正交实验法优选益肾涤浊丸的制备工艺

彭爱娜 田素英 陈震尧

【摘 要】 目的：优选益肾涤浊丸的最佳制备工艺。方法：以溶散时限、小檗碱含量为考察指标，以清膏相对密度、起模的粉水比例、干燥温度、干燥时间为主要影响因素，采用L9（34）正交实验法优选制备工艺。结果：优选的最佳制备工艺为清膏相对密度1.15（20℃），起模的粉水比例1∶1，干燥温度80℃，干燥时间8h。结论：该制备工艺科学合理，建立的定量方法较简便、灵敏、重现性好。

【关键词】 益肾涤浊丸；制备工艺；正交实验法

【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）10-0014-04

Abstract：Objective To optimize the best preparation process of Yishendizhuo pills.Methods The dissolution time and the berberine content were used as the index， determine the relative density of the cream， the proportion of powder from the mold， drying temperature， drying time were main influence factors， the L9（34） orthogonal experiment was used to optimize the best preparation process.Results The optimal preparation process of Yishendizhuo Pills was that the relative density of the cream was 1.15（20℃）， the ratio of powder to water was 1∶1， the drying temperature was 80℃，the drying time was 8h.Conclusion The preparation process is scientific and reasonable， the quantitative method established is simpler， more sensitive and reproducible.

Keywords：Yishendizhuo Pills； Preparation Process； Orthogonal Experiment

益肾涤浊丸是广东省名老中医梁宏正临证多年的经验方，具有清热解毒、通癃涤浊、祛瘀止痛、益肾补虚，主治急、慢性前列腺炎、性功能障碍等症，在广东省肇庆市中医院临床应用多年，疗效良好。方中黄柏有较好的清热燥湿泻火作用，《医学启源》引用《主治秘诀》云：“泻膀胱龙火，利结小便，下焦湿肿，脐中痛，补肾水不足”[1]。其主要有效成分为小檗碱，小檗碱有较好的抗菌、抗炎等药理作用。丸剂的溶散时限已作为评价丸剂内在品质的重要手段之一，是对丸剂特有的检查项目。因此本实验以小檗碱含量和溶散时限为考察指标，用L9（34）正交试验法[2]优化益肾涤浊丸的制备工艺，可以较为全面的衡量工艺的合理性，得到疗效稳定、质量可控的制剂。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（美国，Waters），GZX-9246MBE数显鼓风干燥箱（上海博迅實业有限公司医疗设备厂）；B-220恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂）；BS-6G智能崩解试验仪（上海优浦科学仪器有限公司）；HWS26电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；BY-800型调速糖衣锅（长沙湘劲机械）；UV1000紫外可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；CP225D万分之一天平（德国Sartorus公司）。

1.2 材料 盐酸小檗碱对照品（批号：100080-201409，中国食品药品检定研究院）；磷酸二氢钾（AR，天津市福晨化学试剂厂）；乙腈（色谱纯，天津市百世化工有限公司）；超纯水（屈臣氏）。所用药材经广东药科大学田素英副教授鉴定均符合2015版中国药典标准。

2 方法与结果

2.1 制丸和溶散时限的测定 将黄柏、苦参、虎杖、黄芪、淫羊藿、菟丝子6味药加8倍水（浸泡10min）回流2次，每次1h，滤过，合并滤液并浓缩成相对密度为1.15～1.20（20℃）的清膏[3]，备用；粉萆薢等中药粉碎过100目筛的药粉，备用。用调速糖衣锅喷洒少量水进行起模，加大成型时喷洒黏合剂，将丸粒制成黄豆粒大小，进行整粒，盖面，干燥即得[4]。按照2015年版《中国药典》（一部）丸剂溶散时限方法测定[5]。

2.2 盐酸小檗碱含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈∶0.1mol/L 磷酸二氢钾水溶液（30∶[KG-*2]70），流速1.0 mL/min，波长345 nm，柱温：室温，进样量 20μL。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 对照品溶液 精密称取盐酸小檗碱对照品2.44 mg，用上述流动相溶解并定容至50 mL，得浓度为0.0488 mg/mL的溶液，用0.45 μm微孔滤膜过滤备用。

2.2.2.2 供试品溶液 按处方量等比例缩减后称取每份约为2.0g，加8倍量的蒸馏水，浸泡60 min，加热回流1.0h，提取3次，将提取的药液浓缩并定容成50 mL。经纯化后精密量取5 mL用上述流动相定容成25 mL，充分摇匀后4000 r/min离心30 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤备用。

