载脂蛋白E基因多态性与Alzheimer病和血管性痴呆的关系研究

邢丽菲，王 敏，檀素娟，王艳红*

（内蒙古科技大学包头医学院第三临床医学院（内蒙古北方重工业集团有限公司医院），内蒙古 包头 014030）

在老年期痴呆疾病中，发病率最高的是血管性痴呆疾病和Alzheimer病，载脂蛋白E基因是散发性、迟发性Alzheimer病最主要的遗传易感因素，也是作为影响人体老化的重要因素，还是脑血管疾病、动脉粥样硬化的易患病因素，还与人体认知功能存在紧密的相关性，本文主要对Alzheimer病、血管性痴呆疾病的载脂蛋白E基因多态性进行分析和检测，并与健康人群进行对比，从而探讨两者之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年2月～2018年2月我院住院以及门诊收治的血管性痴呆患者80例（VD组）与Alzheimer病患者75例（AD组）作为研究对象，均符合语言机能障碍、美国神经病学、AD以及VD疾病的临床诊断标准，另选取健康人群120例作为正常组。其中，VD组女32例，男48例，年龄58～84岁，平均年龄（72.4±1.41）岁，病程1.4～6.5年，平均病程（4.29±1.25）年，排除缺血缺氧性脑病史、遗传性血管病者，所有患者均合并动脉粥样硬化性脑血管疾病；AD组男42例，女33例，年龄64～80岁，平均年龄（73.5±4.96）岁，病程2.2～8.3年，平均病程（4.96±1.42）年；正常组女69例，男51例，年龄61～85岁，平均年龄（71.6±8.22）岁，排除糖尿病、脑血管病、认知功能障碍者。三组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＜0.05）。

1.2 方法

①提取DNA：取全部参研样本5 mL静脉血，抗凝处理后，提取血液中外周血白细胞基因组DNA[1]；②载脂蛋白E基因多态性检测：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法进行检测，采用ABIPE公司生产的9700型PCR仪器，在25 μL PCR反应体系中主要包含了25 μL 10×PCR反应缓冲液，0.5 μL DMSO，0.5 μL下游引物和上游引物（50 μmol/L），0.5～1 μg DNA模板，25 μL MgCl2（25 mmol/L），Phamacia公司生产的1.5 μL dNTPs（2 mmol/L），欣经科生物技术公司生产的1UTaq DNA聚合酶。载脂蛋白E基因进行酶解、PCR扩增以及电泳检测（使用北京六一仪器厂生产的垂直电泳仪，配合Bio-Rad公司生产的凝胶成像系统进行检测），根据载脂蛋白E基因扩增的产物进行多态分析[2]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以“±s”表示，采用t检验；计数资料以百分数（%）表示，采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 载脂蛋白E基因频率

AD组、VD组携带ε4基因型的频率高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05），但VD组和AD组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 3组载脂蛋白E基因频率对比 [n（%）]

2.2 载脂蛋白E等位基因频率

VD组ε2、ε3、ε4等位基因频率分别为5.1%、74.2%、20.6%，AD组ε2、ε3、ε4等位基因频率依次为6.2%、76.1%、17.8%，正常组依次为10.4%、84.2%、5.8%，正常组ε4等位基因频率低于VD组、AD组，差异有统计学意义（P＜0.05），AD组与VD组ε4等位基因频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2 讨 论

散发性或家族性Alzheimer病中一个至关重要的危险因素是载脂蛋白Eε4等位基因，β淀粉样蛋白能够与载脂蛋白E进行结合，呈现出特异性，且ε4的特异性小于ε3、ε2的特异性[3]。人体神经元在摄取载脂蛋白E受体的同时，还将摄入Aβ，从而减少了细胞的外毒性。从超微结构以及细胞免疫研究结果发现，轴突中载脂蛋白Eε4和神经元细胞体能够抑制轴突生长，引起微管解聚，细胞微管蛋白在经过载脂蛋白Eε4处理后会变少[4]。载脂蛋白Eε4能够阻止重建正常神经元，同时还能够加快聚集成神经原纤维缠结的速度和双螺旋丝的形成，同样的载脂蛋白E与胆碱能神经元损害和脑淀粉样血管病变的关系较为密切。非痴呆性认知功能障碍会受到载脂蛋白Eε4的影响，同样载脂蛋白Eε4也是认知功能障碍的重要危险因素[5]。

综上，载脂蛋白E基因多态性可能是血管性疾病以及脑病变疾病中的相关因素之一，与痴呆疾病的关系需要更多的研究进行证实。