槐米药材薄层色谱鉴别研究

陈菊 余春香 王珂雅 张永豪 雷晔 杨梅瑾

【摘 要】 目的：建立新的槐米薄层色谱鉴别方法。方法：以芦丁为对照品，采用硅胶G板，分别以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ）、乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1）、乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）为展开剂，喷以三氯化铝试液显色，置紫外灯（365 nm）下，检视样品中的芦丁。结果：槐米药材薄层色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，重复性好。结论：该方法简便、准确、经济，能为槐米的质量控制提供依据。

【关键词】 槐米；薄层色谱鉴别；芦丁

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2018）04-0018-03

Abstract：Objective To establish the advanced TLC method of Sophora japonica. Methods Rutin was used as the reference substance. Using silica gel G thin layer plate， the sample rutin was developed respectively with ethyl acetate - methanol - formic acid - water （5∶2：0.5∶0.5）， ethyl acetate acetone formic acid - water （5∶3∶1∶1）， ethyl acetate and acetone water （5∶3∶1）， ethyl acetate - methanol - water （4∶1∶1）.The TLC plate was sprayed with aluminum chloride solution ， thereafter rutin was detected under the uv lamp 365nm.Results In the chromatogram，the same color fluorescent spots was displayed in the corresponding position of the reference chromatogram， and the spots has good repeatability. Conclusion The method was simple，accurate and economica ， which provides references for the quality control of Flos Sophorae.

Keywords：Flos Sophorae； Thin-layer chromatography identification； Rutin

芦丁（Rutin）又名芸香苷，是一种分布广泛的黄酮类化合物，具有维生素P样生理活性[1]，主要存在于槐米、荞麦、小蓟、银杏叶、鬼针草等植物中[2-6]。槐米为豆科植物槐Sophora Japonica L.的干燥花及花蕾，主要分布在河南、山东、陕西、湖南、贵州、四川等地[7]。槐米中含有丰富的芦丁成分，其含量可达12%～20%[2]，据研究发现芦丁具有凉血止血、清肝泻火等功效，且具有抗癌防癌、抗血小板聚集、镇痛、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗过敏、抗自由基及抗氧化等多种活性[8-10]。临床将芦丁用于预防和治疗糖尿病及合并高脂血症[11]。此外，芦丁作为食品中的抗氧剂和天然食用色素。《中华人民共和国药典》2015版[8]收载槐米中芦丁的薄层色谱鉴别采用的展开剂是乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1），研究拟对芦丁薄层色谱鉴别的展开系统进行改进，选用其他展开剂代替药典方法，为生产上芦丁的鉴别提供更多的选择。通过实验，已筛选出了一种展开剂，使得供试品中所鉴别的成分斑点清晰，分离度好，重复性好，可以代替原标准用于芦丁的鉴别。现将实验报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 ZF-I型三用紫外分析仪（上海光豪分析仪器公司）；点样毛细管（上海申立玻璃仪器公司）；层析缸。

1.2 材料 硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；薄层板（自制）。甲醇、乙酸乙酯、甲酸、丙酮等均為分析纯。芦丁对照品（批号：201509，贵州省迪大科技有限公司），三氯化铝显色剂。槐米药材购于黔东南州药材公司（批号：20160201）。

2 方法

2.1 薄层板的制备 取羧甲基纤维素钠0.2～0.5 g，溶于100 mL水中，搅拌，微热使其完全溶解，再加入薄层层析硅胶G适量，沿同一方向研磨成均匀的稀糊，然后均匀地涂在预先准备好的洁净的玻璃板上，晾干。使用前110℃活化30 min，置于干燥器内备用。

2.2 供试品溶液的制备 取槐米粉碎，过筛，准确称取20 g，加0.4%的硼砂水溶液200 mL，搅拌均匀，用石灰水调pH8～9，煮沸30 min ，保持水分和pH不变，提取两次，合并滤液，用盐酸调pH2～3，抽滤，精制，烘干，得芦丁精品。称取芦丁粉末0.2 g，加甲醇5 mL，密塞，振摇10 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液制备 取芦丁对照品适量，加甲醇制成2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液，备用。

2.4 薄层层析方法

2.4.1 改进方法 照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2015版通则0502）试验，分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μL ，点于同一硅胶 G薄层板上，采用预实验筛选出的四种展开剂：A.乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5），B.乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ），C.乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1），D.乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）分别展开，取出，晾干。喷以三氯化铝试液显色，待晾干后，置紫外灯（365 nm）下检视芦丁，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结果见图1。

2.4.2 药典方法 照薄层色谱法（《中华人民共和国药典》2015版通则0502）试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各10μL ，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图2。

3 讨论

芦丁在四种展开剂中薄层鉴别见图1，与药典方法展开效果的比较见表1。由图1、图2和表1可知，选用的四种展开系统中，芦丁在展开剂A中展开的效果最好，斑点圆整且清晰，展开时间是最少的，为25 min，药典标准是20 min，展开剂B乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1 ）斑点清晰但有少许拖尾现象，展开剂C 乙酸乙酯-丙酮-水（5∶3∶1）拖尾严重，斑点模糊。

在展开剂 D 乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）中展开时间太长。综上，实验筛选出的理想展开系统为乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶2∶0.5∶0.5）。实验同时对展开环境的温度和相对湿度进行了考察，结果温度在20～25℃，相对湿度在25%～65%，供试品色谱中主要斑点的分离度较好。对改进后的方法进行了稳定性和重复性实验，稳定性实验表明，样品在6 h内进行薄层鉴别，供试品色谱中主要斑点的分离度较好，重复性实验表明，改进后的方法重复性良好。实验采用三氯化铝的乙醇溶液作为显色剂。中药分析中，三氯化铝是广泛应用于黄酮类成分定性、定量分析的显色剂，能与芦丁成分显色并产生荧光。可用于本研究中槐米芦丁的薄层层析鉴别。

研究对展开剂的种类及配比进行了大量摸索。尝试乙酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶3）、甲醇-水、丙酮-水作为展开剂，结果显示展开结果无显著差异，而且展开速度很慢，其中乙酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶3）有分层现象。最终选用乙酸乙酯-甲醇—甲酸-水为展开剂，比例5∶2∶0.5∶0.5为佳，分离效果好，斑点Rf值适宜。与药典原标准相比较，实验筛选出的展开剂系统中乙酸乙酯、甲酸的用量都减少，不仅不会影响槐米中芦丁的鉴别，还节约了成本，同时减少有机溶剂对环境的污染，有着更广泛的应用意义，可替代原標准用于槐米芦丁的薄层鉴别。

参考文献

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