2.2.2.3 阴性对照溶液 取处方中去黄柏的其他药材，按供试品溶液制备方法制成缺黄柏的阴性样品。

2.2.3 方法学考察

2.2.3.1 系统适用性实验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，理论塔板数不低于4000。色谱峰与相邻峰之间分离度大于1.5（如图1所示）。

2.2.3.2 制备标准曲线 精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8 mL，分别置于10mL容量瓶中，加流动相稀释到刻度，在“2.2.1”项下方法分别测定，以对照品浓度（X）为横坐标，相应对照品峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，线性回归方程为y=64389723.27x+218364.62，r=0.9993，结果表明盐酸小檗碱含量在4.88～39.04μg的范围内有良好的线性关系。

2.2.3.3 精密度试验 精密取对照品溶液各20μL，按“2.2.1”项下方法重复进样 6 次，计算盐酸小檗碱的色谱峰面积。RSD为1.02%，表明本仪器精密度良好。

2.2.3.4 重复性试验 精密称取处方中药材粉末共 6 份，各2 g，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备6份溶液，各取20μL，在“2.2.1”项下方法测定盐酸小檗碱的色谱峰面积。计算RSD为1.60%，表明此方法重现性良好。

2.2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h，在“2.2.1”项下方法测定盐酸小檗碱色谱峰面积。计算RSD为2.58%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.3.6 加样回收试验 精密称取已知含量（11.7136 mg/g）供试品共 6 份，各1 g，按“2.2.2”项下方法制备供试溶液，再分别精密加入盐酸小檗碱对照品适量，适当稀释后按“2.2.1”项下条件测定峰面积，计算加样回收率[6-7]。平均回收率为99.45%，RSD为1.28%。结果见表1。

2.3 正交试验优选工艺 根据单因素实验结果分析得出清膏相对密度、起模的粉水比例、干燥温度、干燥时间对溶散时限、小檗碱含量的影响更为显著，故选择这4个因素做正交试验，以溶散时限、小檗碱含量为评价指标，按照L9（34）表进行正交实验[8-9]，并按0.6∶0.4的权重系数对这 2个指标进行综合评分。结果见表2、3、4。

由表3的结果可知，各考察因素对益肾涤浊丸制备工艺影响依次为：干燥时间>相对密度>干燥温度>粉水比例，且干燥时间对工艺影响较大。从表4看出各因素影响不显著（P>0.05）。从K值可知通过正交实验优选的益肾涤浊丸制备工艺的最优水平搭配为A3B2C1D1，即干燥温度为80℃，清膏相对密度为1.15，起模的粉水比例为1∶1，干燥时间为8h。

2.4 验证实验 按实验所确定益肾涤浊丸的最优制备工艺为干燥温度为80℃，清膏相对密度为1.15，起模的粉水比例为1∶1，干燥时间8h的条件下进行验证试验，结果测溶散时限均符合2015版中国药典规定，均在1h内溶散，水丸光滑圆整，色泽鲜亮，大小均一，盐酸小檗碱含量（mg·g-1）分别为11.8925、11.2398、12.0078，平均为11.7134，RSD为1.54%。

3 讨论

泛丸的制备工序主要为粉碎、起模、成型、盖面、干燥[10]。益肾涤浊丸的原制备工艺也是用此工序，制备的成品符合中国药典中有关丸剂的规定，但没有进行最佳工艺优选研究，本次实验用正交实验筛选最佳工艺，以期得到高效实用的制备工艺。实验以溶散时限为考察指标[11-12]，溶散时限是丸剂检查的必要项目，合理的溶散时限既能保证丸剂的稳定性，又能保证丸剂的吸收利用度。本次的实验结果表明本次所制水丸的溶散时限全部符合规定。

从组方中可知小檗堿是其主要有效成分之一，其中黄柏中的小檗碱有抗病原微生物、抗炎、抗肿瘤、抗过敏、免疫调节、抗心律失常等药理作用。因此本实验同时以小檗碱含量为考察指标。由验证实验可看出该工艺所得的小檗碱含量也较高。实验结果表明益肾涤浊丸制备工艺的最优水平搭配为A3B2C1D1，即粉水比例为1∶1，相对密度为1.15，干燥温度为80℃，干燥时间8h。且各考察因素对益肾涤浊丸制备工艺影响依次为：干燥时间>相对密度>干燥温度>粉水比例。干燥时间与相对密度对工艺影响较大，二者有无相关性有待进一步研究。

参考文献

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（收稿日期：2018-03-14 编辑：陶希睿）