化血胆对急性心肌缺血大鼠保护作用实验研究

孔春芹　骆始华　李琼超　陈蓉　陈清华 张超

【摘 要】 目的：初步观察化血胆对急性心肌缺血保护作用。方法：采用pit尾静脉注射方法制备大鼠急性心肌缺血模型。将SD大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、硝酸异山梨醇酯组、复方丹参滴丸组、化血胆组。各组均在连续灌胃15d后造模，测定大鼠15、30 s，1、3、5、10、20 min心电图，腹主动脉采血，制备血清测定AST、CK、LDH、SOD、MDA含量。结果：化血胆具有抗心肌缺血的作用。J点位移与模型组比较（P<0.01），化血胆可明显降低血清心肌酶AST、CK、LDH 和MDA的含量，提高血清SOD活性（P<0.05或P<0.01）。结论：化血胆具有抗心肌缺血的作用，可能与抗氧化有关，具体作用机制还待进一步研究。

【关键词】 化血胆；心肌缺血；实验研究

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）10-0022-03

化血胆Melasma arvense （Benth.） Hand.-Mazz.为玄参科植物黑蒴属的全草，性凉、微苦，具有祛湿、平肝、散瘀活血功效，可治疗黄疸型肝炎、肝肿大、跌打伤瘀肿、痛经等[1]。民间常用于化瘀消肿，对跌打损伤、外伤等导致的淤血肿块有很好的消肿止痛之效。一般采取酒泡服用，外擦内服。化血胆药物在滇东南一带：临沧、普洱、红河、版纳、文山作为一种常用的活血化瘀药，采用方便，使用频率高，伹药物资源已不足。因此，采用现代科学方法对该药物开展初步药效实验研究，明确药效，不但能为临床用药提供理论指导，还能为开发具有自主知识产权的民族药新药提供实验依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 清洁级SD雄性大鼠40只，体重（180±30）g，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号：SCXK（川）2010-22。

1.2 药品与试剂 化血胆由云南中医学院中药学院民族医药学院冯德强教授提供，鉴定为玄参科植物黑蒴属的全草。复方丹参滴丸（天津天士力制药有限公司，批号100207），垂体后叶素（pit，天津生物化学制药有限公司，批号20090702），SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所），MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所），硝酸异山梨酯（江苏方强制药有限责任公司，批号20091129）

1.3 BL-420E生物信号采集系统（成都泰盟科技有限公司），台式低速离心机（上海电机厂）。

2 方法

2.1 动物造模 参照文献方法[2-3]制备大鼠急性心肌缺血模型。实验前一天进行pit敏感性筛选。（挑选标准：①具备Q-RS-T波群；②J点上升或ST段抬高或压低0.1mv以上，T波先高耸后低平或倒置的大鼠作为实验用鼠）。正常对照组大鼠尾静脉注射生理盐水，其余各组尾静脉注射pit 0.6U/kg，10s内匀速注射完毕。

2.2 分组及给药 将挑选出的敏感SD大鼠40只，随机分为正常组、模型组、硝酸异山梨醇酯组、复方组、化血胆组，每组8只。在正常饲养基础上，同时给予相应成分溶液连续灌胃15 d后复制模型。

2.3 检测指标

2.3.1 大鼠心电图 末次给药1.5 h后各组大鼠用10%水合氯醛0.25 mL/100 g腹腔注射，麻醉后背位固定。造模前，用BL-420E 生物信号采集系统采集II导联正常心电图5 min，造模后，分组记录各组注射pit完毕后15 s、30 s，1、3、5、10、20 min的心电图。

2.3.2 血清心肌酶（AST、CK、LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量 待大鼠心电图记录完毕后，腹主动脉取血，低速离心3 000 r/min，15 min，取血清保存于-20℃冰箱，送云南中医学院第一附属医院检测。

2.3.3 统计学方法 使用SPSS 17.0软件进行处理，所有数据均用均数加减标准差（x[TX-*3]±s）表示，采用单因素方差分析。若满足正态方差齐性，用LSD法进行分析；方差不齐时，用Tamhanes T2法。P<0.05表示差異有统计学意义。

