实时荧光定量PCR在HPV检测中的应用研究

王景芬

（赤峰市松山区妇幼保健所检验科，内蒙古 赤峰 024005）

人乳头瘤病毒（HPV）是与女性患者宫颈病变甚至癌变直接相关的一类病毒，持续感染会增加宫颈癌发生率[1]，HPV感染患者早期多无特异性表现，因而实时早期筛查的价值较高。目前临床常用的筛查手段有实时荧光定量PCR、第二代杂交捕获法、酶切信号放大法等，其中实时荧光定量PCR在HPV检测中的应用愈发广泛，本次研究就其在HPV检测中的应用进行研究分析，为临床检验工作提供部分参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年6月～2018年2月我院接诊的宫颈病变患者180例作为研究对象，年龄25～50岁，平均（38.59±4.32）岁，均未合并其他生殖系统疾病者，且就本次研究签署知情同意书。按照患者的就诊编号将其随机分为观察组与对照组，各90例，两组患者一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

对所有患者均实施阴道镜病理学活检后实施HPV DNA检测。

1.2.1 对照组

给予杂交捕获Ⅱ代法检测，采用试剂盒对待检标本进行解链、杂交，获取的杂交链与特异性抗体结合后进行信号放大与发光处理，对获取的光强度对DNA-RNA杂交链含量进行定量检测。

1.2.2 观察组

给予荧光定量PCR检测，采用HPV核酸分型检测试剂盒，对宫颈细胞进行HPV DAN检测，将特异性引物与探针与靶序列结合，同时在Taq酶引导下复制，水解探针后形成FAM荧光基团，其与DNA复制合成情况相关，一条DNA链的合成与一次荧光相对应，一次进行DNA复制的定量检测。

1.3 观察指标

对两组患者的HPV阳性检出率、特异度及敏感度进行比较分析，其中特异度=真阴性/（真阴性＋假阳性）×100%；敏感度=真阳性/（真阳性＋假阴性）×100%[2]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行处理，计数资料以百分数（%）表示，采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者HPV，DNA阳性检出率比较

两组患者HPV，DNA阳性检出率分别为观察组93.98%，对照组81.93%，组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05），实时荧光定量PCR的阳性检出率显著高于杂交捕获Ⅱ代法，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者HPV，DNA阳性检出率比较 [n（%）]

2.2 两组患者检测结果的特异度及敏感度比较

观察组患者检测的特异度及敏感度分别为83.21%，92.35%，对照组分别为76.69%，81.93%，组间比较观察组均显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者检测的特异度及敏感度比较（%）

3 讨 论

HPV病毒根据其DNA排序有多种分型，目前有超40中HPV，DNA分型与女性生殖系统感染相关，严重时易引发宫颈癌变，直接威胁患者生命安全。临床诊断多有赖于病理学活检，HPV的早期筛查多采用第二代杂交捕获法、酶切信号放大法等方法。本次研究就实施荧光定量PCR检测与以往常用的第二代杂交捕获法的应用效果进行比较，结果显示实时荧光定量PCR检测在PCR DNA检测方面，从阳性检出率、敏感度及特异度等方面比较，均显著优于第二代杂交捕获法，由此可见与过去常用的检验方法比较，实时荧光定量PCR检测在早期诊断方面的优势较高，临床推广及普及的价值较大。