖含量/多糖含量最大值+小分子总糖含量/小分子总糖含量最大值）/3×40+（总皂苷含量/总皂苷含量最大值）×30+（醇溶性浸出物含量/醇溶性浸出物含量最大值+水溶性浸出物含量/水溶性浸出物含量最大值）/2×30[1]，结果见表1。

3 讨论

糖类是多花黄精中含量最高的成分，历代以来黄精炮制方法有九蒸九曝法、蔓荆子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸晒法、熟地制等，研究不同炮制工艺对广西产多花黄精成分含量的影响，优选出最佳炮制工艺，为广西产多花黄精制法规范化研究提供参考依据。且在2015版《中国药典》中对黄精药材及饮片检查项皆有要求“含黄精多糖以无水葡萄糖（C6H12O6）计，不得少于4.0%”[4]。不同炮制品与生品对照，多糖含量均有所增加，还原糖含量除熟地制多花黄精有所降低外，其它炮制品还原糖含量均有所增加；而不同炮制品的总糖、小分子总糖、非还原性低聚糖含量均比生品低。不同炮制工艺炮制的多花黄精之间的含量有所不同，其质量也存在一定差异，其功效是否也存在一定的差异，有待于进一步的深入研究。甾体皂苷是多花黄精的主要活性成分之一，初步研究表明，不同炮制工艺炮制的多花黄精之间的总皂苷含量差异不大，但与生品总皂苷含量对比，均比生品总皂苷含量高，其中以蔓荆子制多花黄精含总皂苷量最高。

采用多指标综合评价，蔓荆子制多花黄精得分最高为87.47，其它炮制品依次为：清蒸（86.67）>九蒸九曝法（83.08）>酒制（81.31）>黑豆、蜜、酒制（77.07）>黑豆、姜、蜜制（72.36）>熟地制（70.55）>生品（66.16）>黑豆制（64.35）。根据多花黄精有效成分及综合评分考察，蔓荆子制法为广西产多花黄精的最佳炮制工艺，其次为清蒸、九蒸九曝法，酒制。

广西产多花黄精经不同炮制工艺炮制后，其水溶性浸出物、醇溶性浸出、糖类、总皂苷等成分含量均与生品有所差异，其中以水溶性浸出物、醇溶性浸出物及非还原型低聚糖尤甚；且黑豆制多花黄精取自《现代中药炮制手册》记载，但其结果与生品比较，差异尤甚，故有待于对多花黄精炮制工艺做进一步的深入研究。

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（收稿日期：2018-03-22 编辑：陶希睿）