3 结果

3.1 对大鼠急性心肌缺血心电图的影响 ①模型组与正常组比较，缺血后各时间点J点升高与正常组比较差异均有统计学意义（P<0.01），提示造模成功；②化血胆组与模型组比较具有统计学差异（P<0.01），表明药物对急性心肌缺血后20 min内都有不同程度的预防作用；③统计学与正常组比较：在急性心肌缺血后10 min、20 min后与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），提示化血胆对急性心肌缺血后期具有具有稳定、显著的保护作用。见表1。

3.2 对大鼠急性心肌缺血心率的影响 ①模型组与正常组比较，缺血后各时间点心率与正常组比较差异均有统计学意义（P<0.01）；②药物组与模型组比较：化血胆组对缺血后15s、10min与模型组比较差异具有统计学意义（P<0.05），化血胆组对缺血后（30s、1min、3min、5min、20min）pit导致的急性心肌缺血心率降低改善作用不明显。见表2。

3.3 对急性心肌缺血大鼠血清心肌酶的影响 ①模型组与正常组比较，缺血前后大鼠血清心肌酶差异有统计学意义（P<0.05），提示造模成功；②化血胆组与模型组比较，大鼠血清心肌酶差异具有统计学意义（P<0.05），化血胆对急性心肌缺血后心肌损伤具有较好的保护作用。见表3。

3.4 对急性心肌缺血大鼠超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）含量的影响 各给药组与模型组比较，SOD 及MDA差异均有统计学意义（P<0.05），表明化血胆药物对急性心肌缺血具有提高SOD活性，降低丙二醛含量，从而对心肌缺血发挥预防的保护作用。见表4。

4 讨论

心肌缺血指心脏的血液灌注减少， 导致心脏的供氧减少， 心肌能量代谢失常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态[4]。中医根据心肌缺血病理过程中所表现出的症状多将其归属于“卒心痛”、“厥心痛”等范畴。目前抗心肌缺血中药研究是中药药理研究热点之一。心肌缺血是多种心脏疾患的初始阶段， 临床上主要表现为冠心病心绞痛、心肌梗死等心肌缺血性症状，属于中医“胸痹”、“心痛”范畴。其病性总属本虚标实，心脉痹阻为发病主要病机，基本治法为活血化瘀、宣痹通阳、扶正固表等[5-6]。

心电图测量作为无创性检查手段，对心肌缺血的评估、诊断、预防等有很大帮助。血清心肌酶为多年来临床上作为心肌坏死的检测标记物，心肌缺血坏死时，细胞膜的完整性受到损害，膜的通透性增加，酶由细胞内因释放而减少，血清中酶活性增加。因此，心肌酶的检测对心肌受损程度具有一定参考价值，也可以作为心肌梗塞范围的定量指标[7]。从实验结果分析笔者可以看出，化血胆对pit所致的大鼠急性心肌缺血具有很好的保护作用， 在降低血清心肌酶含量、提高SOD活性、降低MDA含量方面具有较好的治疗作用，但其发挥作用的物质基础及作用机理还有待进一步深入、系统的研究。

参考文献

[1]云南思茅中草药选[M].云南：云南省思茅地区革命委员会，1971：162.

[2]徐叔云，卞如濂，陳修.药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社，2012：1203.

[3]陈清华，莫莉，袁肇凯，等.养心通脉方有效成分部位抗心肌缺血的实验研究[J].中华中医药学刊，2008，9（9）：1910-1912.

[4]明磊，卢丹，刘金平，等.抗心肌缺血中药有效成分研究进展[J].人参研究，2010（3）：38.

[5]张玲，中药防治心肌缺血损伤作用机制研究进展[J].辽宁中医杂志，2010，37（10）：2070.

[6]蔡光先，赵玉庸.中西医结合内科学[M].北京：中国中医药出版社，2005：198.

[7]Wang Q D，Pernow J，Sjoquist P O，et al.Pharmacological possibilities for protection against myocaedical reperfusion injury[J].Cardiovasc Res，2002，55（1）：25-37.

（收稿日期：2018-03-24 编辑：陶希睿）